本發(fā)明涉及一種龍膽苦苷衍生物的合成方法，屬于化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
龍膽苦苷是一種天然化合物，具有膽苦苷具有保護(hù)肝臟、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛及抗腫瘤等作用.等活性，廣泛存在于龍膽科多種植物中，由于龍膽苦苷其良好的生物活性和潛在的應(yīng)用前景，但其水溶性極強(qiáng)在體內(nèi)代謝快，關(guān)于龍膽苦苷的合成及其結(jié)構(gòu)修飾的文章報(bào)道非常少，所以對(duì)龍膽苦苷的結(jié)構(gòu)修飾進(jìn)行研究具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供了一種龍膽苦苷衍生物的合成方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過如下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：
一種龍膽苦苷衍生物的合成方法，將龍膽苦苷加入反應(yīng)容器中，加入丙酮為溶劑，后加入過量的2,2-甲氧基丙烷，在室溫下攪拌10min，加入催化劑，在室溫下攪拌2h，反應(yīng)完成后過濾，用丙酮洗滌，得到中間產(chǎn)物A，將中間產(chǎn)物A溶解后在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下與化合物B進(jìn)行反應(yīng)，得到中間產(chǎn)物C，中間產(chǎn)物C加入醋酸和水混合液，在室溫下攪拌2h，反應(yīng)完成后，減壓蒸干溶劑，得到龍膽苦苷衍生物。
所述的一種龍膽苦苷衍生物的合成方法，所述催化劑為三氯化鐵、對(duì)甲苯磺酸吡啶鹽或?qū)妆交撬帷?/p>
所述的一種龍膽苦苷衍生物的合成方法，所述化合物B為丁香酚甲醚、苯乙烯、丁香酚或?qū)籽趸奖?/p>
所述的一種龍膽苦苷衍生物的合成方法，所述中間產(chǎn)物A與化合物B的反應(yīng)是在Grubbs催化劑的催化下進(jìn)行的，經(jīng)過柱層析純化，得到中間產(chǎn)物C。
所述的一種龍膽苦苷衍生物的合成方法，所述醋酸和水的體積比是4:1。
本發(fā)明的有益效果：
本發(fā)明的合成方法操作簡(jiǎn)單，收率高，為龍膽苦苷的結(jié)構(gòu)修飾提供新的思路。
具體實(shí)施方式
為使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體實(shí)施方式，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
實(shí)施例1
稱取357.2mg龍膽苦苷(1mmol)加入事先烘干的100ml圓底燒瓶中，加入10ml丙酮為溶劑，后加入過量的2,2-甲氧基丙烷，在室溫下攪拌10min，加入催化量的三氯化鐵(5％mmol)，在室溫下攪拌2h，容易變渾濁，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，過濾，用丙酮洗滌，得到中間產(chǎn)物A 367.2mg，產(chǎn)率為93％。
中間產(chǎn)物A的表征：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.37(1H,s),5.71(1H,t,J＝7.8Hz),5.63(1H,s),5.44(1H,d,J＝2.7Hz),5.19-5.24(3H,m),5.15(1H,s),4.99(2H,dd,J＝2.7Hz),4.62(1H,d,J＝8.1Hz),3.77-3.82(1H,q),3.65(1H,t,J＝10.2Hz),3.41(1H,d,J＝4.2Hz),3.17-3.37(2H,m),2.99-3.07(1H,q),1.41(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.78,148.57,133.78,124.67,118.01,116.35,103.34,99.61,98.77,96.91,73.59,73.11,72.91,69.16,66.89,61.28,44.35,28.94,18.98.
