本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種工藝先進(jìn)、質(zhì)量穩(wěn)定、劑量精準(zhǔn)、使用安全、微生物限度合格的高純度蟾酥直接口服飲片及其制備方法。
背景技術(shù)：
蟾酥(bufonisvenenum)為蟾蜍科動(dòng)物黒眶蟾蜍(bufomelanositictusschneider)或中華大蟾蜍(bufobufogargarizanscantor)的干燥分泌物(中華人民共和國藥典第一部2015年版)。蟾酥始載于已經(jīng)失傳的唐朝本草《藥性論》，原名蟾蜍眉脂。具有解毒，止痛，開竅醒神之功效，用于癰疽療瘡，咽喉腫痛，中暑神昏，痧脹腹痛吐瀉。多入丸散用。外用適量。
蟾酥中含有大量的蟾蜍二烯內(nèi)酯(bufadienolide)類化合物，如蟾毒它靈(bufotalin)、蟾毒靈(bufalin)、華蟾酥毒基(cinobufagin)、脂蟾毒配基(resibufogenin)等，它們是蟾蜍漿液、蟾酥的主要有效成分，是蟾酥強(qiáng)心、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗炎以及抗腫瘤與抗輻射作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，2015版中國藥典一部規(guī)定了蟾酥中華蟾酥毒基及脂蟾毒配基的總量不得低于6.0％。蟾酥的炮制方法有酒制、乳制、醋制、焙制等。中國藥典規(guī)定的炮制方法為“取蟾酥，搗碎，加白酒浸漬(蟾酥：白酒＝1:2)，時(shí)常攪動(dòng)至呈稠膏狀，干燥，粉碎?！薄Ｔ撆谥品椒ㄖ械膿v碎操作比較原始，不適合批量生產(chǎn)，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且粒徑不均勻，所以只能采用時(shí)常攪動(dòng)才能促進(jìn)滲透以達(dá)到完全浸潤的目的，且該炮制方法沒有規(guī)定炮制溫度、時(shí)間和乙醇濃度等工藝參數(shù)，具體操作時(shí)隨意性大，產(chǎn)品質(zhì)量差異顯著。由于蟾酥含有多種蟾毒內(nèi)酯、吲哚堿、甾醇、腎上腺素、多糖、蛋白等化學(xué)成分，在加熱過程中多數(shù)化學(xué)化學(xué)成分會(huì)受到破壞，內(nèi)酯環(huán)如在一定的加熱條件下可轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的反鄰羥基桂皮酸鹽，導(dǎo)致內(nèi)酯類有效成分分解而降低療效。蟾酥炮制的目的是在保證療效的前提下降低毒性和刺激性?！扼杆仲|(zhì)量分析及其炮制前后指紋圖譜研究》優(yōu)化得出的蟾酥酒制最佳工藝是：加入2倍量55％乙醇(白酒)，在60℃炮制12小時(shí)，干燥，粉碎，結(jié)果炮制后蟾酥有效成分總含量下降了約20％。這種炮制方法雖然降低了毒性，但是也犧牲了1/5左右的有效成分，降低了療效。發(fā)明專利cn201610397030.x公開了一種單劑量包裝蟾酥及其制備方法，取中華大蟾蜍或黑框蟾蜍耳后腺、皮膚腺的白色漿液，過篩除去雜質(zhì)，低溫干燥，粉碎得蟾酥粉。按照華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量0.08～10mg的成人單次服用劑量進(jìn)行單劑量包裝，裝量差異限度以單劑量包裝中蟾酥凈重量1～100mg計(jì)小于等于±15％。該小包裝蟾酥適用于中藥湯劑、丸劑、散劑以及外用。該專利未涉及蟾酥的炮制工藝優(yōu)化和直接口服飲片的制備。
蟾酥采集于爬行在田間路邊的活體蟾蜍，不可避免的帶入泥土、細(xì)沙石、枯枝敗葉等雜質(zhì)，以及寄生蟲和大量微生物，且常規(guī)采集操作缺乏清潔消毒等衛(wèi)生措施，造成了蟾酥的灰分、酸不溶性灰分和微生物超標(biāo)。如果沒有在符合《藥品質(zhì)量管理規(guī)范》規(guī)定的d級(jí)潔凈區(qū)生產(chǎn)條件下進(jìn)行生產(chǎn)，并采取消毒和去除雜質(zhì)等工藝，蟾酥產(chǎn)品的是不符合直接口服飲片標(biāo)準(zhǔn)，不能直接口服。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種工藝先進(jìn)、生產(chǎn)過程可控、質(zhì)量穩(wěn)定、劑量精準(zhǔn)、療效確切、使用安全、微生物限度合格的蟾酥直接口服飲片及其制備方法。按照本發(fā)明的炮制工藝生產(chǎn)供直接口服的蟾酥，其雜質(zhì)含量大幅下降，灰分、酸不溶性灰分、和微生物指標(biāo)大幅下降，產(chǎn)品純度顯著提高，且采用精密過濾和超微粉碎工藝進(jìn)一步提高了蟾酥粉在水中分散性，提高了產(chǎn)品的生物利用度和臨床療效。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
