專利名稱：一種普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從手性藥物普萘洛爾對(duì)映體中拆分出左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的方法。
背景技術(shù)：
手性藥物中不同對(duì)映體在體內(nèi)顯示出不同生物活性，這使得尋找高效、便捷的拆分方法顯得尤為重要。普萘洛爾屬于β_腎上腺阻滯劑類藥物，臨床上廣泛用于治療高血壓，心肌缺血和心律不齊等疾病，其中S型普萘洛爾的藥效大約是R型的40倍，且R型普萘洛爾還具有很強(qiáng)的抗生育作用。目前，拆分普萘洛爾對(duì)映體的方法主要有高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、離子對(duì)色譜法、薄層色譜法等。近十年來手性藥物的開發(fā)傾向于發(fā)展單一對(duì)映體，單一對(duì)映體藥物的世界市場(chǎng)每年以20%以上速度的增長。美國食品和藥物管理局早在1992年就規(guī)定，今后凡開發(fā)具有不對(duì)稱中心的藥物，必須給出手性拆分的結(jié)果。因此，進(jìn)行手性藥物的拆分并獲得單一的手性藥物，已成為分離科學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)重要分支。高速逆流色譜技術(shù)(high-speedcountercurrent chromatography, HSCCC)是 20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種不用固態(tài)支撐體或載體的液液分配技術(shù)，在分離過程中完全消除了氣、液色譜中常見的不可逆吸附現(xiàn)象，不會(huì)破壞分子，適用于分離極性大的手性化合物以及生物大分子；由于它獨(dú)特的分離機(jī)制，使其可用于制備分離，因此很適用于制備性分離手性化合物。近年來有關(guān)逆流色譜手性分離方面的研究有所加快。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種采用高速逆流色譜技術(shù)拆分普萘洛爾藥物對(duì)映體的方法。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明以鹽酸普萘洛爾為拆分對(duì)象，先將普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體，用L-酒石酸酯類和硼酸作為拆分試劑，L-酒石酸酯類添加到有機(jī)相中，硼酸添加到水相中，采用高速逆流色譜法得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾。本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案如下一種普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，包括如下步驟(I)將含有L-酒石酸酯的有機(jī)溶劑和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1混合均勻，靜置分層，分離得到有機(jī)相和水相；所述的有機(jī)溶劑為CfCS的鹵代烷烴、取代芳烴、crcs的烷烴或C2 C8的醚，所述的取代芳烴的取代基為一個(gè)或多個(gè)，所述取代基各自獨(dú)立選自鹵素或Cf C4的烷基，所述的有機(jī)溶劑中L-酒石酸酯的濃度為O. 02、. 5mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH在3. (Γ5. 0，其中硼酸的濃度為O. 02、. 30mol/L ；(2)將普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體， 并用步驟(I)所得水相溶解，制成樣品待用，樣品濃度為O. Γ15. Omg/ml ；
(3)采用高速逆流色譜法拆分普萘洛爾分別以步驟(I)得到的有機(jī)相和水相為固定相和流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5 30°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為50(T2000rpm，以O(shè). 2^3. Oml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)就認(rèn)為達(dá)到平衡)，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，以波長19(T400nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液；(4)分別從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體。本發(fā)明所述的有機(jī)溶劑為Cf C8的鹵代烷烴、取代芳烴、Cf C8的烷烴或C2 C8的醚，所述的Cfcs的鹵代烷烴可以是氯仿、二氯甲烷等，所述的取代芳烴優(yōu)選取代苯，例如甲苯、氯苯等，所述的Cfcs的烷烴可以是正己烷、正庚烷、正戊烷、環(huán)己烷、石油醚等，所述的C2 C8的醚可以是乙醚、甲基叔丁基醚等。優(yōu)選的有機(jī)溶劑為氯仿或二氯甲烷，最優(yōu)選的有機(jī)溶劑為氯仿。本發(fā)明所述的L-酒石酸酯可以是L-酒石酸正己酯、L-酒石酸正丁酯、L-酒石酸正辛酯、L-酒石酸正戊酯、L-酒石酸異丁酯或L-酒石酸-2-乙基己酯。本發(fā)明優(yōu)選所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的ρΗ=4. (Γ4. 4，其中硼酸濃度優(yōu)選為O. 05、. lmol/L ;最優(yōu)選所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH=4. 4，其中硼酸濃度為O. lmol/L。本發(fā)明優(yōu)選所述的有機(jī)溶劑中L-酒石酸酯的濃度為O. Γ0. 2mol/L，最優(yōu)選為O.lmol/L。本發(fā)明所述的步驟(2)中，可通過現(xiàn)有方法將普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體，例如可采用如下方法取普萘洛爾鹽酸鹽加入到l 2mol/L氫氧化鈉溶液中，加熱至4(T50°C攪拌2 3min，然后用二氯甲烷萃取，所得有機(jī)相用超純水洗滌至中性、用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液蒸除溶劑即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解并加入幾滴正己烷重結(jié)晶，得到普萘洛爾游離體。 本發(fā)明步驟(3 )中，經(jīng)高速逆流色譜法拆分之后，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均可大于95%。在拆分過程中，優(yōu)選逆流色譜分離柱的柱溫為5 15°C ;優(yōu)選以0. 5^2. Oml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)。本發(fā)明步驟(4)中，可通過現(xiàn)有方法分別從前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體，例如可采用如下方法將前峰洗脫液或后峰洗脫液堿化至pH為擴(kuò)14，析出大量白色粉末后直接用二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用飽和食鹽水洗滌至中性、無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液蒸除溶劑即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解并加入幾滴正己烷重結(jié)晶即可獲得純化的左旋普萘洛爾單體或右旋普萘洛爾單體。其中前峰洗脫液或后峰洗脫液可用氫氧化鈉溶液堿化，氫氧化鈉溶液濃度可以是2mol/L。本發(fā)明具體推薦所述拆分方法按照如下步驟進(jìn)行(I)將含有L-酒石酸酯的有機(jī)溶劑和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1混合均勻，靜置分層，分離得到有機(jī)相和水相；所述的有機(jī)溶劑為CfCS的鹵代烷烴、取代芳烴、crcs的烷烴或C2 C8的醚，所述的取代芳烴的取代基為一個(gè)或多個(gè)，所述取代基各自獨(dú)立選自鹵素或Cf C4的烷基，所述的有機(jī)溶劑中L-酒石酸酯的濃度為0. 02、. 5mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH在3. (Γ5. 0，其中硼酸的濃度為O. 02、. 30mol/L ；
