本發明涉及高分子化學領域，尤其涉及一種預活化聚苯乙烯微球的制備方法。
背景技術：
表面功能化聚合物微球由于表面羧基、氨基或者羥基等活性基團的存在而易于與酶、蛋白質、核酸等結合反應，使之在生物、化學、材料、醫學等方面應用廣泛。當前，制備粒徑可控、單分散性功能化聚合物微球已成為高分子材料領域的一個研究熱點。聚合物微球具有比表面積大，附性強，凝集作用大及表面反應能力強等特性，有著廣泛的應用前景。微米級顆粒度均勻的聚合物微球，作為功能高分子材料，在分析化學、生物化學、免疫醫學、標準計量以及某些高新技術領域中有著廣泛的用途，因而對這類材料的研究越來越引起了重視。
因其穩定性問題，在使用之前，微球表面是未經活化的，沒有吸附或化學膠連能力，在使用之前必須先經活化處理，才能與抗體或者抗原等蛋白質以吸附或化學方式結合在一起；活化時需要加入DEC試劑，活化完成后，需要對這個試劑進行洗脫處理，大致流程為活化、離心、洗滌、分散、加入蛋白結合、配成試劑。這個過程中，活化的效率不容易受控制；分散過程一般是用超聲、壓濾、超濾等辦法，但都受制于設備的產能，每批生產量有限。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種預活化聚苯乙烯微球的制備方法，以苯乙烯(St)為單體，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)為分散穩定劑，30％乙醇水溶液為分散介質，偶氮二異丁腈(AIBN)為引發劑，用分散聚合工藝制備聚苯乙烯微球；再將聚苯乙烯微球加入到由乙磺酸(MES)，碳化二亞胺(EDAC)和N-經基丁二醜亞胺(NHS)配制成的微球預活化液中，制得預活化聚苯乙烯微球。
本發明的預活化聚苯乙烯微球的制備方法，包括以下步驟：
步驟一，聚苯乙烯微球的制備：
苯乙烯預處理，用10％的Na0H溶液進行堿洗三次，用50倍量的去離子水沖洗，減壓蒸餾；
將聚乙烯吡咯烷酮PVP加入到30％乙醇水溶液中，攪拌形成均相體系后，通入N2排空容器中的氧氣，300rpm的速率攪拌下開始緩慢滴加溶有偶氮二異丁腈的苯乙烯，滴加完畢后，保持N2氣氛和300rpm的速率，在70℃下聚合反應10h，將反應液離心分離，棄去上層清液，用無水乙醇洗滌下層微球，再離心，再洗滌，如此重復3-5次，即得聚苯乙烯微球；
步驟二，微球預活化液的制備：
配制0.05mmol/L乙磺酸水溶液，用NaOH調節pH至6.0作為活化緩沖液；
在攪拌的環境下，緩慢分別向活化緩沖液中加入碳化二亞胺和N-經基丁二醜亞胺，配成碳化二亞胺6.0mg/ml、N-經基丁二醜亞胺8.0mg/ml溶液；水浴加熱40℃，170rpm攪拌15min，得微球預活化液；
步驟三，在40℃溫度，200rpm的速率攪拌下，將聚苯乙烯微球緩慢加入3倍量微球預活化液中，保持40℃溫度，200rpm的速率攪拌4h，即得。
優選的，所述步驟二中的偶氮二異丁腈需要醇洗，將偶氮二異丁腈加入到10倍量的無水乙醇中，60℃加熱攪拌使偶氮二異丁腈完全溶解，迅速抽濾，濾液干燥至無水乙醇全部揮發，置于棕色瓶中備用。本發明的優點：
本發明制備的預活化聚苯乙烯微球，微球的粒徑較小，適合與抗體或者抗原等蛋白質結合，微球表面是經活化的，具有吸附或化學膠連能力，穩定性好，在使用之前無需先經活化處理，就能與抗體或者抗原等蛋白質很好的吸附結合在一起；適合批量生產。
具體實施方式
以下結合具體實施例對本發明作進一步說明：
聚苯乙烯微球的制備：
苯乙烯需要進行預處理，去除阻聚劑后再使用；對苯乙烯先以質量濃度約10％的Na0H溶液進行堿洗，靜置分層，保留有機層，重復三次后，用大量去離子水洗至中性附近，再經減壓蒸餾后備用。
將聚乙烯吡咯烷酮PVP加入到30％乙醇水溶液中，攪拌形成均相體系后，通入N2排空容器中的氧氣，300rpm的速率攪拌下開始緩慢滴加溶有偶氮二異丁腈的苯乙烯，滴加完畢后，保持N2氣氛和300rpm的速率，在70℃下聚合反應10h，將反應液離心分離，棄去上層清液，用無水乙醇洗滌下層微球，再離心，再洗滌，如此重復3-5次，即得聚苯乙烯微球；
在制備使用前，最好多偶氮二異丁腈進行醇洗，將偶氮二異丁腈加入到10倍量的無水乙醇中，60℃加熱攪拌使偶氮二異丁腈完全溶解，迅速抽濾，濾液干燥至無水乙醇全部揮發，置于棕色瓶中備用。
微球預活化液的制備：
配制0.05mmol/L乙磺酸水溶液，用NaOH調節pH至6.0作為活化緩沖液；
在攪拌的環境下，緩慢分別向活化緩沖液中加入碳化二亞胺和N-經基丁二醜亞胺，配成碳化二亞胺6.0mg/ml、N-經基丁二醜亞胺8.0mg/ml溶液；水浴加熱40℃，170rpm攪拌15min，得微球預活化液；
在40℃溫度，200rpm的速率攪拌下，將聚苯乙烯微球緩慢加入3倍量微球預活化液中，保持40℃溫度，200rpm的速率攪拌4h，即得。