專利名稱：一類茚并異喹啉類雌激素受體α調節劑的抗乳腺癌用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一類茚并異喹啉類的雌激素受體a調節劑及其抗乳腺癌作用，并同時在子宮等部位產生調節作用。
背景技術：
近年來，乳腺癌已在女性中成為排名第一的常見惡性腫瘤，抗乳腺癌藥物研究具有重要的學術和現實意義。研究發現,乳腺癌的發生發展與雌激素受體(estrogen receptor,ER)有關。ER是一種核受體，包括ERa和ERP兩種亞型。ERa和ERP的氨基酸序列在DNA結合域(DNAbinding domain,DBD)和配體結合域(ligand binding domain, LBD)的同源性分別為 96%和53%。在經典的雌二醇作用的靶組織如子宮、乳腺等部位有大量ERa分布，非經典的雌二醇作用的靶組織如前列腺、睪丸、卵巢等部位中ERa低表達或不表達，而ERP高表達。此夕卜，ERa和ERP的轉錄活性及其與協同因子的相互作用也往往不同。ERa與雌激素結合后通過結合祀基因上的雌激素應答元件(estrogen responseelement, ERE)調節基因表達或與其他核蛋白相互作用以改變基因的轉錄活性。許多證據表明ERa是一個很有吸引力的抗乳腺癌治療靶標。雌激素長期過度刺激、ER a表達水平增高或轉錄激活活性增強是導致乳腺 癌的一個重要因素。首先乳腺癌中存在的ER主要是ERa，當正常乳腺組織變成致瘤物時，ER a的水平增加而ERP水平降低。第二，乳腺癌作為一種激素依賴性腫瘤，其生長和轉移受雌激素調節，而雌激素可通過其受體活化轉錄上調促細胞生長基因的表達。ERa的調節劑能調節雌激素作用的機制是與雌激素競爭結合受體上的LBD，與ER a結合形成二聚體復合物，改變ER a的構象，從而阻斷共激活因子與ERa的AF2區相互作用，阻斷雌激素結合的ERa在乳腺癌細胞中的生長促進作用。目前很多公司、科研機構都開展了針對ERa調節劑的研究，對ER的分子生物學功能的研究文獻日益增多，相關專利也不斷出現。他莫昔芬(Tamoxifen)是首個癌癥祀向治療藥物，用于治療乳腺癌，1977年作為選擇性雌激素受體調節劑獲得FDA的批準用于絕經后晚期乳腺癌的治療。但是它對子宮細胞有刺激作用，長期使用易導致子宮內膜增生或子宮內膜癌，另外還能導致血管舒張、靜脈血栓等副作用。1997年禮來公司的雷洛昔芬獲得FDA批準用于治療骨質疏松，2007年FDA批準了其新適應證，用于降低絕經后骨質疏松女性患者的乳腺癌風險。但雷洛昔芬被警告可增加卒中相關死亡風險。雷洛昔芬是第二代選擇性雌激素受體調節劑，可以預防乳腺癌而不增加患子宮內膜癌風險。托瑞米芬是他莫昔芬的結構類似物，目前已經在美國等國家被批準用于治療浸潤性乳腺癌，較他莫昔芬有更小的潛在具遺傳毒性作用，引起繼發性子宮內膜癌的風險要小于他莫昔芬。由于雌激素替代療法治療更年期綜合征、骨質疏松、老年癡呆癥和心血管系統等疾病時能夠顯著降低絕經后骨質疏松性骨折和冠心病的發生率，但是可能誘發乳腺癌和子宮內膜癌；為克服雌激素致癌變的不良反應采取雌、孕激素聯合使用的性激素替代療法仍可能增加乳腺癌的發生率，還能導致的子宮內膜癌的發生，這些不良反應促使人們尋找一種對子宮和乳腺表現出抗雌激素作用而對骨髂和心血管系統具有雌激素樣作用的藥物。因此研究抗乳腺癌作用的ER a調節劑是研究選擇性雌激素受體調節劑的重要基礎。

發明內容
本發明的目的在于開發一類雌激素受體a調節劑在乳腺癌治療中的應用。本發明篩選的化合物為一批定向合成的可結合ER a靶點的化合物，利用熒光偏振方法建立的高通量篩選模型對該批化合物進行體外篩選，通過功能性驗證尋找先導化合物和候選藥物，同時對篩選所得活性化合物進行初步藥效學和機制研究，找到一類茚并異喹啉類結構的ER a調節劑，為抗乳腺癌治療提供候選藥物，并同時在子宮等部位產生調節作用。該類化合物由中國藥科大學藥物化學實驗室合成，其中待測化合物001672和001626合成方法可從專利向華，王天麟，肖紅，尤啟冬，姚瑤，李驍博，廖清江.茚并異喹啉酮衍生物、其制備方法及其醫藥用途 ZL 20091 0233991. 7 和 Hua Xiang, Tianlin Wang, Hong Xiao,Qidong You, Yao Yao, Xiaobo Li, QingjiangLiao.1ndenoisoquinolinone derivatives,manufacturing method and medical use thereof. W02011047515A1.中獲得。本發明的技術方案為建立ERa受體靶向調節劑篩選模型，初篩，復篩，構效關系分析，得到一類具有抗乳腺癌作用的候選藥物。具體步驟如下步驟一建立ER a調節劑高通量篩選模型。