(2)將普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體，并用步驟(I)所得水相溶解，制成樣品待用，樣品中普萘洛爾游離體濃度為O. Γ15. Omg/ml ；
(3)采用高速逆流色譜法拆分普萘洛爾分別以步驟(I)得到的有機(jī)相和水相為固定相和流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5 30°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為50(T2000rpm，以O(shè). 2^3. Oml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后(當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)就認(rèn)為達(dá)到平衡)，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，以波長 19(T400nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液；
(4)分別從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體。
進(jìn)一步優(yōu)選本發(fā)明所述拆分方法按照如下步驟進(jìn)行
(I)將含有L-酒石酸酯的有機(jī)溶劑和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1混合均勻，靜置分層，分離得到有機(jī)相和水相；所述的有機(jī)溶劑為氯仿或二氯甲烷， 所述的有機(jī)溶劑中L-酒石酸酯的濃度為O. Γ0. 2mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH在4. (Γ4. 4，其中硼酸的濃度為O. 05、. lmol/L ；
(2)將普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體，并用步驟(I)所得水相溶解，制成樣品待用，樣品中普萘洛爾游離體濃度為O. Γ15. Omg/ml ；
(3)采用高速逆流色譜法拆分普萘洛爾分別以步驟(I)得到的有機(jī)相和水相為固定相和流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5 15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為 50(T2000rpm，以O(shè). 5^2. Oml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，以波長19(T400nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液；
(4)分別從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體。
本發(fā)明可采用分析型和半制備型逆流色譜儀(分析型分離柱柱體積為20ml，半制備型分離柱柱體積為300ml)，逆流色譜儀由恒流泵、主機(jī)(分離柱)、紫外檢測(cè)器、記錄儀等組成。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于采用本方法拆分手性藥物普萘洛爾可以達(dá)到較高的分離度，并且該方法適用于各種型號(hào)的制備型逆流色譜儀，可以分離得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體。


圖1:實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖2:實(shí)施例2實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖3:實(shí)施例5實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖4:實(shí)施例 7實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖5:實(shí)施例10實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖6:實(shí)施例11實(shí)驗(yàn)條件下的半制備型高速逆流色譜圖7:圖6中A部分(110mirT200min)洗脫液的高效液相色譜檢測(cè)譜圖，即R型普萘洛爾；
圖8 :圖6中B部分(235mirT540min)洗脫液的高效液相色譜檢測(cè)譜圖，即S型普萘洛爾。
具體實(shí)施方式
下面以具體實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。
實(shí)施例1
普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體取610mg普萘洛爾鹽酸鹽，加入到 5mLlmol/L的氫氧化鈉溶液中,加熱至50°C攪拌2 3min,然后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中用二氯甲烷少量分批多次萃取，合并有機(jī)相并用超純水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，過濾后蒸除溶劑即得普萘洛爾游離體，粗品用二氯甲烷溶解加入幾滴正己烷重結(jié)晶，得到無色針狀晶體 488mg,即為游離普萘洛爾。
將氯仿水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相為O. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取 IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以O(shè). 50ml/ min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 08。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件為Chiralcel OD-R column (4. 6X 250mm);柱溫20°C; 流動(dòng)相0. lmol/L KPF6:乙腈(60:40, v/v)等度洗脫;流速O. 5ml/min ;檢測(cè)波長215nm ;進(jìn)樣量10μ I。
實(shí)施例2