一種高純度蟾酥直接口服飲片，該直接口服飲片為單劑量包裝，規(guī)格1～60mg，蟾酥粉粒徑小于等于50目；按干燥品計(jì)算，含蟾毒靈、華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的總量不得少于6.5％(g/g)；總灰分不得過5.0％，酸不溶性灰分不得過2.0％；產(chǎn)品中不得檢出沙門菌(10g)，耐膽鹽革蘭陰性菌小于10000cfu(1g)。優(yōu)選單劑量包裝蟾酥粉的規(guī)格為2-20mg，粒徑小于等于100目；按干燥品計(jì)算，含蟾毒靈、華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的總量不得少于8.0％(g/g)；總灰分不得過2.5％，酸不溶性灰分不得過1.0％；需氧菌總數(shù)≤1000cfu/g，霉菌和酵母菌總數(shù)≤100cfu/g，不得檢出大腸埃希菌(1g)和沙門菌(10g)，耐膽鹽革蘭陰性菌小于100cfu(1g)。
上述高純度蟾酥直接口服飲片的制備方法包括以下步驟：
1)檢測(cè)：取鮮蟾酥或蟾酥藥材，按《中華人民共和國藥典》一部蟾酥質(zhì)量標(biāo)
準(zhǔn)檢測(cè)；
2)一次粉碎：將檢驗(yàn)合格的蟾酥藥材敲打、碾壓或粉碎過10～100目篩制成蟾酥粉；
3)酒制：在鮮蟾酥或蟾酥粉中加入1～10倍量乙醇體積百分濃度為30～70％的白酒或30～95％的乙醇水溶液，攪拌至均勻無硬塊，在0～80℃條件下炮制72～0.1小時(shí)；
4)過濾：壓濾過100～200目篩和/或精密過濾器以除去雜質(zhì)；
5)干燥：將蟾酥乙醇液倒入托盤內(nèi)，置干燥箱中干燥；
6)二次粉碎：粉碎成50目以下的蟾酥粉；
7)精密分裝：按照單次服用劑量，采用精密分析天平或全自動(dòng)精密分裝機(jī)分裝；
8)外包裝：打印批號(hào)，貼標(biāo)簽，裝盒，放入說明書，裝箱，打包，即得成品；
9)成品檢驗(yàn)：按照《中華人民共和國藥典》一部蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和四部0100制劑通則中0115散劑通則進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)。需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)按照《中華人民共和國藥典》四部中“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法(通則1105)”檢查；大腸埃希菌、沙門氏菌等控制菌按照《中華人民共和國藥典》四部中“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法(通則1106)”檢查，結(jié)果按照《中華人民共和國藥典》四部中“非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)(通則1107)進(jìn)行判定。合格成品入庫銷售。
上述制備方法中檢測(cè)的蟾酥有效成分至少包括蟾毒靈、華蟾酥毒基和脂蟾毒配基，炮制后蟾酥與蟾酥原藥材相比兩種有效成分之和的比值大于0.95。
上述制備方法中步驟2)～7)或步驟3)～7)在符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的口服固體制劑潔凈車間中進(jìn)行，該潔凈車間的潔凈度達(dá)到d級(jí)潔凈區(qū)或d級(jí)以上潔凈區(qū)標(biāo)準(zhǔn)。d級(jí)潔凈區(qū)的設(shè)置要求達(dá)到100000級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，具體條件包括溫度18～26℃；空氣相對(duì)濕度45～60％；靜態(tài)條件下≥0.5μm的懸浮粒子最大允許數(shù)/m3為3520000，≥5.0μm的懸浮粒子最大允許數(shù)/m3為29000；動(dòng)態(tài)條件下浮游菌≤200cfu/m3，沉降菌(φ90mm)≤100cfu/4小時(shí)；房間換氣次數(shù)≥15次/小時(shí)；相對(duì)于一般生產(chǎn)區(qū)的壓差≥10pa。
