專利名稱：一種黃芪多糖的制備方法
技術領域：
本發明涉及中藥提取工藝，尤其涉及一種黃芪多糖的制備方法。
背景技術：
中藥材黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根。其性甘、微溫，入肺、脾經，具有補氣升陽、固表止汗、托毒排膿、利水消腫、斂瘡生肌等功效。中藥黃芪中含有多糖、蛋白質、生物堿、氨基酸、黃酮類、微量元素等多種生物活性物 質，其中黃芪多糖是其主要生物活性成分，它主要由葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖組成。大量體內外實驗及臨床研究表明，黃芪多糖具有增強機體免疫功能、強心降壓、降血糖、抗應激、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、抗氧化等多種藥理功效。實驗研究證明黃芪多糖具有促進機體對抗病毒誘導產生干擾的能力，一定程度地干擾病毒復制，抑制病毒繁殖。通過增強機體單核巨噬細胞系統中各種巨噬細胞功能，消滅機體內一些病原菌。同時黃芪多糖具有促進動物生長，提高機體對營養物質的利用率，可作為飼料添加劑顯著提高動物的生長速度，提升動物抗病力，從而提高動物肉類產品的質量。綜上所述，黃芪多糖營養價值高、對治療病癥療效好且副作用小、對畜牧飼養業也有很好的使用價值。傳統的黃芪多糖分離方法為水提醇沉法，但用這種方法所得黃芪多糖提取率和純度都不高。此外，醇沉前采用的減壓蒸發濃縮溫度高、易起泡，給蒸發濃縮造成困難，容易造成多糖分解并給實際造作帶來不便。而中國專利200610024178. 5公開了一種黃芪多糖的提取分離方法采用微波提取、微濾、超濾和醇沉技術精制黃芪多糖，其中微濾和超濾雖省時,但需要一定的微濾設備,使得生產成本大大增加。

發明內容
本發明的目的是提供一種工藝簡單、成本低廉、高純度提取黃芪多糖的方法。為解決上述技術問題，本發明采用如下方案
一種黃芪多糖的制備方法將黃芪用水浸泡，對混合物熱回流提取，過濾取濾液，將濾液離心后取其上清液，向上清液中加入殼聚糖絮凝，靜置，對溶液除雜后加入乙醇至含醇體積比達70-80%，3-5°C下靜置1. 5-2. 5h，離心取上清液，靜置22_24h，抽濾得沉淀，洗滌烘干即得黃芪多糖。所述的一種黃芪多糖的制備方法，按重量份1份黃芪用4-6份蒸餾水浸泡1. 5-2. 5h，對混合物熱回流1-1. 5h，過濾取濾液；向濾渣中加入4-5份水，并對混合物熱回流1-1. 5h，過濾取濾液，相同方法再次對濾渣進行I次以上的熱回流提取，將所有的濾液合并。所述的一種黃芪多糖的制備方法，其特征在于，按重量份每I份濾液離心后的上清液中加1%重量體積比濃度的殼聚糖絮凝劑O. 1-0. 2份，絮凝24h。所述的一種黃芪多糖的制備方法，其特征在于，每次離心皆在3000-5000r/min條件下離心10-20min。本發明的優點如下結合了 4種提純和除雜工藝，對設備和環境的要求較低，操作簡便，極大降低了生產成本的同時，對黃芪多糖做到了高純度提取，采用本發明方案提取的黃芪多糖的純度達90%以上。


圖1為本發明提取物中的蛋白質檢測的顏色對比；
圖2為本發明提取物中鞣質的檢測；
圖3為本發明提取物溶液經苯酚-硫酸法處理后的紫外分光光度法測出的結果。注圖1中從左到右依次是提取的淡黃色粉末狀物質、試驗后的提取物的溶液、試驗后的牛血清白蛋白溶液。圖2中從左到右依次是提取的淡黃色粉末狀物質、試驗后的提 取物的溶液、試驗后的常規中藥水提液。
具體實施例方式實施例1
取黃芪IOOg置于回流裝置中，加入蒸餾水400mL浸泡1. 5h，對混合物加熱回流lh，趁熱紗網過濾取濾液。向濾渣中加入蒸餾水500mL，對混合物加熱回流lh，過濾取濾液，按照此法,對濾渣加水后熱回流2次，并過濾取濾液。將所有的濾液合并,對其3000r/min離心IOmin,取上清液，濃縮，用蒸餾水調整至600mL的溶液備用。取600ml上述溶液，加入1%重量體積比濃度的殼聚糖絮凝劑60ml，絮凝24h，將絮凝除雜后的溶液，濃縮至100 mL，加入95%乙醇使含醇體積比達到70%，3 °C溫度下，在冰箱靜置1. 5 h后有大量粘性沉淀產生，對其3000r/min離心IOmin后棄沉淀，取上清液繼續靜置22h，有沉淀產生，抽濾，用無水乙醇和丙酮反復洗滌所得沉淀，烘干得淡黃色粉末狀物質，經公認的檢測方法檢測后，其純度達92%。實施例2
