專利名稱：突破多藥抗性的抗心律失常、止痛作用的2,3-二氮雜萘酮類衍生物的制作方法
2，3-二氮雜萘酮衍生物氮
斯汀(azelastin，國際非專利藥名)已成功地用于防治支氣管哮喘，和過敏性、季節性鼻炎。它可按德國專利2，164，058描述的方法進行合成。
隨后開發的D-18024鹽酸鹽(氟利
斯汀flezelastin，國際非專利藥名)為外消旋混合物。它的制備方法描述在歐洲專利222，191中。
現在，人們已驚異地發現，具有通式Ⅰ結構的2，3-二氮雜萘酮衍生物Ⅰ
其中，A＝苯基(未取代的或鹵素單取代的或鹵素多取代的)，氫、C1-3烷基、2-呋喃基或2-噻吩基，
Y＝氫或C1-6烷基，其中烷基上可帶一個(取代的)苯環，一個羥基或一個烷氧羰基，以及在下面列出的所有與生理用酸加成的鹽結構Ⅱ
結構Ⅲ
和氮
斯汀及氟利
斯汀的旋光異構體都有抗心律失常的作用。它們大體上可歸為第三類抗心律失常作用化合物。
這些化合物也有止痛作用。
本發明的這些化合物也有止吐作用。止吐作用是通過口服或靜脈注射這些化合物后能抑制清醒態家豬經順氯氨鉑誘導產生的嘔吐而發現的。
清醒態家豬經順氯氨鉑誘導的嘔吐的抑制作用。下面數據提供了在觀察期間的嘔吐次數。給出的數據是五次實驗的平均值。
在對照液中經過60分鐘平衡，動物心臟制備物沉浸在10μM的試驗化合物中60分鐘。除了影響有效不應期的測定外(只在第30分鐘和第60分鐘測定)，其余的所有參數都是每隔15分鐘測定一次，即在被測定的化俁物的一定濃度下測量4次。
以下表中和圖中給出的數據是平均值±S.E。所有化合物的各種參數經統計學t檢驗(Student-Welch法)，P＜0.05，作用明顯。
結果列于表一。
外周止痛作用在Writhing試驗模型(IWRAC)和Randall-Selitto炎癥疼痛試驗模型(IRS)中得到證明。
見表二。
結構通式Ⅰ的2，3-二氮雜萘酮類衍生物的外周止痛作用
aIWRAC＝乙酸誘導的Writhing試驗。百分數據指小鼠口服給藥，劑量為6mg/kg。ED50為mg/kg。
bIRS＝Randall-Selitto炎癥疼痛試驗。百分數據指大鼠口服給藥，劑量為10mg/kg。ED50值為mg/kg。
在使用細胞抑制劑治療的過程中，可以看到最初的治療完成后，腫瘤對治療產生了抗性。使用其它的細胞抑制劑治療也沒有成功的希望。
這種現象叫做多藥抗性(MDR)。(Vendrik，Bergers，deJong，SteerenbergResistancetoCytostaticdrugsattheCellularlevel，CancerChemother.Pharmacol.(1992)29，413-429)。
本發明的這些化合物同樣適合于制備抗這種MDR現象的藥物制劑。
這些化合物對突破MDR現象的藥物制劑的適合性可被下述實驗確定。
急性布朗-挪威(BrownNorway)脊髓白血病(BNML)，其生長特性及對化療的反應類似于人類的骨髓細胞白血病(關于BNML的最近綜述，參見Martens等人，Leukemia4，241-257，1990)。為建立一個臨床相關的白血病抗藥模型，從BNML中挑選出一個細胞系，命名為LT12。這個細胞系具有體內、體外都能生長的優勢。
(體外)將人類mdr1基因通過轉導引入染色體組-DNA，使LT12細胞對物質產生抗性。使用含有完整人類mdrl基團的CDNA表達載體PFRCMVmdr1.6，在一個跟隨有HBV多聚腺苷信號肽的CMV啟動子的早期加速因子控制下進行轉導。用米托蒽醌(mitoxantron)選擇出來的已轉染的DNA片段保持在200nM米托蒽醌濃度下。這樣產生出一穩定的、具抗藥性的LT12細胞系，稱之為LT12/mdr。
終點流式細胞光度法使用流式細胞光度法，依據水平方向的(體積參數)和垂直方向的(結構參考)光散射，可以鑒定細胞。對每個細胞發出一個0.6W的488nm的激光束水平光散射，垂直光散射(過一488-nm譜帶的濾光片)和道諾紅菌素熒光(過-550nm的譜帶濾光片)，這個結果就可測定出來。結合散射值和熒光值，細胞群中的道諾霉素濃度就可測算出。在t＝0時道諾紅菌素(最終濃度為2μm)和被試驗的化合物(最終濃度為1.0μm，3.0μm或10μm)加到細胞懸浮液中(2·105細胞/ml，無苯酚紅的RPMI-1640介質)，在37℃下溫育90分鐘。
