制造用于經皮給藥的透明質酸-蛋白結合體的方法以及由該方法制造的用于經皮給藥的 ...的制作方法
【專利摘要】本發明涉及用于藥物的經皮給藥的劑型及其制造方法。更特別地，涉及用于經皮給藥的藥物給藥體的制造方法、由該方法制造的用于經皮給藥的藥物給藥體及其用途，通過使用具有生物適應性、生物降解特性和經皮給藥特性的給藥體，能夠適用于包括疫苗的各種各樣的蛋白藥品及化學藥品的經皮藥物給藥系統，能夠安全地適用于人體，并且使得蛋白的生物活性最大化、生物結合效率高、藥效保持時間增加。
【專利說明】制造用于經皮給藥的透明質酸-蛋白結合體的方法W及由 該方法制造的用于經皮給藥的透明質酸-蛋白結合體

【技術領域】
[0001] 本發明涉及經皮給藥系統W及制造該經皮給藥系統的方法。更特別地，通過使用 具有生物適應性、生物降解能力和經皮給藥能力的給藥系統，本發明提供一種經皮給藥系 統和制造該經皮給藥系統的方法，對于各種蛋白、化學藥物和疫苗都是安全的給藥工具，并 提供一種最有效的經皮給藥方式，能夠對具有最大生物活性的、強生物結合的和長期療效 的蛋白進行給藥。

【背景技術】
[0002] 經皮給藥系統是將有效成分通過皮膚進行給藥，具有無疼痛、自我給藥和可在任 何時間處理等優點。
[0003] 但是，只有少量的藥物才能滲透過作為外部物質的最初屏障的皮膚，經皮給藥系 統尚未被積極地采用。
[0004] 因此，為了通過提高皮膚組織屏障的滲透性來增加穿過皮膚的量，正在積極進行 對使用微芯片的補下系統（patch system)的研究、W及對使用外部刺激例如超聲波、電場 等的經皮給藥系統的研究。
[0005] 包括精密成型的微芯片的補下在制造方面存在困難且成本高。在使用外部刺激來 提高皮膚滲透性的給藥系統的情況下，因為需要設備和刺激，會喪失經皮給藥系統的優點。
[0006] 因此，對于具有高皮膚滲透性和有效經皮給藥能力的，不需要設備和外部刺激的 經皮給藥系統提出了需求。


【發明內容】

[0007] 為了克服現有技術的問題，本發明提供一種制備透明質酸（HA)-蛋白結合體的方 法、由該方法制備的HA-蛋白結合體及其應用，其中，HA-蛋白結合體可W被用作經皮給藥 系統，該經皮給藥系統能夠維持蛋白質藥物的最大生物活性，并具有強生物結合效率，且能 夠用于多種水溶性活性成分。
[0008] 在研究中，本發明的發明人發現，使用透明質酸的經皮給藥系統與注射相比使用 起來更簡單，且給藥效率更高，盡管透明質酸的分子量高，但其具有優異的經皮能力。此外， 發明人發現，由于人體皮膚上存在HA受體因而細胞的生長可W被濃度控制，并且可W在例 如皮膚組織再生和化妝品的應用中有用。特別地，本發明中，被轉送給透明質酸的蛋白的 結合是在特定抑條件下進行的，防止具有胺基的其他氨基酸的反應，例如蛋白質中的賴氨 酸，從而增加最大活性、生物結合效率和有效性的持續時間。
[0009] 根據本發明的實施方式，提供一種制備透明質酸-蛋白結合體的方法，包括制備 由化學式1所表示的透明質酸-酵（HA-酵）的第1步驟，和該透明質酸-酵與水溶性蛋白 的N-末端反應的第2步驟。
[0010] 根據該方法，提供由化學式2所表示的透明質酸-蛋白結合體。
[0011] [化學式1]
[0012]

