一種可以徹底去除鹿茸中血液殘留的清洗方法
【專利摘要】本發明涉及一種可以徹底去除鹿茸中殘留血液的清洗方法。將鹿茸橫截斷成圓片狀結構。用冷生理鹽水浸泡清洗鹿茸切片2min，棄去液體后重復清洗2-8次。將鹿茸切片平置于無菌紗布上，任意截斷面接觸紗布。從朝上的截斷面向鹿茸切片滴加清洗溶液，將之完全潤濕。之后用高壓氣泵由截斷面向鹿茸切片內部吹氣，鹿茸組織中的溶液被氣體沖壓出來，同時將血液殘留帶出。再向鹿茸截斷面滴加清洗溶液使之完全潤濕，隨后用高壓氣泵將鹿茸切片中的液體沖壓出來。重復上述操作若2-8次，直至血液殘留完全被清除出去。向鹿茸截斷面滴加鹽溶液使之完全潤濕，隨后用高壓氣泵將液體壓出。本發明可以徹底去除鹿茸中殘留的血液。
【專利說明】一種可以徹底去除鹿茸中血液殘留的清洗方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及用于鹿茸蛋白質活性研究及蛋白質組學研究的鹿茸樣品中血液殘留的去除方法，具體地說是一種基于清洗液清洗結合高壓氣泵沖擊的清洗方法。
【背景技術】
[0002]鹿茸作為哺乳動物唯一能夠完整持續再生的器官，在較短時時期內可以產生大量的血管、神經、軟骨等組織，被認為是研究組織生長調節機制的理想模型。以鹿茸為樣品，建立可以保持活性的提取方法，并對提取得到的活性蛋白質進行功能蛋白質組學分析，對于認識鹿茸生長過程中發揮調節作用的功能蛋白質群，進而推動我國傳統動物藥的深入開發有積極意義。但是在采收的鹿茸中殘留有大量的血液，經過真空抽吸法，熱炸除血法及血管注射溶液清洗方法均不能很好的去除血液殘留。殘留的血液無論對于鹿茸的蛋白質組學研究還是鹿茸功能蛋白質的發現，都有很強的干擾作用。因此，將鹿茸中的血液殘留徹底除去，對于鹿茸蛋白質組學研究及鹿茸活性蛋白質的發現都有重要意義。
[0003]鹿茸中存在大量的血管組織，方向與鹿茸徑向一致。這些血管中殘留有大量的血液。將鹿鸞截斷時，血管也被截斷，此時血管成為兩端開口的一段血管。這樣，在血管的一段向血管內施加壓力，就可以將管內殘留的血液擠壓出來。因此利用鹿茸組織的這一特性，可以將鹿茸中殘留的血液側地去除。

【發明內容】

[0004]本發明的目的在于提供一種可以徹底去除鹿茸中血液殘留的清洗方法，以期解決殘留血液對鹿茸功能蛋白質及蛋白質組學研究的干擾問題。
[0005]為實現上述目的，本發明采用的技術方案為:
[0006]將鹿茸切成厚度適宜的片狀結構，用合適的清洗溶液潤濕鹿茸切片，采用高壓氣泵將其中殘留的血液成分吹壓出來。
[0007]具體為:
[0008]I)切片處理
[0009]將新鮮采收的鹿茸外表面用生理鹽水清潔干凈后用75%酒精消毒處理；沿橫截面方向將鹿茸切成片狀結構，用冷生理鹽水浸泡鹿茸切片，初步去除鹿茸切片中殘留的血液；
[0010]2)血液殘留去除
[0011]取干燥的無菌紗布平鋪于一大孔徑的篩網之上。將鹿茸切片平置于無菌紗布上，任意截斷面接觸紗布。從朝上的截斷面向鹿茸切片滴加清洗溶液，將之完全潤濕。之后用高壓氣泵由截斷面向鹿茸切片內部吹氣，鹿茸組織中的溶液被氣體沖壓出來，同時將血液殘留帶出。再向鹿茸截斷面滴加清洗溶液使之完全潤濕，隨后用高壓氣泵將鹿茸切片中的液體沖壓出來。重復上述操作若2-8次，直至血液殘留完全被清除出去。向鹿茸截斷面滴加鹽溶液使之完全潤濕，隨后用高壓氣泵將液體壓出。重復上述操作若2-8次，直至清洗溶液完全被清除出去。
[0012]本發明的優點為:(I)需要設備簡單，操作簡便；(2)可徹底去除鹿茸中殘留的鹿血。
[0013]相對于熱炸排血法和真空抽吸法，本法可以徹底去除鹿茸中殘留的血液，為鹿茸蛋白質組學分析及活性蛋白質篩選排除血液成分的干擾。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為除血前后鹿茸切片的對比照片；(A:除血前，B:除血后)
【具體實施方式】
[0015]將新鮮采收的鹿茸外表面用生理鹽水清潔干凈后用75%酒精消毒處理；沿橫截面方向將鹿茸切成片狀結構，用冷生理鹽水浸泡鹿茸切片，初步去除鹿茸切片中殘留的血液。
[0016]取干燥的無菌紗布平鋪于一大孔徑的篩網之上。將鹿茸切片平置于無菌紗布上，任意截斷面接觸紗布。從朝上的截斷面向鹿茸切片滴加清洗溶液，將之完全潤濕。之后用高壓氣泵由截斷面向鹿茸切片內部吹氣，鹿茸組織中的溶液被氣體沖壓出來，同時將血液殘留帶出。再向鹿茸截斷面滴加清洗溶液使之完全潤濕，隨后用高壓氣泵將鹿茸切片中的液體沖壓出來。重復上述操作若2-8次，直至血液殘留完全被清除出去。向鹿茸截斷面滴加鹽溶液使之完全潤濕，隨后用高壓氣泵將液體壓出。重復上述操作若2-8次，直至清洗溶液完全被清除出去。
