專利名稱：海洋生物膠原多肽的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種提高人體機體免疫力、抗氧化、抗衰老、抗潰瘍、降血壓、預防骨質疏松、促進上皮組織細胞修復與生長等具備多種優異抗氧化生理活性的膠原肽制品、特別是涉及一種以海洋生物為基礎材料提取膠原多肽及其制造方法。
背景技術：
多棘海盤車是一種常見的海洋無脊椎生物，棘皮動物門海星綱，少數沿海地區將其作為休閑食品，但絕大多數是被廢棄。近年來其藥用價值已逐漸受到醫學界關注，多棘海盤車體內富含多種具有良好生物活性的有機物成分包括皂苷、留醇、生物堿、多糖等，此外其體壁中還含有豐富的膠原蛋白，膠原蛋白是動物體內最重要的蛋白質之一，具有特殊的機械性能和生物特性，近年來膠原蛋白做為一種新興的材料已經廣泛應用于醫療器材、藥品、保健品等領域，而膠原多肽有著比膠原蛋白更加優良的生物活性和抗氧化性，也更易被 人體吸收。隨著對膠原類產品研究的深入，海洋來源的膠原蛋白作為健康產品基本原料優勢非常明顯，具備無動物免疫原性、無細胞毒性等特點，因此其必將成為最活躍、最具廣闊前景的研究領域。

發明內容
膠原蛋白經復合蛋白酶降解處理后得到具有較高吸收性、分子量約IOO-IOOOODa的產物、即為膠原肽。膠原肽在反映蛋白質營養的同時，具備抗潰瘍、抗氧化、抗過敏、抗衰老、降血壓、促進傷口愈合、促進皮膚膠原代謝、免疫調節等特點，因此膠原肽具備更加優異的生物活性，其很多活性都與其抗氧化性有關。
四、具體實施方法本發明的目的是提供一種從多棘海盤車體壁中提取制備膠原多肽的方法，該方法包括用蛋白酶從多棘海盤車體壁中提取膠原蛋白，再將膠原蛋白降解制備膠原多肽的過程。I、海洋生物膠原蛋白提取制造方法先將多棘海盤車體壁洗凈用2%鹽酸浸泡、使其脫骨,再用3%朽1檬酸溶液酸溶脹，將溶脹后的多棘海盤車體壁均漿，4°C木瓜蛋白酶酶解24小時，離心機10000r/min離心，取上清液，再將沉淀物重復酶解2次以提高膠原提取率，合并3次上清液，用乙酸調節PH值=7，用65%硫酸銨鹽析得膠原沉淀，蒸餾水透析16h，得純膠原蛋白液。2、海洋生物膠原多肽提取制造方法將膠原蛋白液溶于O. 5mol/L乙酸中，用復合酶(風味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶)酶解4h (酶料比為2 1000)，置于95°C水浴中滅酶10min，4000r/min離心15min，得膠原肽溶液，真空冷凍干燥機_80°C真空冷凍干燥制成膠原多肽凍干粉制品。五、海洋生物膠原多肽清除氧自由基能力測定
清除氧自由基能力測定采用鄰苯三酚自氧化法。取膠原多肽樣品溶液O. 2ml，加入pH8. 2、50mmol/L Tris-HCL緩沖液4. 5mL，去離子水4mL，混均，25°C保溫lOmin，作為甲液，取O. 3mL用10mmol/L HCl溶液配制3mmol/L鄰苯三酚溶液，25°C保溫lOmin，作為乙液；以甲液與O. 3mL 10mmol/L的HCl溶液的混合液作為空白調零后，將甲液與乙液迅速混合，在320nm處每30s測定吸光度，在4min內求吸光度變化斜率I。以蒸餾水代替膠原多肽樣品作為對照樣品重復上述過程，計算出吸光度變化的斜率。六、海洋生物膠原多肽對小鼠體內抗氧化作用測定通過建立小鼠酒精急性肝氧化模型研究膠原多肽對小鼠體內抗氧化作用。取昆明種小鼠，按體重分為6組，分別為正常對照組、VC陽性對照組、陰性對照(乙醇損傷)組、膠原多肽高、中、低劑量組，每組10只，雌雄各半。其中，膠原多肽組分別給予低(50mg/kg .d)、中(100mg/kg · d)、高(200mg/kg · d)劑量，VC陽性對照組給予VC(75mg/kg · d)，正常對照組、陰性對照組給予等體積蒸餾水。連續7d，于末次給藥后2小時，除空白對照組外，均給予50%酒精12mL/kg，建立急性乙醇肝氧化模型。斷食12h后脫頸處死全部小鼠，取肝臟用冰冷生理鹽水洗凈后制備10%肝組織勻漿液，按試劑盒說明測定組織SOD、GSH-PX活性以及 MDA含量。
權利要求
1.一種用于清除人體內過量的氧自由基、抑制脂質過氧化、抗衰老、抗潰瘍、降血壓、提高人體免疫的海洋膠原多肽，其特征在于該膠原多肽由海洋生物提取、無動物免疫原性，經脫骨、酸溶脹、酶解、離心、透析、深度酶解步驟制成。
2.根據權利要求I的海洋膠原多肽，其中所說的海洋膠原多肽是從海洋生物多棘海盤車體壁中提取。
3.一種海洋膠原多肽的制造方法、該方法包括 (1)將多棘海盤車體壁洗凈，浸入2%鹽酸溶液中浸泡12h脫骨處理； (2)用3%檸檬酸溶液溶脹； (3)將酸溶脹后的多棘海盤車體壁用高速組織搗碎機攪碎均漿，于4°C下酶解24h； (4)高速離心機離心20min(10000r/min),取上清液； (5)將上清液用65%硫酸銨鹽析24小時，得膠原沉淀； (6)將膠原沉淀用透析袋透析48h，得酶促性膠原蛋白； (7)將膠原蛋白溶液用復合酶深度降解4h,高速離心機離心15min(4000r/min)得膠原肽溶液； (8)真空冷凍干燥機_80°C將膠原肽溶液凍干為膠原肽凍干粉。
4.根據權利要求3的方法，其制備膠原所使用的蛋白酶為木瓜蛋白酶(酶料比為I 100)。
5.根據權利要求3的方法，其步驟⑶包括用NaoH調PH= 10，靜置24h使酶失活的步驟。
6.根據權利要求3的方法，其步驟(6)包括將透析袋置入lmmol/LEDTA_2Na溶液中加熱IOmin后使用預處理工藝。
7.根據權利要求3的方法，其步驟(7)所說的復合酶為風味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶，三者比例為I : I : 1，其中酶料比為2 1000。
8.根據權利要求3的方法，其步驟(7)包括將膠原肽溶液置入95°C水浴中lOmin，使酶失活的步驟。
全文摘要
一種以海洋生物多棘海盤車體壁為材料提取膠原蛋白，再將膠原蛋白制備成海洋生物膠原多肽的方法，首先將多棘海盤車體壁用蛋白酶酶解提取膠原蛋白，再將所提取的膠原蛋白用復合酶降解得分子量約為100-10000Da的產物，即為膠原多肽。膠原多肽是一種具備多種生物活性的生物材料，其抗氧化性能優異，醫學用途廣泛，包括機體抗氧化、抗衰老、抗潰瘍、降血壓、預防骨質疏松、促進上皮細胞修復和生長、提高人體免疫力等。
文檔編號C07K2/00GK102718832SQ201210062889
公開日2012年10月10日 申請日期2012年3月5日 優先權日2012年3月5日
發明者蔣鵬 申請人:蔣鵬