專利名稱：噻唑類化合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一類對甲氧苯青霉素耐藥的金黃色葡萄球菌(以下略稱MRSA)及對萬古霉素耐藥的腸球菌(VRE)具有抗菌活性的新型化合物。

背景技術：
MRSA是對金黃色葡萄球菌的治療藥物——β-內酰胺類抗生素產生耐藥性的菌株，20世紀80年代在日本國內即有報道。近年來，多劑耐藥性MRSA成為主流，院內感染在很多醫院成為極大的問題。
具有抗MRSA活性、具有與已知藥物不同的母核結構及作用機制的化合物可以用作新型抗菌劑。
作為對付MRSA的藥物，過去一直使用萬古霉素，然而最近卻產生了有如曾被報道的對萬古霉素耐藥的腸球菌(VRE)等耐藥菌株，因此，人們期待著其他的藥物。
具有抗菌活性的噻唑類化合物過去已經知道的有諾西肽(Nosiheptide)。(非專利文獻1)。
非專利文獻1K.Umemura等，Bull.Chem.Soc.Jpn，.71，1391-1396(1998)。

發明內容
本發明的目的旨在提供對MRSA及VRE具有抑制活性的新型生理活性物質。
本發明解決問題的技術方案是 為了完成前述目的，本發明者等從土壤和植物中分離了多種菌株，并對這些菌株的代謝產物進行了種種研究，結果發現一種菌株產生的化合物對MRSA及VRE具有極強抑制活性，從而完成了本發明。
亦即以化學結構式1表示的噻唑類化合物。