取黃芪IOOg置于回流裝置中，加入蒸餾水500mL浸泡2h，對混合物加熱回流1. 5h，趁熱紗網過濾取濾液。向濾渣中加入蒸餾水400mL，對混合物加熱回流1. 5h，過濾取濾液，按照此法,對濾渣加水后熱回流2次，并過濾取濾液。將所有的濾液合并,對其4000r/min離心15min，取上清液，濃縮，用蒸餾水調整至600mL的溶液備用。取600ml上述溶液，加入1%重量體積比濃度的殼聚糖絮凝劑90ml，絮凝24h，將絮凝除雜后的溶液，濃縮至100 mL,加入95%乙醇使含醇體積比達到75%，5 °C溫度下，在冰箱靜置2 h后有大量粘性沉淀產生，對其3000r/min離心15min后棄沉淀，取上清液繼續靜置23h，有沉淀產生，抽濾，用無水乙醇和丙酮反復洗滌所得沉淀，烘干得淡黃色粉末狀物質，經公認的檢測方法檢測后，其純度達95%。實施例3
取黃芪IOOg置于回流裝置中，加入蒸餾水600mL浸泡2. 5h，對混合物加熱回流lh，趁熱紗網過濾取濾液。向濾渣中加入蒸餾水500mL，對混合物加熱回流1. 5h，過濾取濾液，按照此法,對濾渣加水后熱回流2次，并過濾取濾液。將所有的濾液合并,對其5000r/min離心20min，去上清液，濃縮，用蒸餾水調整至600mL的溶液備用。取600ml上述溶液，加入1%重量體積比濃度的殼聚糖絮凝劑120ml，絮凝24h，將絮凝除雜后的水提液，濃縮至100 mL,加入95%乙醇使含醇量體積比達到80%，4 °C溫度下，在冰箱靜置2. 5 h后有大量粘性沉淀產生，對其5000r/min離心20min后棄沉淀，取上清液繼續靜置24h，有沉淀產生，抽濾，用無水乙醇和丙酮反復洗滌所得沉淀，烘干得淡黃色粉末狀物質，經公認的檢測方法檢測后，其純度達96%。中藥提取后，提取物中含量最多的雜質有兩種，分別為蛋白質和鞋質，為了確定本發明方案制取出的淡黃色粉末狀物質為黃芪多糖，確定定性實驗如下1.取實施例3中淡黃色粉末狀物質100 mg，定容于10 mL容量瓶中，即濃度為10 mg/mL待測溶液。2.取待測溶液I mL，加稀醋酸I滴，后加氯化鈉明膠試液4滴，振搖，以相同處理后常規中藥水提液為對照，觀察處理后的提取物溶液是否渾濁，判斷提取物中有無鞣質的存在。3.取待測溶液I mL，先加入雙縮脲A試液I mL，充分振蕩后，加入雙縮脲B試液2滴，振蕩，以相同處理后的lmg/mL的牛血清白蛋白為對照，觀察顏色的變化，判斷有提取物 中有無蛋白質的存在。4.對待測溶液經苯酚-硫酸法處理后生成的橙黃色溶液進行紫外分光光度法測量。實驗結果1.如圖1所示將提取的淡黃色粉末狀物質配制的待測溶液，經雙縮脲反應后，溶液不顯紫色，對照溶液lmg/mL牛血清白蛋白溶液顯紫色，說明提取的淡黃色粉末狀物質中不含雜質蛋白質。2.如圖2所示經氯化鈉明膠試液檢查后，待測溶液為陰性，常規中藥水提液出現渾濁為陽性，說明提取的淡黃色粉末狀物質中不含鞣質，初步判斷提取的物質為多糖物質。3.如圖3所示對待測溶液經苯酚-硫酸法處理后生成的橙黃色溶液在波長486nm處有最大的吸收峰，進一步證實提取的淡黃色粉末狀物質為黃芪多糖。取實施例1-2任一所得的提取物，對其進行以上的定性實驗，結果相同。證明了本發明采用的制備方法所得的提取物確為黃芪多糖。
權利要求
1.一種黃芪多糖的制備方法，其特征在于，將黃芪用水浸泡，對混合物熱回流提取，過濾取濾液，將濾液離心后取其上清液，向上清液中加入殼聚糖絮凝，靜置，對溶液除雜后加入乙醇至含醇體積比達70-80%，3-5°C下靜置1. 5-2. 5h，離心取上清液，靜置22_24h，抽濾得沉淀，洗滌烘干即得黃芪多糖。
2.如權利要求1所述的一種黃芪多糖的制備方法，其特征在于，按重量份1份黃芪用4-6份蒸餾水浸泡1. 5-2. 5h，對混合物熱回流1-1. 5h，過濾取濾液；向濾渣中加入4_5份水，并對混合物熱回流1-1. 5h，過濾取濾液，相同方法再次對濾渣進行I次以上的熱回流提取，將所有的濾液合并。
3.如權利要求1所述的一種黃芪多糖的制備方法，其特征在于，按重量份每I份濾液離心后的上清液中加1%重量體積比濃度的殼聚糖絮凝劑O. 1-0. 2份，絮凝24h。
4.如權利要求1所述的一種黃芪多糖的制備方法，其特征在于，每次離心皆在3000-5000r/min 條件下離心 10_20min。
全文摘要
本發明涉及中藥提取工藝，尤其涉及一種黃芪多糖的制備方法。其步驟為將黃芪用水浸泡，對混合物熱回流提取，過濾取濾液，將濾液離心后取其上清液，向上清液中加入殼聚糖絮凝，靜置，對溶液除雜后加入乙醇至含醇體積比達70-80%，3-5℃下靜置1.5-2.5h，離心取上清液，靜置22-24h，抽濾得沉淀，洗滌烘干即得黃芪多糖。本發明的工藝結合了4種提純和除雜工藝，對設備和環境的要求較低，操作簡便，極大降低了生產成本的同時，對黃芪多糖做到了高純度提取，采用本發明方案提取的黃芪多糖的純度達90%以上。
文檔編號C08B37/00GK102993321SQ20121036541
公開日2013年3月27日 申請日期2012年9月27日 優先權日2012年9月27日
發明者賀培益 申請人:河南牧翔動物藥業有限公司