本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，涉及化合物3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯，制備所述化合物的方法和所述化合物用于制備奧貝膽酸的用途。本發(fā)明還涉及一種制備奧貝膽酸的方法，所述方法包括以下步驟：步驟(1)：制備3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯；和步驟(2)：以3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯為中間體，制備奧貝膽酸。

背景技術：

類法尼醇X受體(FXR)屬于配體激活的轉錄因子核受體的家族成員，其天然配體包括初級膽汁酸鵝脫氧膽酸、次級膽酸石膽酸和脫氧膽酸等。FXR是膽汁傳感器，其作用包括與其它核受體協(xié)調，參與膽汁酸代謝與膽固醇代謝等重要環(huán)節(jié)。

奧貝膽酸(Obeticholic acid,OCA)，即6α-乙基鵝去氧膽酸(6α-ethylchenodeoxycholic acid,6-ECDCA)，別名INT-747或DSP-1747，是一種人工合成的FXR配體。臨床研究表明，奧貝膽酸對原發(fā)性肝纖維化、酒精性脂肪肝、膽汁酸性腹瀉和門靜脈高壓等多種與肝臟相關的疾病有良好的治療作用，對這些適應癥的治療正在進行II期和III期的臨床研究。美國FDA于2016年5月27日加速批準了奧貝膽酸聯(lián)合熊去氧膽酸(UDCA)用于患有治療UDCA應答不充分的原發(fā)性膽汁性膽管炎(PBC)的成人患者，或作為單藥治療不能耐受UDCA的成人患者。此外，奧貝膽酸對糖尿病等代謝性疾病也有可期待的治療作用，目前正在進行臨床前研究。

文獻報道的奧貝膽酸的合成工藝主要有如下三種：

1.專利US20090062526以及Steroids(Vol77,2012,pp1335)報道了如下所示的奧貝膽酸的合成工藝(文獻工藝路線1)：

文獻工藝路線1

文獻工藝路線1的特征如下：

(1)將3α-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸(化合物1)的3位羥基用四氫吡喃保護，得到3α-四氫吡喃氧基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸(化合物2)。

(2)將化合物2在六甲基硅基磷酰胺(HMPA)中，在二異丙基氨基鋰(LDA)和丁基鋰存在下，與碘乙烷反應，在6位引入乙基，然后用對甲苯磺酸吡啶鹽(PPTS)脫去四氫吡喃基保護，得到3α-羥基-6β-乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸(化合物3)，最后用硼氫化鈉將化合物3的酮基還原為羥基，得到目標化合物奧貝膽酸(化合物4)。

2.專利WO2006122977A及其同族專利提供了如下所示的奧貝膽酸的合成工藝(文獻工藝路線2)：

文獻工藝路線2

文獻工藝路線2的特征如下：

(1)步驟1：將3α-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸(化合物1)，轉化為3α-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯(化合物5)；

(2)步驟2：化合物5在甲苯中，在三乙胺的存在下，與三甲基氯硅烷反應，得到3α-(三甲基硅基氧基)-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯(化合物6)；

(3)步驟3：化合物6在二異丙基氨基鋰(LDA)的存在下，與三甲基氯硅烷反應，得到3α,7-二(三甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯(化合物7)；

(4)步驟4：化合物7在二氯甲烷中，在三氟化硼的存在下，與乙醛發(fā)生縮合反應，然后水解，得到3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯(化合物8)；

(5)步驟5：將化合物8進行水解，得到3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸(化合物9)；

(6)步驟6：將化合物9進行催化氫化還原，并在堿性條件下異構化，得到3α-羥基-6α-乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸(化合物3)；

(7)步驟7：用硼氫化鈉將化合物3的酮基還原，得到奧貝膽酸(化合物4)。

3.專利WO2013192097及其同族專利報道了提供了如下所示的奧貝膽酸的合成工藝(文獻工藝路線3)：

文獻工藝路線3

文獻工藝路線3在文獻工藝路線2的基礎上，將文獻工藝路線2的步驟2和步驟3合并，即，在四氫呋喃中，直接將3α-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯在LDA存在的條件下，與三甲基氯硅烷反應，得到3α,7-二(三甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯。

