一種具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其應用的制作方法
【專利摘要】一種具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其應用。本發(fā)明涉及一種MERS-CoV合成肽疫苗及其應用，所述肽段選自下述氨基酸序列：SEQ?ID?NO：1，肽段的氨基酸序列為：CALPDTPSTLTPRSVR。含有該肽段的疫苗或藥物組合物，含該肽段和生理學上可接受的載體組合物、非特異性免疫反應增強劑或上述肽段的變體，所述肽段“變體”是與所述肽段區(qū)別僅在于保守性替代和／或修飾、而仍保留了肽段的抗原性和／或免疫原性特性的肽段，肽段變體與已鑒定的肽段優(yōu)選有大于70％同一性。用含有該肽段作為疫苗或藥物組合物可以誘導出特異性的中和抗體對中東呼吸窘迫癥冠狀病毒(MERS-CoV)進行中和，從而保護機體抵御MERS-CoV的感染，該MERS-CoV多肽可能成為理想的MERS-CoV預防／治療性候選疫苗的關(guān)鍵組分。
【專利說明】—種具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其應用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】本發(fā)明涉及一種具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其應用，該疫苗可進行免疫和疫苗接種，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]【背景技術(shù)】目前已知的能感染人的冠狀病毒共有六種，分別為20世紀60年代發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒 HCoV-229E和 HCoV-0C43，2003 年新出現(xiàn)的 SARS (Severe acute respiratorysyndrome)冠狀病毒SARS_CoV，2004年發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒HCoV_NL63，2005年新發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒HCoV-HKUI以及2012年7月在中東地區(qū)出現(xiàn)的新型人冠狀病毒:中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒(MERS-CoV，曾稱 HCoV-EMC)[1]。
[0003]MERS-CoV是2012年在中東地區(qū)從一個患有急性呼吸道疾病的病人中發(fā)現(xiàn)的一種新SARS樣冠狀病毒，病人的臨床表現(xiàn)為急性呼吸道感染和腎功能衰竭。英國科學家通過對該病毒基因組測序及系統(tǒng)發(fā)生分析，發(fā)現(xiàn)該病毒為一種新的人冠狀病毒(GenBank:JX869059) [1]。該病毒基因組全長30118bp，基因組結(jié)構(gòu)從5’端到3’端依次為:5’ -UTR-ORFlab-S-0RF3-0RF4a-0RF4b-0RF5-E-M-N-3’UTR，從系統(tǒng)發(fā)生學分析認為該病毒屬于β類冠狀病毒的2c亞群，而與SARS基因組相似性為54.9% [2]。美國CDC的監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，MERS-CoV病毒具有較高的致死率，從2012年4月至今全球已確診的114例患者中已死亡54例,死亡率達54% [3]。可見該病毒具有極高的危險性，很可能像SARS-CoV —樣造成嚴重的呼吸感染疫情暴發(fā)。對于該病毒的疫苗和治療藥物的研發(fā)儲備不容忽視。
[0004]在機體限制病毒進入和傳播的適應性免疫防御中，中和抗體發(fā)揮著十分關(guān)鍵的保護作用。研究顯示，冠狀病毒的S蛋白不僅是其親嗜性的主要決定因素，同時也是誘導機體產(chǎn)生中和抗體的主要抗原靶標，因此冠狀病毒疫苗的研發(fā)通常以S蛋白作為主要免疫原。然而到目前為止，尚缺乏對 于新發(fā)MERS-CoV病毒S蛋白的免疫原性以及中和抗原表位的詳細資料。
[0005]我們通過生物信息學分析分析了 MERS-CoV病毒S蛋白可能B細胞表位，從中篩選了部分得分較高的合成肽進行動物免疫后發(fā)現(xiàn)，采用MERS-CoV病毒S蛋白的抗原結(jié)合區(qū)(RBD，aa367-606)以及736-761位氨基酸多肽(aa736_761)免疫的實驗動物血清中均能檢測到有效的MERS-CoV中和抗體。其中RBD為傳統(tǒng)的受體結(jié)合區(qū)域，已有數(shù)個研究小組的研究證明和提示其能誘導產(chǎn)生中和抗體[4_8]。而aa736-761的中和抗體誘導能力此前未見報道，為本研究小組最新發(fā)現(xiàn)和證明的MERS-CoV特異性中和抗體誘導抗原，同時也說明其為MERS-CoV侵入細胞的潛在受體結(jié)合相關(guān)位點。