蟾酥物料從一般生產(chǎn)區(qū)送入緩沖間后脫去最外層的外包裝或?qū)ν獍b進(jìn)行消毒，并經(jīng)5-60分鐘的紫外消毒后進(jìn)入d級(jí)潔凈區(qū)。
上述制備方法中步驟2)、6)、7)在相對(duì)負(fù)壓、回風(fēng)直排的d級(jí)潔凈車間或潔凈通風(fēng)柜中進(jìn)行。
上述制備方法中制備步驟3)酒制的工藝參數(shù)為加入的白酒或乙醇水溶液中乙醇的體積濃度為50～70％，加入重量為鮮蟾酥或蟾酥粉重量的2～5倍，炮制的溫度為20～60℃，時(shí)間為12～1小時(shí)。
上述制備方法中制備步驟5)的干燥方法和關(guān)鍵工藝參數(shù)為噴霧干燥進(jìn)風(fēng)溫度100～170℃、出風(fēng)溫度50～120℃；真空干燥30～80℃；微波干燥40～100℃；電熱干燥40～100℃；遠(yuǎn)紅外干燥40～100℃；蒸汽干燥40～100℃；冷凍干燥預(yù)凍物料溫度-60～-20℃、升華干燥物料溫度-60～-20、解析干燥物料溫度-20～60℃。干燥方法優(yōu)選噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥中的一種或幾種，其對(duì)應(yīng)的關(guān)鍵工藝參數(shù)分別為噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度100～140℃、出風(fēng)溫度50～90℃；冷凍干燥的物料溫度為-40～40℃；真空干燥的溫度為40～60℃，時(shí)間4～0.5小時(shí)。
上述制備方法中制備步驟4)所述的精密過濾器的過濾孔直徑為0.2～100μm。
上述制備方法中制備步驟6)所述的超細(xì)粉采用氣流粉碎機(jī)、震動(dòng)磨、雷蒙磨或球磨機(jī)超微粉碎得到小于200目的超細(xì)粉。
上述制備方法中制備步驟7)采用的單劑量包裝容器包括玻璃瓶、塑料瓶、金屬罐、塑料袋、紙袋、鋁塑包裝和雙鋁包裝中的一種或幾種。
本發(fā)明制備的蟾酥直接口服飲片具有以下效果：
1、蟾酥是毒性藥材，安全性是其第一要素，采用經(jīng)精密分裝的單劑量包裝，優(yōu)選單次服用劑量2-20mg，劑量準(zhǔn)確，安全性好；
2、酒制后經(jīng)過過濾，優(yōu)選100-200目篩和/或0.2-100μm精密過濾器過濾，進(jìn)一步除去了產(chǎn)品中的不溶性的泥沙、枯枝敗葉的碎片、寄生蟲及其蟲卵等雜質(zhì)，產(chǎn)品純度更高，有效成分含量明顯提高，灰分和酸不溶性灰分明顯降低，且在水中的溶解分散的性能更好，水溶液澄清透明，無顆粒性沉淀。
3、蟾酥粉尤其是超細(xì)粉的比表面積大，具有非常強(qiáng)的引濕性，且劑量非常小，在微生物和溫濕度均得到有效控制的d級(jí)潔凈區(qū)生產(chǎn)，杜絕了產(chǎn)品分裝過程中因吸潮而造成產(chǎn)品結(jié)塊現(xiàn)象，確保了產(chǎn)品的質(zhì)量和效期內(nèi)的質(zhì)量穩(wěn)定性，且產(chǎn)品微生物指標(biāo)符合直接口服藥品標(biāo)準(zhǔn)，可以直接口服，省去了煎藥的麻煩。
4、蟾酥的有效成分為蟾毒靈、華蟾酥毒基和酯蟾毒配基等蟾蜍二烯內(nèi)酯類化合物，其內(nèi)酯環(huán)容易開環(huán)而降解，我們通過控制炮制工序和干燥工序的溫度和時(shí)間，最大限度地保留了蟾酥有效成分的活性，確保華蟾酥毒基和酯蟾毒配基降解率小于5％，保證了產(chǎn)品有效成分含量和療效。
具體實(shí)施方式
下面給出本發(fā)明較佳實(shí)施例，以詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
實(shí)施例1