步驟二 通過陽性藥驗證模型。步驟三使用ERa調節劑高通量篩選模型對待測化合物進行初篩、復篩，繪制待測化合物拮抗雌二醇與ERa結合曲線并測定IC5tl值。本發明提供上述化合物或其藥學上可接受鹽及其藥用組合物的醫療用途，尤其是在預防、延緩或治療ERa參與介導的疾病，特別是抗乳腺癌藥物中的用途。以上提及的定向合成的化合物在乳腺癌治療中的作用屬于本發明的保護范圍。


圖1:陽性藥4-0^3111( 1€611拮抗雌二醇與￡1^結合的抑制曲線圖。圖2 :待測化合物001672拮抗雌二醇與ERa結合的抑制曲線圖。圖3 :待測化合物001626拮抗雌二醇與ERa結合的抑制曲線圖。圖4 :待測化合物000394拮抗雌二醇與ERa結合的抑制曲線圖。圖5 :待測化合物000356拮抗雌二醇與ERa結合的抑制曲線圖。
具體實施例方式以下結合

本發明的
具體實施例方式1.待測化合物拮抗雌二醇與ERa結合活性測試I)實驗材料Estrogen Receptor-alpha(ER a ) Human Recombinant(Invitrogen，USA)、FluormoneTMES2 (Invitrogen, USA)、ES2Screening Buffer (Invitrogen, USA)、Estradiol為本室保存標準品，國產分析純、Tamoxifen為中國藥科大學藥物化學實驗室提供的標準品、384 孔黑色微孔板(Corning, USA)、槍頭(Axygen, USA)。2)實驗步驟 待測化合物每種精確稱量，加入DMSO溶劑成母液，然后使用ES2SCreeningBuffer配制待測化合物溶液至所需濃度，初篩濃度約為lX10_3mol/L。 溶液配制 2X Fluormone ES2/ER a Complex :使用 ES2Screening Buffer 配制2XFluormone 混合液使最終 FluormoneTM ES2 濃度為 9nM，ER a 濃度為 30nM。 進行競爭性結合實驗先在384孔黑色微孔板每孔加入50 U I化合物，再每孔加A 50ul 2XFluormone ES2與ER a混合溶液。同時加入50 U I雌二醇溶液(InM), 50 U I2X Fluornone ES2與ER a混合溶液作為100%競爭結合對照、加入50 Buffer, 50 u I2X Fluormone ES2與ERa混合溶液作為0%競爭結合對照以及加入100 Buffer作為空白對照。避光操作。室溫(20-25°C )孵育90min。 酶標儀讀取每孔偏振值。2.數據處理I)根據公式計算陽性藥和待測化合物拮抗雌二醇與ERa結合的抑制率2)繪制陽性藥4-0^&1110^作11拮抗雌二醇與￡1^結合曲線并測定IC5tl值，見圖1o3)使用毫偏值和對數濃度值作圖，繪制待測化合物拮抗雌二醇與ERa結合曲線并測定IC5tl值，見圖2-5。復篩實驗結果體外雌激素受體a調節劑篩選模型測得陽性藥4-OH-Tamoxifen的IC5tl為0. 34nM，篩選得到的化合物可以根據母核的結構總結為一類，結構式與體外雌激素受體a活性篩選IC5tl如下
權利要求
1.下式化合物或其藥學上可以接受的鹽
2.權利要求1要求保護的式(I)的化合物或其藥學上可以接受的鹽用于制備雌激素受體α調節劑的用途，并同時在子宮等部位產生調節作用。
3.按照權利要求2的用途，作為雌激素受體α調節劑，用于治療乳腺癌，并同時在子宮等部位產生調節作用。
全文摘要
本發明涉及式(I)的雌激素受體調節劑或其藥學上可接受的鹽。此類化合物可以與雌激素受體α結合，有效地產生抗乳腺癌等作用，并同時在子宮等部位產生調節作用。此類化合物具有很強的體外結合雌激素受體α的作用，可以有效的拮抗雌激素與雌激素受體α的結合，從而治療雌激素過多引起的乳腺癌，并同時在子宮等部位產生調節作用。
文檔編號C07D221/18GK103044325SQ201210541290
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月12日 優先權日2012年12月12日
發明者嚴明, 向華, 張陸勇, 苗靖姍, 唐智超 申請人:中國藥科大學