本發明屬于生物，具體涉及一種l型鈣離子通道抑制劑在抗豬腸道冠狀病毒感染中的應用。

背景技術：

1、豬腸道冠狀病毒(swine?enteric?coronaviruses，secs)是一類主要感染豬小腸絨毛腸上皮細胞的病毒，主要包括傳染性胃腸炎病毒(tgev)、豬流行性腹瀉病毒(pedv)、豬丁型冠狀病毒(pdcov)等。secs具有相似的基因組結構，可引起豬只出現腹瀉、嘔吐、食欲不振和脫水等難以區分的臨床癥狀。尤其在哺乳仔豬中，tgev和pedv可能導致高達100％的死亡率，對養豬業造成了巨大的經濟損失。

2、secs的流行特點表現為多種病毒株的共存與遺傳多樣性，這對現有疫苗的保護力構成了挑戰。盡管已開發出多種針對tgev和pedv病毒的疫苗，但對pdcov尚無商業化疫苗可用。疫苗保護力不足、免疫抑制性疾病的存在以及新興變異株的抗原性變化等因素導致secs在豬群中持續流行。目前暫無針對豬腸道冠狀病毒有效的廣譜抗病毒藥物上市，研制出一種可同時抑制pedv、tgev和pdcov的廣譜抗病毒藥物用于防治豬病毒性腹瀉病，對養豬業具有重要意義。

3、電壓門控鈣離子通道(voltage-gated?calcium?channels，vgcc或cav)是一類控制鈣離子跨膜進出細胞的跨膜蛋白，其在基因表達、神經遞質釋放、肌肉收縮等生理過程發揮重要作用。按照鈣離子電流門控特性分類，cav可分為l型、p/q型、n型、r型和t型，目前針對l型鈣離子通道已經有多種上市藥物，主要分為二氫吡啶類(硝苯地平、氨氯地平和樂卡地平)、苯基烷基類(維拉帕米)以及二氮類(地爾硫卓)，這些藥物主要在治療精神疾病或心律失常等方面發揮作用。據報道，鈣離子或電壓門控鈣離子通道在介導多種病毒的入侵過程發揮重要作用，但尚無現有技術將其用于豬腸道冠狀病毒感染的防治。

4、部分現有技術對用于治療豬腸道冠狀病毒感染的藥物展開了研究。例如，公開號為cn117562887b的發明專利公開了一種4-辛基衣康酸在制備治療豬腸道冠狀病毒感染藥物和/或飼料添加劑中的應用。該發明研究發現，4-辛基衣康酸對豬腸道冠狀病毒在復制階段具顯著的抑制作用，當濃度在0.25mm～0.4mm之間沒有表現出細胞毒性，且抗病毒效果與濃度成正比。又如，公開號為cn113018296b的發明專利公開了褪黑素在抗豬冠狀病毒方面的應用，其作用機制為褪黑素抑制病毒的入侵過程。其研究發現，褪黑素在胞內水平上具有抑制tgev、pedv和pdcov的作用。

技術實現思路

1、有鑒于此，為克服現有的豬冠狀病毒防治技術的不足，本發明對抗豬腸道冠狀病毒藥物展開了研究。本發明研究發現，維拉帕米等l型鈣離子通道抑制劑對tgev、pedv和pdcov等豬腸道冠狀病毒具有廣譜抗病毒活性；并且該藥物主要阻礙了病毒的入侵階段，這說明維拉帕米等l型鈣離子通道抑制劑具有開發為治療豬腸道冠狀病毒感染的藥物的潛力。

2、本發明的目的之一在于提供一種l型鈣離子通道抑制劑在制備用于預防和/或治療豬腸道冠狀病毒感染的產品中的應用。

3、為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

4、l型鈣離子通道抑制劑在制備用于預防和/或治療豬腸道冠狀病毒感染的產品中的應用。

5、進一步，所述豬腸道冠狀病毒包括傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬丁型冠狀病毒中的任一種或多種。