細胞內的道諾紅菌素濃度通過流式細胞光度法測得，即在488nm的激光放射刺激下，測定細胞的熒光。無酚紅的RPMI-1640介質可作為陰性對照。每個實驗用環胞菌素A(0.3，1和2μm)作為有效物質。死細胞用非活性染料Hoechst33258(用0.2W通過405nm譜帶濾光片的紫外激光束刺激)作顏色對比來鑒別。這些死細胞和碎片總是排除于分析以外的。
在線流式細胞光度法在線流式細胞光度法是一般流式細胞光度法的改良，它可在幾個小時期間對樣品不停地進行測量。在預定的時間，微機可以儲存2000個細胞的各種數據，并以列式文本排列。由于儲存了每個細胞的相關參考(例如體積、結構、物質累積等)，因此進行數據縮合分析和更新實驗都是可能的。
細胞懸浮液維持在帶有恒溫水浴套的37℃反應器內，反應器與流式細胞光度計的流動池相接。細胞內所含的介質采用空氣壓力通過流動池進行壓榨。反應器上另外的入口可加入物質，同時觀察細胞。因此，在線流式細胞光度法對快速測定細胞內物質濃度的動力學改變非常適合。
在這類實驗中，起始的測量，細胞懸浮液中沒有道諾紅菌素(2·105細胞/ml于無酚紅介質RPMI-1640中)。在t＝0時，細胞中加入道諾紅菌素(最終濃度2μM)，然后在60分鐘內測量細胞對道諾紅菌素的凈攝入量，直到測量到物質累積達到穩定水平。此時，加入被測試的化合物到細胞懸浮液中，再測量60分鐘物質的累積。環胞菌素A加入細胞懸浮液中作為陽性對照物。
結果證實，本發明的化合物適于這種目的。未處理的LT12/mdr細胞顯示23%的道諾紅菌素熒光值，非抗藥性細胞顯示100%的道諾紅菌素熒光值。對照物環胞菌素A在0.3μMol濃度時，顯示120%道諾紅菌素熒光值，1.0μMol時為110%，3μMol時為130%。
氟利
斯汀在1μMol濃度時，產生60%的道諾紅菌素熒光，0.3μMol為110%，0.5μMol為130%，1.0μMol也是130%，3.0μMol時為140%。
氮
斯汀在0.1μMol下，顯示50%的道諾紅菌素熒光，0.3μMol為70%，0.5μMol為90%，1.0μMol為110%，3.0μMol為140%。
權利要求
1.一種組合球列檢具，其特征在于它由四組球列L1、L2、L3、L4相互連接而成，四組球列處于同一平面內，球列L1上布有等間距排列的n個球體、球與球之間的距離是S，L1的長度是(n-1)S，球列L2和球列L3布有等間距排列的1/2(n+1)個球體，球與球之間的距離是S，L2和L2的長度是1/2(n-1)S，球列L4上布有等間距排列的n個球體、球與球之間的距離是
S，L4的長度是
(n-1)S，所有球體的直徑相同。
2.按照權利要求1所述的這種組合球列檢具，其特征在于球列L2和L3分別連接于L1的兩端并與L1垂直，L1與L2相接處球體為L1的第1個球體、同時為L2的第1個球體，L1與L3相接處的球體為L1的第n個球體同時為L3的第1個球體，L4分別連接在L1的始端與L3的終端，球列L1與L4相接處球體為L1的第1個球體同時也為L4的第1個球體，L3與L4相接處球體為L3的第1／2(n＋1)個球體同時也為L4的第n個球體，輔助桿L5的兩端分別固定連接在球列L2的鋼球B5上和和球列L3的鋼球C5上。
16.氟利
斯汀的右旋光體在制備藥物制劑中的應用。
17.氟利
斯汀的右旋光體在制備藥物制劑中的應用。
18.藥物制劑的制備方法，其特片在于它含有氟利
斯汀的右旋光體及一常規輔料和載體。
19.藥物制劑的制備方法，其特征在于它含有氟利
斯汀的左旋光體及一常規輔料和載體。
全文摘要
2，3-二氮雜萘酮類衍生物及其旋光異構體用作抗心律失常、止痛及突破多藥抗性的藥物。
文檔編號A61P29/00GK1088435SQ9311817
公開日1994年6月29日 申請日期1993年9月29日 優先權日1992年10月2日
發明者J·恩格爾, B·庫謝爾, I·福萊西豪爾, S·瑟勒尼, P·莫策瑙爾, U·沃爾 申請人:Asta藥物股份公司