將氯仿水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸異丁酯，水相為0. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有0. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為180 0rpm，以0. 50ml/ min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 10。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例3
將環(huán)己烷水(有機(jī)相含0. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相為0. 05mol/L的醋酸/ 三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有0. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以O(shè). 50ml/ min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為O. 34。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例4
將二氯甲烷水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相為O. 05mol/L的醋酸 /三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以O(shè). 50ml/ min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 10。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例5
將氯仿水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯,水相為O. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5°C,開啟速度控制器,轉(zhuǎn) 速為1800rpm,以O(shè). 50ml/min 的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 13。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于 95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例6
將氯仿水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相為0. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有0. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 80ml/ min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 01。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例7
將氯仿水(有機(jī)相含O. 2mol/L L-酒石酸正己酯，水相為O. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以O(shè). 50ml/ min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 21。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例8
將氯仿水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相為O. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng) 相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1500，以O(shè). 50ml/min 的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 01。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于 95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例9
將氯仿水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相為O. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4. 4并含有O. 05mol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以O(shè). 50ml/ min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 02。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例10
將氯仿水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相為0. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液PH = 4. O并含有0. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的IOmg普萘洛爾對(duì)映體用5ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用分析型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為20ml。進(jìn)樣前， 將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以O(shè). 50ml/ min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，計(jì)算分離度為1. 07。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
實(shí)施例11
將氯仿水(有機(jī)相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相為O. 05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。稱取實(shí)施例1中得到的108mg普萘洛爾對(duì)映體用20ml流動(dòng)相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
采用半制備型高速逆流色譜儀拆分普萘洛爾對(duì)映體，分離柱體積為300ml。進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為800rpm，以 2. OOml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。然后以波長280nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，接收前峰洗脫液和后峰洗脫液，計(jì)算分離度為1. 05。將收集得到的洗脫液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于95%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