取蟾酥藥材1kg，按《中華人民共和國藥典》蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格的蟾酥運(yùn)送至直接口服飲片生產(chǎn)車間，在外清間對(duì)其外包裝表面進(jìn)行75％乙醇消毒處理，送入緩沖室，紫外消毒5分鐘，送入d級(jí)潔凈車間進(jìn)行生產(chǎn)。將蟾酥藥材粉碎成過10目的最粗粉，在蟾酥粉中加入2倍量(g/g)酒精度數(shù)為52％(v/v)的白酒，攪拌至均勻無硬塊，在40℃炮制6小時(shí)，壓濾過100目篩以除去雜質(zhì)。將蟾酥乙醇液倒入托盤內(nèi)，置真空干燥箱中于40℃減壓干燥4小時(shí)，粉碎過50目，按照單次服用劑量1mg/袋，采用精密分析天平精密稱量分裝，封口。打印批號(hào)，貼標(biāo)簽，裝盒，放入說明書，裝箱，打包，得成品。
實(shí)施例2
取蟾酥藥材1kg，按《中華人民共和國藥典》蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格的蟾酥運(yùn)送至直接口服飲片生產(chǎn)車間，在外清間脫去外包裝，送入緩沖室，紫外消毒15分鐘，送入d級(jí)潔凈車間進(jìn)行生產(chǎn)。將蟾酥藥材粉碎成過50目的粗粉，在蟾酥粉中加入5倍量(g/g)38％乙醇濃度的白酒，攪拌至均勻無硬塊，在20℃炮制12小時(shí)，壓濾過150目篩和50μm精密過濾器以除去雜質(zhì)。將蟾酥乙醇液倒入托盤內(nèi)，置電熱烘箱中于70℃干燥3小時(shí)，粉碎成150目以下的極細(xì)粉，按照單次服用劑量20mg/瓶，采用精密全自動(dòng)微量分裝機(jī)分裝，旋蓋密封。打印批號(hào)，貼標(biāo)簽，裝盒，放入說明書，裝箱，打包，得成品。
實(shí)施例3
取蟾酥藥材1kg，按《中華人民共和國藥典》蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格的蟾酥運(yùn)送至直接口服飲片生產(chǎn)車間，在外清間對(duì)其外包裝表面進(jìn)行75％乙醇消毒處理，送入緩沖室，紫外消毒30分鐘，送入d級(jí)潔凈車間進(jìn)行生產(chǎn)。將蟾酥藥材粉碎成過100目的最細(xì)粉，在蟾酥粉中加入10倍量(g/g)30％(v/v)乙醇水溶液，在80℃攪拌0.1小時(shí)至均勻無硬塊，壓濾過200目篩和0.2μm精密過濾器以除去雜質(zhì)。將蟾酥乙醇液倒入托盤內(nèi)，置干燥箱中于100℃蒸汽干燥1小時(shí)，粉碎過40目，再次氣流粉碎制成500目以下的超細(xì)粉，按照單次服用劑量60mg/袋，采用精密分析天平精密稱量分裝，封口。打印批號(hào)，貼標(biāo)簽，裝盒，放入說明書，裝箱，打包，得成品。
實(shí)施例4
取新鮮蟾酥2kg，按《中華人民共和國藥典》蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)，新鮮蟾酥折干后計(jì)算含量，檢驗(yàn)合格的運(yùn)送至直接口服飲片生產(chǎn)車間，在外清間脫去外包裝，送入緩沖室，紫外消毒45分鐘，送入d級(jí)潔凈車間。在新鮮蟾酥中加入1倍量(g/g)95％(v/v)乙醇水溶液，攪拌至均勻無硬塊，置恒溫箱中于60℃炮制1小時(shí)，壓濾過120目篩以除去雜質(zhì)。將蟾酥乙醇液倒入托盤內(nèi)，置干燥箱中于60℃減壓干燥2小時(shí)，粉碎過100目制成最細(xì)粉，按照單次服用劑量15mg/瓶，采用全自動(dòng)精密分裝機(jī)封裝，選蓋密封。打印批號(hào)，貼標(biāo)簽，裝盒，放入說明書，裝箱，打包，得成品。
實(shí)施例5
取新鮮蟾酥藥材2kg，按《中華人民共和國藥典》蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)，新鮮蟾酥折干后計(jì)算含量，檢驗(yàn)合格的運(yùn)送至直接口服飲片生產(chǎn)車間，在外清間對(duì)其外包裝表面進(jìn)行75％乙醇消毒處理，送入緩沖室，紫外消毒20分鐘，送入d級(jí)潔凈車間進(jìn)行生產(chǎn)。在新鮮蟾酥中加入2倍量(g/g)80％(v/v)乙醇水溶液，攪拌至均勻無硬塊，在室溫炮制24小時(shí)，壓濾過100μm精密過濾器以除去雜質(zhì)。將蟾酥乙醇液倒入托盤內(nèi)，置干燥箱中于80℃減壓干燥0.5小時(shí)，粉碎過200目以下的極細(xì)粉，按照單次服用劑量10mg/袋，采用精密分析天平精密稱量分裝，封口。打印批號(hào)，貼標(biāo)簽，裝盒，放入說明書，裝箱，打包，得成品。
實(shí)施例6