稱取200.2mg中間產(chǎn)物A(0.5mmol)加入事先烘干的100ml圓底燒瓶中，加入20ml無(wú)水二氯甲烷，在室溫下攪拌使中間產(chǎn)物A溶解，用氮?dú)庵脫Q體系中的空氣，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下用注射泵加入丁香酚甲醚(1mmol)，再加入22.3mg GrubbsⅠ催化劑(5mol％)(溶于3ml無(wú)水二氯甲烷中)，后在60℃下回流攪拌5h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)并冷卻至室溫，減壓抽去溶劑，柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷/甲醇＝50:1。得到深棕色粉狀中間產(chǎn)物C1226.3mg，產(chǎn)率為83％。
中間產(chǎn)物C1的表征：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.48(1H,s),6.80(1H,d,J＝8.1Hz),6.69(2H,d,J＝12.1Hz),5.73-5.82(1H,m),5.50(1H,s),5.40(1H,d,J＝3.0Hz),5.29-5.37(2H,m),5.08(1H,d,J＝17.7Hz),4.95(1H,d,J＝17.1Hz),4.72(1H,d,J＝7.8Hz),3.90(6H,s),3.73(3H,d,J＝6.6Hz),3.64(1H,t,J＝10.2Hz),3.34(1H,s),3.23-3.29(2H,m),3.00-3.07(3H,q),1.41(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:163.78,149.23,148.91,147.54,133.76,132.16,126.26,125.91,120.38,120.19,115.58,111.95,111.34,103.83,99.85,99.37,97.60,74.03,73.45,72.87,69.44,67.55,61.89,55.94,55.89,44.30,38.38,28.97,19.04.
稱取60.3mg中間產(chǎn)物C1(0.1mmol)加入50ml圓底燒瓶中，加入10ml醋酸和水混合液(4:1)，在室溫下攪拌2h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，減壓蒸干溶劑，得到目標(biāo)化合物為深棕色，產(chǎn)率為100％。
目標(biāo)化合物的表征：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.42(1H,s),6.84(1H,d,J＝8.1Hz),6.72(1H,d,J＝1.5Hz),6.67(1H,d,J＝8.1Hz),5.69-5.76(1H,q),5.63(1H,s),5.56(1H,t,J＝3.0Hz),5.37-5.46(1H,m),4.99(1H,s),4.49(2H,d,J＝7.8Hz),3.70(6H,s),3.37-3.42(6H,m),3.29(3H,t,J＝7.2Hz),3.13-3.18(2H,q),2.29-3.04(2H,m).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.85,148.79,148.60,147.09,132.42,132.33,126.68,125.73,120.11,115.78,112.13,111.89,103.36,98.75,96.80,77.31,76.62,72.82,69.98,69.15,61.11,55.48,55.29,43.36,37.46.
反應(yīng)式如下：
實(shí)施例2
稱取357.2mg龍膽苦苷(1mmol)加入事先烘干的100ml圓底燒瓶中，加入10ml丙酮為溶劑，后加入過量的2,2-甲氧基丙烷，在室溫下攪拌10min，加入催化量的對(duì)甲苯磺酸吡啶鹽5％mmol)，在室溫下攪拌2h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，過濾，用丙酮洗滌，得到中間產(chǎn)物A 367.2mg，產(chǎn)率為93％。
稱取201.3mg中間產(chǎn)物A(0.5mmol)加入事先烘干的100ml圓底燒瓶中，加入20ml無(wú)水二氯甲烷，在室溫下攪拌使中間產(chǎn)物A溶解，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下用注射泵加入苯乙烯(1mmol)，再加入21.8mg GrubbsⅡ催化劑(5mol％)(溶于3ml無(wú)水二氯甲烷中)，在60℃下回流攪拌5h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)并冷卻至室溫，減壓抽去溶劑，柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷/甲醇＝50:1。得到深棕色中間產(chǎn)物C2207.3mg，產(chǎn)率為86％。
中間產(chǎn)物C2的表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.41(3H,d,J＝9.3Hz),7.31(2H,t,J＝7.5Hz),7.25(1H,d,J＝6.9Hz),6.55(1H,d,J＝15.9Hz),6.14(1H,dd,J＝7.2Hz),5.63-5.70(2H,m),5.53(1H,d,J＝2.7Hz),5.16-5.27(1H,m),5.05(1H,s),4.64(1H,t,J＝8.1Hz),3.78-3.83(1H,q),3.66(1H,t,J＝10.2Hz),3.40(1H,s),3.24-3.34(2H,m),3.05(1H,d,J＝5.4Hz),1.40(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.77,148.72,136.22,132.12,128.59,127.71,126.26,125.43,125.07,124.70,116.48,103.43,99.77,98.75,97.25,73.62,73.14,72.95,69.23,66.91,61.31,43.93,29.03,19.13.