【權利要求】
1. 一種制造透明質酸-蛋白結合體的方法，包括： 制造由化學式1表示的透明質酸-醛（HA-醛）化合物的第1步驟；和 使該透明質酸-醛與水溶性蛋白的N-末端反應的第2步驟， [化學式1]
在化學式1中，m和η的合計為50至10000的整數，η是5至5000的整數。
2. 如權利要求1所述的方法，其中，該方法包括通過使透明質酸（ΗΑ)、透明質酸的鹽或 透明質酸的衍生物在黑暗條件下與氧化劑反應來對纖維素環進行開環的步驟。
3. 如權利要求2所述的方法，其中，透明質酸（ΗΑ)、透明質酸的鹽或透明質酸的衍生物 具有10000至3000000Da的分子量。
4. 如權利要求2所述的方法，其中，氧化劑是過碘酸鈉。
5. 如權利要求2所述的方法，其中，氧化劑以相對于透明質酸、透明質酸的鹽或透明質 酸的衍生物的摩爾量的1至10摩爾倍的量，與透明質酸、透明質酸的鹽或透明質酸的衍生 物反應2至24小時。
6. 如權利要求1所述的方法，其中，透明質酸-醛化合物具有10至50mol%的醛基取 代度。
7. 如權利要求1所述的方法，其中，第2步驟在pH5至7的緩沖溶液中進行。
8. 如權利要求1所述的方法，其中，緩沖溶液是pH5至6. 5的乙酸鈉緩沖溶液。
9. 如權利要求1所述的方法，其中，透明質酸-蛋白結合體具有結合到1個透明質 酸-醛化合物的分子上的1至10個蛋白分子。
10. 如權利要求1所述的方法，其中，該方法進一步包括在第2步驟之后使用胺來封閉 未與蛋白反應的殘留醛基的步驟。
11. 如權利要求10所述的方法，其中，胺是C1至C5的直鏈或支鏈的肼基甲酸烷基酯或 C1至C5的低級烷醇胺。
12. 如權利要求11所述的方法，其中，肼基甲酸烷基酯是肼基甲酸乙酯或肼基甲酸叔 丁酯，烷醇胺是甲醇胺、乙醇胺、丙醇胺、丁醇胺或戊醇胺。
13. 如權利要求10所述的方法，其中，胺是肼基甲酸烷基酯，且以相對于醛基的摩爾量 為5至10摩爾倍的肼基甲酸烷基酯反應12至24小時。
14. 如權利要求10所述的方法，其中，胺是烷醇胺，且以相對于醛基的摩爾量為5至10 摩爾倍的烷醇胺反應12至24小時。
15. 如權利要求1所述的方法，其中，水溶性蛋白是人體生長激素、α干擾素、紅細胞生 成素、腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體（TRAIL)、卵清蛋白或胰島素。
16. -種透明質酸-蛋白結合體，由化學式2表示，并由權利要求1?15中任一項所述 的方法來制造， [化學式2]
化學式2中， P是水溶性蛋白， m、η和1的合計為50至10000的整數， η和1的合計為5至5000的整數，且 1是1至1〇〇的整數。
17. -種用于經皮給藥的藥物組合物，含有權利要求16所述的透明質酸-蛋白結合體。
18. -種化妝品組合物，含有權利要求16所述的透明質酸-蛋白結合體。
19. 一種疫苗組合物，含有權利要求16所述的透明質酸-蛋白結合體。
20. -種透明質酸-蛋白結合體的給藥方法，包括： 制造由化學式2表示并由權利要求1?15中任一項所述的方法來制造的透明質酸-蛋 白結合體；和 對所需對象以有效治療量給藥該透明質酸-蛋白結合體， [化學式2]
化學式2中， Ρ是水溶性蛋白， m、η和1的合計為50至10000的整數， η和1的合計為5至5000的整數，且 1是1至1〇〇的整數。
【文檔編號】C07K17/10GK104302670SQ201380018200
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年2月7日 優先權日:2012年2月7日
【發明者】韓世光, 金應三, 梁貞娥, 金慧珉, 崔寬镕, 申智惠, 權正熙 申請人:Phi生物醫藥股份有限公司