取新鮮蟾酥2kg，按《中華人民共和國藥典》蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)，新鮮蟾酥折干后計(jì)算含量，檢驗(yàn)合格的運(yùn)送至直接口服飲片生產(chǎn)車間，在外清間脫去外包裝，送入緩沖室，紫外消毒60分鐘，送入d級(jí)潔凈車間進(jìn)行生產(chǎn)。在新鮮蟾酥中加入5倍量(g/g)酒精度為50％(v/v)的白酒，攪拌至均勻無硬塊，在0℃炮制72小時(shí)，壓濾過50μm精密過濾器以除去雜質(zhì)。將蟾酥乙醇液倒入托盤內(nèi)，室溫放置一段時(shí)間，置冷凍干燥機(jī)中預(yù)冷凍至物料溫度-60℃，于物料溫度-60～-20℃進(jìn)行升華干燥至水分小于10％，于物料溫度-20～40℃進(jìn)行解析干燥，粉碎過150目以下的極細(xì)粉，按照單次服用劑量50mg/瓶，采用精密全自動(dòng)分裝機(jī)進(jìn)行分裝，旋蓋密封。打印批號(hào)，貼標(biāo)簽，裝盒，放入說明書，裝箱，打包，得成品。
對(duì)照實(shí)施例1
取蟾酥100g，按《中華人民共和國藥典》蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格的蟾酥按照發(fā)明專利《一種單劑量包裝蟾酥及其制備方法》(專利號(hào)為cn201610397030.x)實(shí)施例1制備蟾酥粉：在毒性飲片車間一般生產(chǎn)區(qū)中粉碎過100目，得蟾酥最細(xì)粉。用精度為0.01mg的分析天平，按照華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的總量為1.00mg精密稱取蟾酥粉15.00mg，分裝于小玻璃瓶中，旋蓋密封，即得單劑量包裝蟾酥。
取上述實(shí)施例1～6制備的直接口服飲片蟾酥粉和對(duì)照實(shí)施例1制備的普通飲片蟾酥粉，按照《中華人民共和國藥典》一部蟾酥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和四部0100制劑通則0115散劑進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)。采用薄膜過濾法消除供試品抑菌活性后進(jìn)行微生物限度檢查。需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)按照《中華人民共和國藥典》四部“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法(通則1105)”檢查；沙門菌、耐膽鹽革蘭陰性菌等控制菌按照《中華人民共和國藥典》四部“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法(通則1106)”檢查，檢查結(jié)果按照《中華人民共和國藥典》四部“非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)(通則1107)進(jìn)行判定。結(jié)果顯示按照本發(fā)明實(shí)施例1～6制備的單劑量包裝蟾酥直接口服飲片的全部指標(biāo)均合格，而按照對(duì)照實(shí)施例1制備的單劑量包裝蟾酥的霉菌、酵母菌總數(shù)和需氧菌總數(shù)不合格，詳見表1。取按照實(shí)施例2和對(duì)照實(shí)施例制備的產(chǎn)品，于溫度40±2℃，相對(duì)濕度75±5％條件下放置6個(gè)月，在0、1、2、3、6個(gè)月末取樣檢驗(yàn)外觀、水分以及蟾毒靈、華蟾素毒基和酯蟾毒配基含量，加速穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見表2。結(jié)果表明水分含量對(duì)于有效成分含量有一定的影響，按對(duì)照實(shí)施例1制備的樣品，已經(jīng)產(chǎn)生結(jié)塊現(xiàn)象，且有效成分含量在穩(wěn)定性考察期間逐漸降低，至6個(gè)月的穩(wěn)定性考察完成時(shí)三個(gè)有效成分的含量之和下降了20％以上。
以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明內(nèi)涵和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。
表1高純度蟾酥直接口服飲片質(zhì)量檢驗(yàn)結(jié)果
表2加速穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果