稱取47.3mg中間產(chǎn)物C2(0.1mmol)加入50ml圓底燒瓶中，加入10ml醋酸和水混合液(1:1)，在室溫下攪拌2h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，減壓蒸干溶劑，得到目標(biāo)化合物為深棕色，產(chǎn)率為100％。
目標(biāo)化合物表征如下：
1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.43(3H,t,J＝7.2Hz),7.32(2H,t,J＝7.2Hz),7.25(1H,d,J＝8.1Hz),6.56(1H,d,J＝15.9Hz),6.16(1H,dd,J＝7.2Hz),5.58-5.74(2H,m),5.20(1H,t,J＝4.8Hz),4.96(1H,s),4.47-4.60(3H,m),3.69(2H,d,J＝11.4Hz),3.14(4H,d,J＝8.7Hz),2.92-3.03(3H,m).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.81,148.93,136.28,132.04,128.60,127.68,126.23,125.60,117.93,116.24,103.37,98.86,96.73,77.35,76.62,72.81,69.97,96.23,61.16,43.78.
反應(yīng)式如下：
實(shí)施例3
稱取357.2mg龍膽苦苷(1mmol)加入事先烘干的100ml圓底燒瓶中，加入10ml丙酮為溶劑，后加入過量的2,2-甲氧基丙烷，在室溫下攪拌10min，加入催化量的對(duì)甲苯磺酸(TsOH)(5％mmol)，在室溫下攪拌2h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，過濾，用丙酮洗滌，得到中間產(chǎn)物A 367.2mg或356.3mg，產(chǎn)率為93％或90％。
稱取201.3mg中間產(chǎn)物A(0.5mmol)加入事先烘干的100ml圓底燒瓶中，加入20ml無(wú)水二氯甲烷，在室溫下攪拌使中間產(chǎn)物A溶解，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下用注射泵加入丁香酚(1mmol)，再加入21.6mgHoveyda-GrubbsⅡ催化劑(5mol％)(溶于3ml無(wú)水二氯甲烷中)，后在60℃下回流攪拌4h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)并冷卻至室溫，減壓抽去溶劑，柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷/甲醇＝50:1。得到深棕色粉末中間產(chǎn)物C3234.3mg，產(chǎn)率為88％。
中間產(chǎn)物C3的表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:8.73(1H,s),7.40(1H,s),6.66-6.68(2H,m),6.54(1H,d,J＝7.8Hz),5.69-5.73(2H,m),5.62(1H,s),5.27-5.54(1H,m),5.16-5.24(2H,q),4.91(1H,s),4.63(1H,d,J＝7.8Hz),3.77-3.82(1H,q),3.73(3H,d,J＝6.6Hz),3.64(1H,t,J＝10.2Hz),3.34(1H,s),3.23-3.29(2H,m),3.00-3.07(3H,q),1.41(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.80,148.61,147.38,144.68,132.79,130.49,126.28,125.59,120.43,115.92,115.33,112.46,103.40,99.72,98.74,97.40,73.63,73.13,72.97,69.15,66.88,55.44,54.83,43.41,37.48,28.97,18.99.
稱取47.3mg中間產(chǎn)物C3(0.1mmol)加入50ml圓底燒瓶中，加入10ml醋酸和水混合液(4:1)，在室溫下攪拌2h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，減壓蒸干溶劑，得到目標(biāo)化合物深棕色泡沫狀，產(chǎn)率為100％。
目標(biāo)化合物表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.42(1H,s),6.66(2H,d,J＝7.8Hz),6.54(1H,d,J＝7.8Hz),5.67-5.76(1H,m),5.62(1H,s),5.57(1H,dd,J＝3.0Hz),5.39(1H,dd,J＝7.8Hz),4.97(1H,s),4.59(2H,s),4.48(1H,d,J＝8.4Hz),3.70(3H,s),3.66(1H,s),3.29(2H,d,J＝6.9Hz),3.23(2H,d,J＝6.6Hz),3.11-3.17(3H,q),2.90-3.08(3H,m).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.87,148.79,147.39,144.64,132.63,130.53,126.48,125.76,120.43,115.75,115.33,112.40,103.35,98.74,96.83,77.30,76.60,72.81,69.98,69.16,61.10,55.42,43.34,37.50.