[0006]這一發(fā)現(xiàn)具有重要的意義，不僅可以幫助理解該新發(fā)病毒感染的過程和機制，也能為阻斷MERS-CoV感染提供新的疫苗設(shè)計思路。有望成為研發(fā)理想的MERS-CoV預防/治療性候選疫苗的關(guān)鍵組分。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007]本發(fā)明解決的問題在于提供一種MERS-CoV合成肽疫苗及其應用，將MERS-CoV合成肽免疫動物可以誘導出特異性的中和抗體。
[0008]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):[0009]—種中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的合成肽，其氨基酸殘基序列如SEQ.1D.N0.1所示。
[0010]所述的中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的合成肽在制備針對中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的預防性/治療性疫苗的應用。
[0011]所述的中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的合成肽在制備抗中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的藥物的應用。
[0012]所述的藥物為誘發(fā)針對中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒中和抗體的體液免疫應答的藥物。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果:
[0014]本發(fā)明提供的中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的合成肽，為全新的抗原表位區(qū)段，單獨免疫即能誘導產(chǎn)生病毒特異的中和抗體，表現(xiàn)出良好的免疫原性和免疫效果。因此，該MERS-CoV合成肽疫苗可能成為MERS-CoV預防/治療性候選疫苗的關(guān)鍵組分。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1:MERS_CoVS蛋白結(jié)構(gòu)及所用抗原所在位置示意圖。
[0016]圖2:免疫血清中抗原特異性IgG的滴度測定。
[0017]圖3:所誘導抗體血清對體外抗原的特異性識別。
[0018]圖4:不同合成肽所誘導產(chǎn)生的抗體中和能力比較。
圖5:RBD和SP3(aa736-761)均能誘導產(chǎn)生MERS-CoV特異性中和抗體。
[0019]下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。以下實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件如《分子克隆實驗指南》(第三版，科學出版社，2005)等本領(lǐng)域常用工具書中所述的條件，或按試劑生產(chǎn)廠家所建議的條件進行。
[0020]在MERS-CoV的表位中篩選部分合成肽作為疫苗進行免疫，以達到針對MERS-CoV的免疫效果，從而達到預防/治療中東呼吸系統(tǒng)綜合癥的目的，該免疫效果主要為誘導產(chǎn)生針對MERS-CoV特異的中和抗體。
[0021]實施例1:鑒于上述目的，首先進行表位肽的篩選與合成:
[0022]具體的MERS-CoV S蛋白表位肽選擇依據(jù)生物信息學軟件分析進行優(yōu)選，如下表所示
[0023]
【權(quán)利要求】
1.一種中東呼吸窘迫癥冠狀病毒的合成肽疫苗，其特征在于，其氨基酸殘基序列如SEQ.1D.N0.1 所示。
2.權(quán)利要求1所述的中東呼吸窘迫癥冠狀病毒合成肽在制備針對中東呼吸窘迫癥冠狀病毒的預防性/治療性疫苗的應用。
3.權(quán)利要求1所述的中東呼吸窘迫癥冠狀病毒合成肽在制備抗中東呼吸窘迫癥冠狀病毒的藥物的應用。
4.如權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于，所述的藥物為誘發(fā)針對丙型肝炎病毒中和抗體 的體液免疫應答的藥物。
【文檔編號】C07K14/165GK103724406SQ201310581981
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】譚文杰, 文波, 鄧瑤, 楊揚, 耿合員, 孟昕, 王惠娟 申請人:中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所