綜合分析上述三條文獻工藝路線，可以發(fā)現(xiàn)，文獻工藝路線1雖然路線較短，但這一路線也有明顯的缺點，包括(1)終產物純度不好，需要柱層析分離，不適合工業(yè)化生產；(2)第3步的收率很低，只有12-13％，使得總收率只有3.5％；(3)合成中使用的溶劑六甲基磷酰胺(HMPA)具有致癌性。因此，文獻工藝路線1不適合大量生產。

文獻工藝路線2和文獻工藝路線3都將3α,7-二(三甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯作為關鍵中間體，這兩種方法存在以下問題：(1)3α,7-二(三甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯(化合物7)含有兩個三甲基硅醚基團，而三甲基硅醚基團性質不穩(wěn)定，對酸或堿都比較敏感，使得3α,7-二(三甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯在后處理過程中可能會水解為單硅醚產物，影響終產物的收率和純度；(2)在制備3α,7-二(三甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的過程中，需要使用LDA(四氫呋喃溶液)，此試劑價格昂貴，而且必須在無水條件下密封保存，增加了貯存和運輸?shù)睦щy，并且使用時需要在無水條件下操作，不便于使用。

技術實現(xiàn)要素：

在本發(fā)明中，如果表示同一化合物時，化合物的命名與化學結構式不符，以化學結構式或化學反應式為準。

在本發(fā)明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術名詞具有本領域技術人員所通常理解的含義。并且，本文中所涉及的實驗室操作步驟均為相應領域內廣泛使用的常規(guī)步驟。同時，為了更好地理解本發(fā)明，下面提供相關術語的定義和解釋。

如本文中使用的，術語“奧貝膽酸”是指6α-乙基鵝去氧膽酸(即3α,7α-二羥基-6α-乙基-5β-膽烷-24-酸)，其具有以下結構：

如本文中使用的，化合物3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯和3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯分別具有如式(1)和式(1’)所示的結構。

如本文中使用的，術語“有機堿”是指呈堿性的有機化合物，例如有機胺、有機胺的堿金屬鹽、醇的堿金屬鹽和烷基堿金屬化合物。

如本文中使用的，術語“有機胺”是指含有氨基的有機化合物，包括但不限于脂肪胺(例如乙二胺、三乙胺、二異丙基乙胺、二異丙胺)、脂環(huán)胺(例如1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯(DBU))和芳香胺(例如苯胺、二苯胺)。

如本文中使用的，術語“堿金屬”包括鋰、鈉、鉀、銣、銫、鈁。

如本文中使用的，術語“室溫”是指25±5℃。

本發(fā)明所述的“約”應該被本領域技術人員理解，并將隨其所用之處的上下文而有一定程度的變化。如果根據(jù)術語應用的上下文，對于本領域技術人員而言，其使用不是清楚的，那么“約”的意思是不超過所述特定數(shù)值或范圍的正負10％。

為了克服現(xiàn)有奧貝膽酸合成工藝中存在的問題，本發(fā)明人通過深入的研究和創(chuàng)造性的勞動，提供了以下制備奧貝膽酸的方法，所述方法以3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯為中間體。本發(fā)明可以避免現(xiàn)有方法中，由于3α,7-二(三甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的性質不穩(wěn)定，而對后續(xù)操作、產物純度和收率帶來的不利影響。另一方面，本發(fā)明還提供了一種制備3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的方法，所述方法避免使用價格昂貴且不便于貯存、運輸和操作的LDA(四氫呋喃溶液)，降低了生產成本，并且使得操作簡單方便。本發(fā)明的技術方案如下：

在一個方面，本發(fā)明提供了化合物3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯，其具有如式(1)所示的結構。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯為3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯，其具有如式(1’)所示的結構。

在一個方面，本發(fā)明提供了一種制備化合物3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的方法，其包括以下步驟：在有機堿和碘鹽存在的條件下，使3-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯與叔丁基二甲基氯硅烷反應，得到3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述方法包括以下步驟：在有機堿和碘鹽存在的條件下，使3α-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯與叔丁基二甲基氯硅烷反應，得到3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述有機堿為有機胺；更優(yōu)選地，所述有機胺選自三乙胺、二異丙基乙胺和1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯；特別優(yōu)選地，所述有機胺為三乙胺。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述碘鹽選自堿金屬的碘鹽和四丁基碘化銨；更優(yōu)選地，所述堿金屬的碘鹽選自碘化鈉、碘化鉀和碘化鋰；特別優(yōu)選地，所述碘鹽為碘化鈉。

