專利名稱：一種從林蛙殘皮制備膠原海綿的方法
技術領域：
本發明屬于農產品綜合利用領域，具體涉及一種從林蛙殘皮制備膠原海綿的方法。
背景技術：
由于林蛙皮具有較強的修復能力和韌性，并且即使死亡也幾十年不腐，因此引起了諸多學者的興趣，研究認為這與林蛙皮含有大量抗菌活性物質和大量膠原蛋白有關，其中蛙皮膠原蛋白含量在26% -48%之間。多數研究集中于林蛙皮抗菌活性物質的研究，而關于蛙皮膠原蛋白的研究較少。膠原海綿是膠原液經發泡、固化、凍干和滅菌而制成的一種海綿狀固體制劑，由于膠原具有優越的生物相容性和安全性、生物可降解性和弱抗原性，使得它成為最優越的生物醫學材料。從林蛙殘皮(提取完抗菌活性物質)制備膠原海綿可促進林蛙綜合利用，提高林蛙附加值。

發明內容
本發明的目的是提供一種從林蛙殘皮制備膠原海綿的方法。該方法工藝簡單，適合工業化生產。所述方法包括干燥、酸酶提取、酶滅活、純化和凍干。干燥經醇提處理的蛙皮殘渣低溫干燥。酸酶提取在冰醋酸提取緩沖液中加入蛋白酶和蛙皮殘渣提取膠原蛋白。酶滅活加入EDTA滅活蛋白酶。純化抽濾獲得濾液，鹽析沉淀，蒸餾水透析過夜。凍干將透析后的膠原蛋白溶液用紫外線輻射，冷凍干燥，獲得膠原海綿。
具體實施例方式實施例I干燥經醇提處理的蛙皮殘渣低溫干燥(35 °C )。酸酶提取在50ml冰醋酸提取緩沖液中加入蛋白酶20mg和蛙皮殘渣lg，37°C提取 48h。酶滅活加入20mM EDTA滅活蛋白酶。純化抽濾獲得濾液，加入硫酸銨5mg，蒸餾水透析過夜。凍干將透析后的膠原蛋白溶液用紫外線輻射254nm，工作距離5cm，輻照時間4h，冷凍溫度-40°C冷凍干燥，獲得膠原海綿。實施例2 干燥經醇提處理的蛙皮殘渣低溫干燥(40°C )。
酸酶提取在200ml冰醋酸提取緩沖液中加入蛋白酶80mg和蛙皮殘渣4g，37°C提取
48h。
酶滅活加入20mM EDTA滅活蛋白酶。純化抽濾獲得濾液，加入硫酸銨20mg，蒸餾水透析過夜。
凍干將透析后的膠原蛋白溶液用紫外線輻射365nm，工作距離10cm，輻照時間3h，冷凍溫度-40 V冷凍干燥，獲得膠原海綿。
權利要求
1.本發明涉及一種從林蛙殘皮制備膠原海綿的方法，其特征在于所述方法包括下述步驟 a)干燥將經醇提處理的蛙皮殘渣低溫干燥； b)酸酶提取在冰醋酸提取緩沖液中加入蛋白酶和蛙皮殘渣； c)酶滅活加入EDTA滅活蛋白酶； d)純化抽濾獲得濾液，鹽析沉淀，蒸餾水透析過夜； e)凍干將透析后的膠原蛋白溶液用紫外線輻射，冷凍干燥，獲得膠原海綿。
2.根據權利要求Ia所述的干燥，其特征在于干燥溫度低于40°C。
3.根據權利要求Ib所述的酸酶提取，其特征在于冰醋酸濃度0.5M，提取緩沖液蛋白酶蛙皮殘渣=50 20 l(mL mg g)，37°C提取 48h。
4.根據權利要求Ic所述的酶滅活，其特征在于EDTA終濃度為20mM。
5.根據權利要求Id所述的純化，其特征在于硫酸銨濃度為0.lg/L。
6.根據權利要求Ie所述的凍干，其特征在于紫外線波長254-365nm，工作距離5-lOcm，輻照時間l_4h，冷凍溫度-40°C。
全文摘要
本發明公開了一種從林蛙殘皮制備膠原海綿方法。該方法工藝簡單，成本低，耗時短，適合工業化生產。所述方法包括干燥、酸酶提取、酶滅活、純化和凍干，為林蛙殘皮的綜合利用和高值產品開發提供依據。
文檔編號C08L89/00GK102634055SQ20121013228
公開日2012年8月15日 申請日期2012年5月3日 優先權日2012年5月3日
發明者關爽, 盧靜, 李提提, 焦雪軍, 王大成, 王振寧, 許琳莉, 鄧旭明, 黃國任 申請人:吉林大學