[0017]應用例I
[0018]將新鮮采收的鹿茸外表面用生理鹽水清潔干凈后用75%酒精消毒處理；沿橫截面方向將鹿茸切成厚度約為2cm的片狀結構，將10片鹿茸切片置于500mL冷生理鹽水中浸泡5min，期間不時攪動鹿茸切片。之后將溶液棄去，將鹿茸切片置于新的冷生理鹽水中。重復操作4次，初步去除鹿茸切片中殘留的血液。
[0019]將鹿茸置于干燥的無菌紗布上，截斷面接觸紗布，其下依托100目孔徑的篩網。用Triton-X 100含量為0.1%的PBS清洗溶液完全將之浸濕，而后用壓力為2MP的高壓氣泵由截面處向里吹，將茸體內的液體完全沖壓出來。向茸體內再次滴加上述清洗溶液至完全潤濕，由高壓氣泵將茸體內的液體完全沖壓出來，重復上述步驟4次，直至將血液殘留完全去除干凈。向鹿茸截斷面滴加PBS溶液使之完全潤濕，隨后用高壓氣泵將液體壓出。重復上述操作若4次，直至清洗溶液完全被清除出去。
[0020]除血處理前后鹿茸切片對比如圖1所示。結果顯示:除血處理后，鹿茸切片中的血液被徹底清除干凈。說明該方法確實可以有效去除血液殘留。
【權利要求】
1.一種可以徹底去除鹿茸中血液殘留的清洗方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)將新采收的鹿茸外表面用生理鹽水清潔干凈，然后用75%酒精消毒處理； 2)將鹿茸切成片狀，后置于冷生理鹽水中浸泡，5min后取出置于新的生理鹽水中，重復操作2-8后，將鹿茸切片取出浙干； 3)將2)步驟中所得鹿茸切片平置于無菌紗布上，任意截斷面接觸紗布，其下依托一大孔徑的篩網，從朝上的截斷面向鹿茸切片中滴加清洗溶液，將之完全潤濕，之后用高壓氣泵由截斷面向鹿茸切片內部吹氣，鹿茸切片中的溶液被氣體沖壓出來，同時將血液殘留帶出； 4)向鹿茸切片內再次滴加清洗溶液至切片完全潤濕，用高壓氣泵由截斷面向鹿茸切片內部吹氣，將切片內的液體完全沖壓出來，重復上述步驟2-8次，直至將切片中的血液殘留完全去除干凈； 5)向鹿茸截斷面滴加鹽溶液使之完全潤濕，用高壓氣泵由截斷面向鹿茸切片內部吹氣，將切片內的鹽溶液完全沖壓出來，重復上述步驟2-8次，直至將切片中殘留的清洗溶液完全去除干凈。
2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 沿橫截面方向將鹿茸切成圓形或橢圓形的切片，切片的厚度為0.5-5cm。
3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 篩網的孔徑在10-200目之間。
4.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 提取過程均在4-37°C條件下進行，清洗液和鹽溶液均為4-37°C。
5.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 清洗溶液為下列溶劑中的一種，用PBS配制的TritonX-1OO溶液、SDS溶液或Tween-20溶液；濃度范圍在0.01% -5%之間。
6.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 鹽溶液為下列溶劑中的一種，氯化鈉溶液、磷酸緩沖溶液或PBS溶液；濃度范圍在5mM-500mM 之間，pH 為 6-8。
7.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 高壓氣泵的氣體為下列中的一種，為空氣、氮氣或二氧化碳氣體。
8.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 高壓氣泵的壓力范圍為0.1-5MP之間。
【文檔編號】B08B7/04GK103769393SQ201210403961
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年10月19日 優先權日:2012年10月19日
【發明者】張麗華, 隨志剛, 張曉丹, 張玉奎 申請人:中國科學院大連化學物理研究所