在一個優(yōu)選的實施方案中，3-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯：叔丁基二甲基氯硅烷：碘鹽：有機堿的投料比(mol:mol:mol:mol)為1:3～6:3～6:4～8，例如1:3～5:4～6:4～8、1:3～5:6～8:4～8、1:5～6:4～6:4～6、1:5～6:6～8:4～6、1:3～6:4～6:4～6或1:3～6:3～4:6～8，例如1:3:5:4、1:6:6:4、1:5:6:8、1:5:3:8或1:5:5:6。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述反應的溫度為20℃～60℃，更優(yōu)選為40℃～60℃。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述反應在溶劑(例如非質子溶劑)中進行，所述溶劑選自芳香烴(例如甲苯)；醚(例如四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲基四氫呋喃或甲基叔丁基醚)、鹵代烷烴(例如二氯甲烷或三氯甲烷)、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺和丙酮中的一種或多種。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述溶劑為由芳香烴與乙腈組成的混合溶劑。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述芳香烴為甲苯。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述芳香烴與乙腈的體積比為1:3～3:1，例如1:3～1:2、1:3～1:1、1:1～2:1或1:1～3:1，例如1:3、1:2、1:1、2:1或3:1。

在一個優(yōu)選的實施方案中，3-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯與溶劑的質量:體積比(g:mL)為1:5～1:15，例如1:5～1:7、1:7～1:12、1:5～1:10或1:10～1:15，例如1:5、1:7、1:10、1:12或1:15。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述反應進行3～6小時。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述方法還包括：對3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯進行分離和/或純化。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述分離和/或純化包括以下步驟中的一個或多個：

(1)對反應后的混合物進行萃取，分出有機層；

(2)使用水或者飽和食鹽水對有機層進行洗滌；

(3)利用無水硫酸鹽(例如無水硫酸鈉)對有機層進行干燥；

(4)對干燥后的有機層進行減壓蒸餾，分離出3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯；和

(5)利用硅膠柱層析對3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯進行純化。

在一個方面，本發(fā)明提供了化合物3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯用于制備奧貝膽酸的用途。

在一個方面，本發(fā)明提供了一種制備奧貝膽酸的方法，所述方法包括以下步驟：

步驟(1)：制備3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯；和

步驟(2)：以3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯為中間體，制備奧貝膽酸。

在一個優(yōu)選的實施方案中，通過如上所述任一項的制備3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的方法進行步驟(1)。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯為3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯。

在一個優(yōu)選的實施方案中，步驟(2)進一步包括以下步驟：

步驟(2-1)：將3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯轉化為3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯；

步驟(2-2)：將3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯轉化為3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸；

步驟(2-3)：將3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸轉化為3-羥基-6α-乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸；和

步驟(2-4)：將3-羥基-6α-乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸轉化為奧貝膽酸。

在一個優(yōu)選的實施方案中，步驟(2-1)包括：在三氟化硼的存在下，使3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯與乙醛反應，得到3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-1)中，3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯：三氟化硼：乙醛的投料比(mol:mol:mol)為1:2～3:1.5～2.5，例如1:2～2.5:1.5～2、1:2.5～3:2～2.5、1:2～3:1.5～2或1:2.5～3:1.5～2.5；例如1:2:1.5、1:2.5:2、1:3:1.5、1:2:2.5、1:3:2.5或1:2.5:2.5

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-1)的反應在溶劑(例如非質子溶劑)中進行，所述溶劑選自芳香烴(例如甲苯)；醚(例如四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲基四氫呋喃或甲基叔丁基醚)、鹵代烷烴(例如二氯甲烷或三氯甲烷)、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺和丙酮中的一種或多種。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述溶劑選自二氯甲烷和乙腈。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-1)中，所述反應的溫度為-20℃～-70℃，例如-20℃～-30℃、-30℃～-40℃、-30℃～-50℃、-40℃～-60℃、-60℃～-65℃或-60℃～-70℃；更優(yōu)選為-60℃～-65℃。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-1)還包括對反應后的混合物進行后處理。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述后處理包括以下步驟中的一個或多個：