式1 式中，R為化學結構式2表示的取代基或氨基。

式2 以下為，R的化學結構式
式3 下面，將R以化學結構式2表示的取代基的化合物定為WSS2258，R為氨基的化合物定為WSS2260。
產生WSS2258及WSS2260的菌株系本發明者等從中國云南省的土壤中分離的放線菌，本菌株的委托編號FERM BP-1035，2004年4月12日委托于“日本獨立行政法人產業技術綜合研究所特許生物寄托中心”。
A.形態特征 基內菌絲生長良好，分枝，不斷裂，未形成氣生菌絲，由基內菌絲長出較短的菌絲，其頂端形成孢囊。孢囊為球形及亞球形，其表面呈皺紋狀，直徑大小約為4—10μm。成熟孢囊釋放的孢子大小約為1—1.5μm。
B.培養特征 28℃，在各種培養基內培養3小時后，肉眼觀察的結果列于下述表1。顏色的標示采用“日本規格協會”JIS顏色名錄(1985年)的系統顏色名稱。
表1 C.生理學特征 (1)生長溫度范圍 ·生長溫度范圍18—32℃。
·最適生長溫度范圍25—28℃。
(2)黑素樣色素的產生無。
(3)碳源的利用 30℃，在pridham-gotryb培養基內培養2周后，肉眼觀察的結果列于表2。表中的「+」表示生長，「W」表示生長較弱。
表2 D.化學分類學特征 從菌體成分細胞壁中檢測出內消旋二氨基庚二酸，細胞壁的類型為II型。整個菌體的糖份檢測為阿拉伯糖，糖的類型系D型。作為主要的維生素K3含有MK9(H4)。磷脂類型為只有磷脂酰乙醇氨(PE)的P II型。
E.基于16SrDNA的系統解析 為決定本菌16SrDNA范圍的部分堿基排列，通過數據庫進行了檢索(DDBJDNA Database bank of Japan)。結果表明，被確認為同一性高于98％的菌株僅為游動放線菌屬(Actinoplanes)。
以上述結果為基礎，按照放線菌的分離及鑒定的方法(“日本放線菌學會”編，2001年)進行了鑒定，結果表明，將本菌株分類為屬于游動放線菌屬的放線菌是恰當的，并將本菌株命名為Sp.放線菌-TA0455(Act inoplanes sp.-TA0455)。
WSS2258及WSS2260的制備可以大致參照生產一般發酵產物的情形，在含有各種營養物質的培養基上，于需氣性條件下，將TA0455菌株進行培養。
培養基主要使用液體培養基，由碳源、氮源及無機鹽構成，根據需要，可以加入維生素類、前體物質及消沫劑，pH調至7附近。碳源可以單獨或混合使用葡萄糖、蔗糖、糊精、甘油及淀粉等。氮源可以單獨或混合使用肉湯、麥片粥、酵母浸膏、大豆粉、polypepton、谷物浸漬液、尿素及銨鹽等。無機鹽可以單獨或混合使用磷酸鉀、硫酸鎂、氯化鈉及碳酸鈣等。消沫劑可以使用adecanol及硅化物等。
培養方法可以采用振蕩培養、通氣攪拌培養等需氣性培養，在pH 4～10，溫度25～35℃的條件下培養2～5天，最好是在pH6～7，25～28℃培養4天。
本發明化合物系采用常規方法對發酵產物進行精制獲得的。即培養結束后，通過離心分離或過濾得到培養濾液，由鉆石牌離子交換樹脂HP-20(DiaionHP-20)(商品名，三菱化學公司制造)等聚苯乙烯樹脂吸附后，用低級醇、丙酮等有機溶劑溶出。菌絲以低級醇、丙酮等有機溶劑提取。然后合并菌絲提取液及得自吸附樹脂的溶出液，減壓濃縮，除去有機溶劑，殘留物用乙酸乙酯、氯仿或正丁醇等非水溶性有機溶劑溶解，濃縮該液至糖漿狀。將此糖漿再次溶于苯、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或氯仿等有機溶劑中，采用硅膠柱層析、凝膠過濾柱層析、填充了逆層分配用十八烷基硅烷(ODS)的柱層析以及高效液相色譜等方法可以精制分離本發明化合物。
由上述方法得到的WSS2258及WSS2260，通過其分子量、紫外吸收光譜、1H-NMR譜及13C-NMR譜等的解析，確證為前述結構。
WSS2258的理化性質如下 (a)外觀黃色粉末 (b)分子量1206 (c)分子式C51H43N13O11S6 (d)高分辨質譜(HR-TOF) 實測值1206.1625 理論值1206.1608(按C51H43N13O11S6計算)。
(e)1H-NMR譜 在氘代二甲基亞砜中，以500MHz頻率測定的結果如圖1。
(f)13C-NMR譜 在氘代二甲基亞砜中，以125MHz頻率測定的結果如圖2。
(g)對溶劑的溶解性 在二甲基亞砜、氯仿中略溶，在水、已烷、甲醇、乙醚、丙酮及乙酸乙酯中不溶。
(h)堿性、酸性、中性的區別中性。
WSS2260的理化性質如下 (a)外觀黃色粉末 (b)分子量1137 (c)分子式C48H40N12O10S6 (d)高分辨質譜(HR-TOF) 實測值1137.1375 理論值1137.1393(按C48H40N12O10S6計算)。
(e)比旋度[α]D2580.91(c 0.26，CHCl3)。
(f)1H-NMR譜 在氘代二甲基亞砜中，以500MHz頻率測定的結果如圖1。
(g)13C-NMR譜 在氘代二甲基亞砜中，以125MHz頻率測定的結果如圖2。
(h)對溶劑的溶解性 在二甲基亞砜、氯仿中略溶，在水、已烷、甲醇、乙醚、丙酮及乙酸乙酯中不溶。
(i)堿性、酸性、中性的區別中性。
本發明的有益效果是已經究明本發明化合物對于MRSA和VRE具有抑制活性。



圖1表示WSS2258在氘代二甲基亞砜中，以500MHz頻率測定的1H-NMR譜。
圖2表示WSS2258在氘代二甲基亞砜中，以125MHz頻率測定的13C-NMR譜。
圖3表示WSS2260在氘代二甲基亞砜中，以500MHz頻率測定的1H-NMR譜。
圖4表示WSS2260在氘代二甲基亞砜中，以125MHz頻率測定的13C-NMR譜。