從洗脫液中回收樣品將前峰和后峰洗脫液分別用lmol/L氫氧化鈉溶液堿化至 PHll左右，析出大量白色粉末后直接用二氯甲 烷少量多次萃取合并二氯甲烷層，用飽和食鹽水洗滌二氯甲烷層至中性，無水硫酸鈉干燥，過濾后蒸除溶劑即得左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾，最后用二氯甲烷溶解加入幾滴正己烷重結(jié)晶，獲得純化的22. 9mg左旋普萘洛爾和30.1mg右旋普萘洛爾，對(duì)映體純度大于95%。
權(quán)利要求
1.一種普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，包括如下步驟(1)將含有L-酒石酸酯的有機(jī)溶劑和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1 混合均勻，靜置分層，分離得到有機(jī)相和水相；所述的有機(jī)溶劑為CfCS的鹵代烷烴、取代芳烴、CrCS的烷烴或C2 C8的醚，所述的取代芳烴的取代基為一個(gè)或多個(gè)，所述取代基各自獨(dú)立選自鹵素或Cf C4的烷基，所述的有機(jī)溶劑中L-酒石酸酯的濃度為O. 02、. 5mol/L ； 所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的PH在3. (Γ5. O,其中硼酸的濃度為O. 02、. 30mol/ L ；(2)將普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體，并用步驟(I)所得水相溶解，制成樣品待用，樣品中普萘洛爾游離體濃度為O. Γ15. Omg/ml ；(3)采用高速逆流色譜法拆分普萘洛爾分別以步驟(I)得到的有機(jī)相和水相為固定相和流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5 30°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為 50(T2000rpm，以O(shè). 2^3. Oml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，以波長19(T400nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液；(4)分別從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體。
2.如權(quán)利要求1所述的普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑選自下列之一氯仿、二氯甲烷、甲苯、氯苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、環(huán)己烷、乙醚、石油醚或甲基叔丁基醚。
3.如權(quán)利要求1所述的普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑為氯仿或二氯甲烷。
4.如權(quán)利要求1所述的普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑為氯仿。
5.如權(quán)利要求1 4之一所述的普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，其特征在于所述的 L-酒石酸酯是L-酒石酸正己酯、L-酒石酸正丁酯、L-酒石酸正辛酯、L-酒石酸正戊酯、 L-酒石酸異丁酯或L-酒石酸-2-乙基己酯。
6.如權(quán)利要求5所述的普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，其特征在于所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH = 4. (Γ4. 4，其中硼酸濃度為O. 05、. lmol/L ;所述的有機(jī)溶劑中L-酒石酸酯的濃度為O. Γ0. 2mol/L。
7.如權(quán)利要求5所述的普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，其特征在于所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH=4. 4，其中硼酸濃度為O. lmol/L ;所述的有機(jī)溶劑中L-酒石酸酯的濃度為0. lmol/L。
8.如權(quán)利要求5所述的普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，其特征在于控制逆流色譜分離柱的柱溫為5 15°C，以0. 5^2. Oml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)。
9.如權(quán)利要求1所述的普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，其特征在于所述方法按照如下步驟進(jìn)行(I)將含有L-酒石酸酯的有機(jī)溶劑和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1 混合均勻，靜置分層，分離得到有機(jī)相和水相；所述的有機(jī)溶劑為氯仿或二氯甲烷，所述的有機(jī)溶劑中L-酒石酸酯的濃度為0. Γ0. 2mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH在4· (Γ4. 4， 其中硼酸的濃度為O. 05、· lmol/L ；(2)將普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體，并用步驟(I)所得水相溶解，制成樣品待用；(3)采用高速逆流色譜法拆分普萘洛爾分別以步驟(I)得到的有機(jī)相和水相為固定相和流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5 15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為 50(T2000rpm，以O(shè). 5^2. Oml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，以波長19(T400nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液；(4)分別從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種普萘洛爾藥物對(duì)映體拆分方法，包括如下步驟(1)將含有L-酒石酸酯的有機(jī)溶劑和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1混合均勻，靜置分層，分離得到有機(jī)相和水相；(2)將普萘洛爾鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普萘洛爾游離體，并用步驟(1)所得水相溶解，制成樣品待用；(3)采用高速逆流色譜法拆分普萘洛爾，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液；(4)分別從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體。本發(fā)明采用本方法拆分手性藥物普萘洛爾可以達(dá)到較高的分離度，并且該方法適用于各種型號(hào)的制備型逆流色譜儀，可以分離得到左旋普萘洛爾和右旋普萘洛爾的單體。
文檔編號(hào)C07B57/00GK103030567SQ201210259529
公開日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2012年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月25日
發(fā)明者童勝強(qiáng), 顏繼忠, 鄭燁 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)