(1)將反應后的混合物與堿性水溶液混合；

(2)對反應后的混合物進行萃取，分出有機層；

(3)使用水或者飽和食鹽水對有機層進行洗滌；

(4)利用無水硫酸鹽(例如無水硫酸鈉)對有機層進行干燥；

(5)對干燥后的有機層進行濃縮。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-2)包括：在堿性化合物的存在下，使3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯水解，得到3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-2)中的堿性化合物選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨、碳酸鈉和碳酸氫鈉；優(yōu)選氫氧化鈉。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-2)中，堿性化合物：3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯的投料比(mol:mol)大于1:1。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-2)中的反應在室溫或加熱條件下進行。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-2)包括：將3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯用溶劑溶解，并與堿性化合物的水溶液混合；所述溶劑為能夠與水混溶的溶劑(例如甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃、乙腈；優(yōu)選甲醇)。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-2)還包括對反應后的混合物進行后處理。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述后處理包括以下步驟中的一個或多個：

(1)使用酸性化合物(例如磷酸)對過量的堿性化合物進行中和；

(2)對反應后的混合物進行萃取，分出有機層；

(3)使用水或者飽和食鹽水對有機層進行洗滌；

(4)利用無水硫酸鹽(例如無水硫酸鈉)對有機層進行干燥；

(5)對干燥后的有機層進行濃縮。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-3)包括：在催化劑(例如鈀碳)存在的條件下，對3-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸進行氫化還原，并在堿性條件下異構化，得到3-羥基-6α-乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸。

在一個優(yōu)選的實施方案中，所述步驟(2-4)包括：對3-羥基-6α-乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸進行還原反應，得到奧貝膽酸。

在一個方面，本發(fā)明提供了奧貝膽酸，其由如上所述任一項的方法得到。

有益效果

本發(fā)明的制備3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的方法，避免了使用價格較貴、并且不易儲存、運輸和使用的LDA，也避免了用LDA進行反應所需要的低溫條件(-20℃～-40℃)，可以使生產成本得到降低，使反應的操作得到簡化。

本發(fā)明的制備奧貝膽酸的方法，以3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯為中間體，具有以下效果中的一個或多個：

(1)3,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的性質較穩(wěn)定，在后處理過程中不容易發(fā)生水解；

(2)避免了使用價格較貴、并且不易儲存、運輸和使用的LDA，也避免了用LDA進行反應所需要的低溫條件(-20℃～-40℃)，可以使生產成本得到降低，使反應的操作得到簡化；

(3)避免了使用致癌性的六甲基磷酰胺(HMPA)，降低對操作人員健康的危害，減少環(huán)境污染。

具體實施方式

下面將結合附圖和實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列附圖和實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限定本發(fā)明的范圍。附圖和實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產品。所用無水溶劑均為市售。

附圖說明

圖1為實施例1得到的3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的核磁氫譜。

圖2為實施例1得到的3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的ESI-MS譜圖。

實施例1按照路線1所示的步驟，制備3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯。

路線1

制備過程：將3α-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯(136.5g,337.4mmol)加至反應容器中，所述反應容器上安裝了機械攪拌裝置以及配有干燥管的冷凝管。用無水乙腈(682mL)和無水甲苯(682ml)將3α-羥基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯溶解，依次加入無水NaI(252g,1.68mol)和三乙胺(281mL,2.012mol)，反應容器中的溶液變?yōu)閼覞嵋骸７执渭尤胧宥』谆裙柰?253.18g,1.68mol)，約15分鐘加完。將反應體系的溫度升至40℃，攪拌1小時，然后升溫至50℃反應3-6小時。將反應混合物降溫至室溫，濾去不溶物，小心加至冰水混合物(1360mL)中，充分攪拌，待分層后，分出甲苯有機層；水層用682mL甲苯洗滌。合并有機層，用純水洗滌(1540mL×3次)，再用飽和鹽水洗滌1000mL洗滌1次，用Na₂SO₄干燥。干燥后的溶液在外溫低于50℃的條件下減壓蒸餾，蒸發(fā)溶劑得到油狀物，即為3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯粗品(收率接近100％)，可直接用于后續(xù)反應。

取少量樣品，經硅膠柱層析分離純化(使用石油醚與乙酸乙酯的混合溶劑(石油醚:乙酸乙酯的體積比為100:5)洗脫，得到3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯純品，用于表征。