具體實施例方式 下面，列舉實驗例和試驗例對本發明進行具體說明。
實施例1WSS2258及WSS2260的制備 (1)將含有2.5％可溶性淀粉、1％葡萄糖、0.5％魚粉、0.3％ Pharmamwdia、0.3％NZ case、0.2％酵母浸膏及0.2％碳酸鈣的液體培養基60ml置入300ml的三角瓶中，120℃，2大氣壓下滅菌20分鐘。隨后，在該無菌培養基內接種Sp.放線菌-TA0455，28℃，200rpm，旋轉振蕩培養3天，作為種子培養。
其次，將由2％麥片粥、1％葡萄糖、0.5％糊精、1％ Pharmamedia、0.5％魚粉及0.5％糖蜜組成的液體培養基100ml置入500ml的三角瓶內，其中加入前述種子培養液2ml，28℃，200rpm，旋轉振蕩培養3天，作為前期培養。
再者，使用2個50L容積的培養槽，在與前期培養相同組成的無菌培養基各30L中，加入前述培養液600ml，28℃，200rpm，旋轉振蕩培養5天。
培養結束后，向所得60L培養液中加入30L正丁醇，攪拌，離心分離，分取菌絲及正丁醇提取組分。減壓蒸餾正丁醇提取液，得到褐色油狀物質120.27g。
(2)將前步實驗的120.27g油狀物溶于750ml水-甲醇(10:90)的混合溶液中，加入己烷750ml，攪拌，離心分離，減壓濃縮水-甲醇層至干。將所得65.35g褐色物質溶于氯仿-甲醇混合溶劑內，加入200ml硅膠[Silica Gel 60(Merck公司制)]，減壓濃縮，使之吸附。將吸附物置于800ml用氯仿調制過的硅膠上層，1000ml氯仿洗滌，以氯仿-甲醇(99:1—80:20)的混合溶劑順次溶出。合并其中以混合溶劑(96:4)溶出的組分，減壓濃縮至干，得到褐色物質2.014g。殘留物中加入甲醇20ml，過濾，將所得沉淀323.1mg溶于氯仿，采用以氯仿-甲醇(8:1)混合溶劑為展層劑的薄層層析(TLC)[薄層板硅膠F254(Merck公司制)]進行組分分離。刮取Rf0.62—Rf0.56的部分，所得硅膠用氯仿-甲醇(1:1)混合溶劑提取，減壓濃縮至干，得到69.3mg WSS2258。同樣，刮取Rf0.06—Rf0.37的部分，所得硅膠用氯仿-甲醇(1:1)混合溶劑提取，減壓濃縮至干，得到36.3mgWSS2260。
試驗例1 對MRSA的最小抑菌濃度(MIC)的測定 (試驗藥品) 將WSS2258、WSS2260及用作對照品的萬古霉素溶于二甲基亞砜(DMSO)，分別配成10mg/ml，試驗使用以滅菌水稀釋成目的濃度的溶液。
(試驗菌株) 抗甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌(MRSA)SA-9(臨床分離菌株) (試驗方法) 采用下述微量液體稀釋法測定最小抑菌濃度。
從培養一夜的心浸液瓊脂培養基刮取菌落，濁度調至MeFarland 0.5。攝取在含有藥品的培養基內，使最終接種菌量達到5×105CFU。35℃，培養17小時，將肉眼未見菌絲生長的最小濃度定義為MIC(μg/ml)，評價結果列于表2。
表3 試驗例2 對VRE的最小抑菌濃度(MIC)的測定 (試驗藥品) 將WSS2258、WSS2260及用作對照品的linezoride溶于二甲基亞砜(DMSO)，分別配成10mg/ml，試驗使用以滅菌水稀釋成目的濃度的溶液。
(試驗菌株) 抗萬古霉素的腸球菌[VRE，(van A)保存，臨床分離菌株] (試驗方法) 采用下述微量液體稀釋法測定最小抑菌濃度。
從培養一夜的心浸液瓊脂培養基刮取菌落，濁度調至MeFarland 0.5。攝取在含有藥品的培養基內，使最終接種菌量達到5×105CFU。35℃，培養17小時，將肉眼未見菌絲生長的最小濃度定義為MIC(μg/ml)，評價結果列于表3。
表4 產業應用的可能性 本發明化合物對于MRSA和VRE具有很強的抗菌活性，所以可以作為醫藥使用。
權利要求
1.一種化學結構式1表示的噻唑類化合物，
式1
式中，R是化學結構式2表示的取代基或氨基。
式全文摘要
具有抗MRSA(抗甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌)活性、具有與已知藥物不同的母核結構及作用機制的化合物可以用作新型抗菌劑。作為對付MRSA的藥物，過去一直使用萬古霉素，然而最近卻產生了有如曾被報道的對萬古霉素耐藥的腸球菌(VRE)等耐藥菌株，因此，期望其他的新型藥物。以通式表示的噻唑類化合物具有抗MRSA和抗VRE的活性，所以可以作為醫藥使用[式中，R式表示取代基或氨基]。
文檔編號C07D515/22GK101400684SQ200580047820
公開日2009年4月1日 申請日期2005年7月13日 優先權日2005年7月13日
發明者野澤由利子, 儲以文, 李俊英 申請人:大正制藥株式會社, 中國醫藥集團總公司四川抗菌素工業研究所