專利名稱：一種刺果紫玉盤素a的制備方法
一種刺果紫玉盤素A的制備方法技術領域
本發明屬于中藥提取分離技術領域，涉及一種從刺果紫玉盤根中分離制備刺果紫玉盤素A的方法。
背景技術：
刺果紫玉盤素A，無色片狀結晶，mp. 96 98°C，來源于番荔枝科植物刺果紫玉盤 Uvaria calami strata Hance的根。刺果紫玉盤分布在越南以及中國大陸的廣西、廣東等地,多生長于山地林中以及山谷水溝旁灌木叢中。
刺果紫玉盤根主要有效成分為乙酰精寧類化合物，以刺果紫玉盤素A含量最高。 刺果紫玉盤素A具有細胞毒活性，有顯著的選擇性細胞毒活性，對KB、A2780和HCT-8三種人型癌細胞株呈顯著的細胞毒活性，IC5tl(UgAiL)相應為2. 0、1. 4和0.37。目前，番荔枝科植物次生代謝物番蒸枝乙酰精寧類(annonanceous acetogenins,AAGs)化合物被視為新的抗腫瘤藥物的潛在資源，AAGs能抑制人卵巢瘤IA9細胞復制、誘導癌細胞凋亡，是強效的復合物I抑制劑，抗腫瘤藥物的候選藥物。
目前，尚未見高含量刺果紫玉盤素A的制備方法相關專利報道。發明內容
本發明的目的是提供一種刺果紫玉盤素A的制備方法。
本發明的目的是通過以下技術方案實現的(1)取刺果紫玉盤根，經粉碎處理，加5-12倍60-90%乙醇溶液在20-45°C的溫度下進行連續逆流超聲提取30-100min，過濾，得到提取液；(2)提取液通過截留分子量為1000-3000的超濾膜超濾和截留分子量為100-500的納濾膜濃縮，操作壓力為0. 5-2. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，其兩相溶劑系統為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集刺果紫玉盤素A組分；(4)將刺果紫玉盤素A組分進行真空濃縮，析出結晶，濾出結晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A。
所述步驟(I)中超聲頻率為35-60KHZ。
所述步驟(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統的體積比為 5-7:2-4:4-7:1-3。
本方法積極效果是(1)本方法采用連續逆流超聲提取，實現了超聲提取和連續逆流提取同時進行，提取效果好，同時實現連續作業；(2)本方法采用膜分離技術，能有效去除多種雜質，且不會破壞有效成分的生物活性， 而且與連續逆流超聲提取相結合，實現提取濃縮連續作業；(3)本方法采用高速逆流色譜法，收率高、制備量大、制備周期短，解決了柱層析效率低而且污染嚴重的技術缺陷；(4)本方法工藝步驟操作較簡單，易操作，所得產品純度高。
下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施方式
實施例I :取刺果紫玉盤根，經粉碎處理，稱取1kg，加5倍90%乙醇溶液在45°C的溫度下進行連續逆流超聲提取30min，超聲頻率為60KHz，過濾，得到提取液，提取液通過截留分子量為 3000的超濾膜超濾和截留分子量為500的納濾膜濃縮，操作壓力為0. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比 5:4:6:1石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測， 收集刺果紫玉盤素A組分，進行真空濃縮，析出結晶，濾出結晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量96. 5%。
實施例2:取刺果紫玉盤根，經粉碎處理，稱取1kg，加12倍60%乙醇溶液在20°C的溫度下進行連續逆流超聲提取lOOmin，超聲頻率為35KHz，過濾，得到提取液，提取液通過截留分子量為 1000的超濾膜超濾和截留分子量為500的納濾膜濃縮，操作壓力為I. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比 7:3: 7:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測， 收集刺果紫玉盤素A組分，進行真空濃縮，析出結晶，濾出結晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量97. 4%。
實施例3:取刺果紫玉盤根，經粉碎處理，稱取2kg，加10倍70%乙醇溶液在35°C的溫度下進行連續逆流超聲提取60min，超聲頻率為40KHz，過濾，得到提取液，提取液通過截留分子量為 1000的超濾膜超濾和截留分子量為200的納濾膜濃縮，操作壓力為2. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比 6:4:7:3石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測， 收集刺果紫玉盤素A組分，進行真空濃縮，析出結晶，濾出結晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量96. 2%。
實施例4:取刺果紫玉盤根，經粉碎處理，稱取5kg，加8倍70%乙醇溶液在40°C的溫度下進行連續逆流超聲提取60min，超聲頻率為50KHz，過濾，得到提取液，提取液通過截留分子量為 3000的超濾膜超濾和截留分子量為300的納濾膜濃縮，操作壓力為0. 5MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比5:2:4:1石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測， 收集刺果紫玉盤素A組分，進行真空濃縮，析出結晶，濾出結晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量98. 6%。
實施例5:取刺果紫玉盤根，經粉碎處理，稱取10kg，加12倍90%乙醇溶液在45°C的溫度下進行連續逆流超聲提取40min，超聲頻率為50KHz，過濾，得到提取液，提取液通過截留分子量為 1000的超濾膜超濾和截留分子量為100的納濾膜濃縮，操作壓力為2. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，以體積比 7:2:7:3石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測， 收集刺果紫玉盤素A組分，進行真空濃縮，析出結晶，濾出結晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A，含量98. 9%。
權利要求
1.I、一種刺果紫玉盤素A的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)取刺果紫玉盤根，經粉碎處理，加5-12倍60-90%乙醇溶液在20-45°C的溫度下進行連續逆流超聲提取30-100min，過濾，得到提取液；(2)提取液通過截留分子量為1000-3000的超濾膜超濾和截留分子量為100-500的納濾膜濃縮，操作壓力為0. 5-2. 8MPa，膜濃縮液減壓濃縮干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，其兩相溶劑系統為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集刺果紫玉盤素A組分；(4)將刺果紫玉盤素A組分進行真空濃縮，析出結晶，濾出結晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶，過濾、洗滌干燥即得刺果紫玉盤素A。
2.2、根據權利要求I所述的一種刺果紫玉盤素A的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中超聲頻率為35-60KHz。
3.3、根據權利要求I所述的一種刺果紫玉盤素A的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統的體積比為5-7:2-4:4-7:1-3。
全文摘要
本發明涉及一種操作簡單、污染少的刺果紫玉盤素A的制備方法，工藝步驟為(1)取刺果紫玉盤根，經粉碎處理，用醇類溶液進行連續逆流超聲提取，過濾得到提取液；(2)提取液通過膜分離系統，濃縮干燥得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的刺果紫玉盤素A，其兩相溶劑系統為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相為固定相，下相為流動相，收集刺果紫玉盤素A組分；(4)將刺果紫玉盤素A組分進行真空濃縮，析出結晶，濾出結晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重結晶。本發明制備刺果紫玉盤素A，產品純度高，易于實現產業化放大。
文檔編號C07D307/58GK102532069SQ20111042903
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月20日 優先權日2011年12月20日
發明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司