6、進一步，所述l型鈣離子通道抑制劑包括維拉帕米、尼卡地平、尼莫地平中的任一種或多種。

7、作為優選，所述l型鈣離子通道抑制劑為維拉帕米。

8、進一步，所述產品包括藥物、飼料添加劑、疫苗中的任一種或多種。

9、進一步，所述l型鈣離子通道抑制劑的終濃度為0.1～1000μm。

10、作為優選，所述維拉帕米的終濃度為1～100μm，和/或所述尼卡地平的終濃度為1～200μm，和/或所述尼莫地平的終濃度為1～200μm。

11、作為優選，所述維拉帕米的終濃度為1～50μm，和/或所述尼卡地平的終濃度為1～100μm，和/或所述尼莫地平的終濃度為1～100μm。

12、作為更優選，所述維拉帕米的終濃度為25～50μm，和/或所述尼卡地平的終濃度為25～100μm，和/或所述尼莫地平的終濃度為25～100μm。

13、進一步，所述l型鈣離子通道抑制劑呈現計量依賴性的方式抑制病毒感染或細胞病變。

14、作為優選，所述細胞包括綠猴腎細胞、豬睪丸細胞、豬空腸上皮原代細胞中的任一種或多種。

15、本發明的目的之二在于提供一種l型鈣離子通道抑制劑在制備用于抑制豬腸道冠狀病毒感染早期病毒入侵的產品中的應用。

16、為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

17、l型鈣離子通道抑制劑在制備用于抑制豬腸道冠狀病毒感染早期病毒入侵的產品中的應用，所述豬腸道冠狀病毒包括傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬丁型冠狀病毒中的任一種或多種；所述l型鈣離子通道抑制劑包括維拉帕米、尼卡地平、尼莫地平中的任一種或多種；所述產品包括藥物、飼料添加劑、疫苗中的任一種或多種。

18、作為優選，所述l型鈣離子通道抑制劑為維拉帕米。

19、本發明的有益效果在于：

20、本發明首次提供了一種l型鈣離子通道抑制劑在抗豬腸道冠狀病毒感染中的應用，開拓了維拉帕米等l型鈣離子通道抑制劑在豬腸道冠狀病毒防治方面的新領域。本發明前期利用l型鈣離子通道抑制劑處理幾種豬腸道冠狀病毒易感細胞(vero、st及豬空腸上皮原代細胞)發現，pedv、tgev、pdcov等豬腸道冠狀病毒的感染能力受到顯著抑制作用。進一步研究發現，verapamil主要在豬腸道冠狀病毒感染1h以內發揮作用，說明verapamil主要阻礙了病毒的入侵過程。為模擬verapamil體內對豬腸道冠狀病毒感染的抑制效果，本發明在豬體內分離的空腸原代上皮細胞進行了verapamil抗病毒活性驗證，結果發現verapamil也可顯著阻礙豬腸道冠狀病毒感染，該研究結果表面，verapamil除了在治療高血壓和心律失常等方面發揮重要作用以外，也具有開發為抑制pedv、tgev和pdcov等豬腸道冠狀病毒的抗病毒藥物的潛力。

技術特征：

1.l型鈣離子通道抑制劑在制備用于預防和/或治療豬腸道冠狀病毒感染的產品中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述豬腸道冠狀病毒包括傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬丁型冠狀病毒中的任一種或多種。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述l型鈣離子通道抑制劑包括維拉帕米、尼卡地平、尼莫地平中的任一種或多種。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述產品包括藥物、飼料添加劑、疫苗中的任一種或多種。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述l型鈣離子通道抑制劑的終濃度為0.1～1000μm。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述維拉帕米的終濃度為1～100μm，和/或所述尼卡地平的終濃度為1～200μm，和/或所述尼莫地平的終濃度為1～200μm。

7.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述l型鈣離子通道抑制劑呈現計量依賴性的方式抑制病毒感染或細胞病變。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述細胞包括綠猴腎細胞、豬睪丸細胞、豬空腸上皮原代細胞中的任一種或多種。

9.l型鈣離子通道抑制劑在制備用于抑制豬腸道冠狀病毒感染早期病毒入侵的產品中的應用，其特征在于，所述豬腸道冠狀病毒包括傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬丁型冠狀病毒中的任一種或多種；所述l型鈣離子通道抑制劑包括維拉帕米、尼卡地平、尼莫地平中的任一種或多種；所述產品包括藥物、飼料添加劑、疫苗中的任一種或多種。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述l型鈣離子通道抑制劑為維拉帕米。

技術總結
本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種L型鈣離子通道抑制劑在抗豬腸道冠狀病毒感染中的應用。該豬腸道冠狀病毒包括傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬丁型冠狀病毒中的任一種或多種。該L型鈣離子通道抑制劑包括維拉帕米、尼卡地平、尼莫地平中的任一種或多種。本發明研究發現，維拉帕米等L型鈣離子通道抑制劑可顯著抑制豬腸道冠狀病毒感染，并且其主要在豬腸道冠狀病毒感染1小時以內發揮作用，表明L型鈣離子通道抑制劑主要阻礙了病毒的入侵過程。本發明為維拉帕米等L型鈣離子通道抑制劑的應用開拓了全新的領域，也為新型抗豬腸道冠狀病毒藥物的研發提供新的方向。

技術研發人員：羅杰,付利芝,余遠迪,楊柳,許國洋,李紹梅,鄭華,徐登峰
受保護的技術使用者：重慶市畜牧科學院
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28