產物的表征：圖1為3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的核磁氫譜。核磁數(shù)據(jù)：¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ,0.06(s,3H),0.08(s,3H),0.64(s,3H),0.77(s,3H),0.81(s,9H),0.87(s,9H),0.80-2.51(m,28H),2.19(m,1H),2.30(m,1H),3.47(m,1H),3.61(s,3H),4.66(d,J＝4.48Hz,1H)。

圖2為3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯的ESI-MS譜圖。質譜數(shù)據(jù)：ESI-MS(m/e,％):633(MH⁺,100),655(MNa⁺)。

實施例2按照路線2所示的步驟，由3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯，制備3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸。

路線2

步驟1：3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯與乙醛縮合，制備3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲酯。

(1)將3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯粗品(按照100％收率折算，337.4mmol)油狀物，用500mL無水THF溶解，在50℃以下，真空蒸餾除去THF，重復此步驟，直至THF中的水分含量控制在0.5％以內(用KF滴定測得)。剩余液于二氯甲烷(224mL)中溶解，預冷至-60℃～-65℃，加入乙醛(38.1ml，676mmol)，在-60℃～0℃條件下保存。

(2)N₂保護下，將二氯甲烷(787ml)和三氟化硼(20wt％乙腈溶液，357mL，843.5mmol)于單獨反應器中，冷卻至-60℃～-65℃。在此溫度下，加入(1)中的含有3α,7-二(叔丁基二甲基硅基氧基)-6-烯-5β-膽烷-24-酸甲酯和乙醛的溶液。反應混合物在-60℃～-65℃下攪拌約2小時，逐漸升溫至至23℃～28℃，再攪拌約3小時。將反應液冷卻至2℃～10℃，加至預冷的NaOH水溶液中，強烈攪拌10min后，分出有機層，水層用二氯甲烷洗滌(150mL×2次)。有機層合并，用200mL水洗滌，再用200mL氯化鈉溶液洗滌，濃縮后得到3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸甲粗品，直接用于后續(xù)反應。

步驟2：用3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-膽烷-24-酸甲酯，制備3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-膽烷-24-酸。

將3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-膽烷-24-酸甲酯(粗品，約337mmol)加至單口瓶中，50℃下，將剩余溶劑真空蒸干，殘留液溶于甲醇(200mL)中，冷卻至室溫，加入含有23.4gNaOH的水溶液60mL，升溫至50℃，反應2小時。將反應液用水(580mL)稀釋，加入甲苯(194mL)，充分攪拌后，分出水層。將水層轉移至另一容器中，加入乙酸乙酯(600mL)。強烈攪拌下滴入稀釋后的85％磷酸溶液(稀釋前的體積為43mL)，充分攪拌后分出有機層。水層用乙酸乙酯洗滌(100mL×2次)。合并有機層，用NaCl飽和溶液洗滌，Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮，直至蒸發(fā)物中水分含量低于1％，或者達到恒定的沸點，繼續(xù)濃縮至大部分溶劑蒸出。向剩余物中加入乙酸乙酯(350ml～450mL)，加熱一段時間后，攪拌下降溫至20～25℃，放入冰箱冷藏(0-4℃過夜)，抽濾，用冷乙酸乙酯洗滌(50mL×2次)，風干后得到產物56g，收率40％。

3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸的核磁數(shù)據(jù)如下，與文獻WO2013192097報道一致。¹H-NMR(CDCl₃,400MHz),δ,0.63(3H,s),0.92(3H,d,J＝6.0Hz),0.99(3H,10s),1.04-1.50(13H,m),1.61-2.01(7H,m),1.67(3H,d,J＝7.2Hz),2.21-2.28(2H,m),2.35-2.41(2H,m),2.56(1H,dd,J＝12.8,4.0Hz),3.58-3.69(1H,m),6.16(lH,q,J＝7.2Hz)。

參考WO2013192097的方法，在鈀碳存在的條件下，對3α-羥基-6-亞乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸進行氫化還原，并在堿性條件下異構化，得到3α-羥基-6α-乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸。對3α-羥基-6α-乙基-7-酮基-5β-膽烷-24-酸進行還原反應，得到奧貝膽酸，收率為80％，純度為99％。

盡管本發(fā)明的具體實施方式已經得到詳細的描述，但本領域技術人員將理解：根據(jù)已經公開的所有教導，可以對細節(jié)進行各種修改和變動，并且這些改變均在本發(fā)明的保護范圍之內。本發(fā)明的全部范圍由所附權利要求及其任何等同物給出。