反應(yīng)式如下：
實(shí)施例4
稱取357.2mg龍膽苦苷(1mmol)加入事先烘干的100ml圓底燒瓶中，加入10ml丙酮為溶劑，后加入過量的2,2-甲氧基丙烷，在室溫下攪拌10min，加入催化量的三氯化鐵(5％mmol)，在室溫下攪拌2h，容易變渾濁，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，過濾，用丙酮洗滌，得到中間產(chǎn)物A 367.2mg，產(chǎn)率為93％。
稱取199.3mg中間產(chǎn)物A(0.5mmol)加入事先烘干的100ml圓底燒瓶中，加入20ml無(wú)水二氯甲烷，在室溫下攪拌使中間產(chǎn)物A溶解，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下用注射泵加入對(duì)甲氧基苯丙烯(1mmol)，再加入22.6mg GrubbsⅡ催化劑(5mol％)(溶于3ml無(wú)水二氯甲烷中)，后在60℃下回流攪拌6h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)并冷卻至室溫，減壓抽去溶劑，柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷/甲醇＝50:1。得到深棕色泡沫狀中間產(chǎn)物C4220.3mg，產(chǎn)率為85％。
中間產(chǎn)物C4的表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.40(1H,s),7.07(H,d,J＝6.6Hz),6.84(2H,d,J＝8.7Hz),5.67-5.77(2H,m),5.62(1H,d,J＝7.5Hz),5.45(2H,d,J＝2.7Hz),5.16-5.38(2H,m),4.97(1H,s),4.64(1H,t,J＝6.9Hz),3.77-3.82(1H,q),3.70(3H,s),3.63(1H,t,J＝10.2Hz),3.39(1H,s),3.18-3.34(5H,m),3.04(1H,t,J＝7.5Hz),1.41(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.78,157.56,148.73,132.90,131.98,129.31,126.30,125.61,115.88,113.71,103.38,99.72,98.73,97.41,73.64,73.10,69.15,66.84,61.31,54.92,43.46,37.09,28.96,18.95.
取中間產(chǎn)物C4(0.1mmol)加入50ml圓底燒瓶中，加入10ml醋酸和水混合液(4:1)，在室溫下攪拌2h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，減壓蒸干溶劑，得到目標(biāo)化合物深棕色泡沫狀，產(chǎn)率為100％。
目標(biāo)化合物表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.42(1H,s),7.08(2H,d,J＝8.4Hz),6.83(2H,d,J＝8.4Hz),5.67-5.77(1H,m),5.59(2H,d,J＝7.8Hz),5.53(1H,d,J＝3.0Hz),5.37(1H,dd,J＝7.2Hz,J＝7.5Hz),4.98(1H,s),4.50(1H,dd,J＝8.1Hz),3.70(3H,s),3.66(1H,s),3.38(2H,d,J＝5.7Hz),3.27(3H,d,J＝6.6Hz),3.14(1H,d,J＝9.0Hz),3.29-3.03(2H,m).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.78,157.51,148.88,132.73,131.57,129.29,126.43,125.79,115.64,113.69,103.28,98.70,96.80,77.27,76.55,72.78,69.96,69.11,61.08,54.89,43.37,37.06.
反應(yīng)式如下：
活性試驗(yàn)：
將丁香假單胞菌菌液均勻涂布于LB培養(yǎng)皿上，晾干，再將分別吸附有陽(yáng)性對(duì)照、溶劑和新化合物的濾紙片置于培養(yǎng)皿上，于25℃下培養(yǎng)，若化合物有抑制該菌生長(zhǎng)的活性，則濾紙片周圍將形成一無(wú)菌圈，若濾紙片所吸附的化合物無(wú)抑制該菌生長(zhǎng)的活性，則濾紙片周圍不會(huì)產(chǎn)生無(wú)菌圈。
將稱量好的新化合物用溶劑溶解，定容于10mL的容量瓶中待用。將丁香假單胞菌接種于LB液體培養(yǎng)基中，于25℃培養(yǎng)24h。取約0.3ml菌液均勻涂布于LB平皿上，晾干，用濾紙片吸附溶劑、硫酸鏈霉素溶液和新化合物溶液，分別再將濾紙片置于平皿的三個(gè)點(diǎn)上，于25℃培養(yǎng)24h至36h。觀察濾紙片周圍無(wú)菌圈的大小。新化合物、陽(yáng)性對(duì)照和溶劑對(duì)照都平行做三個(gè)平皿。新化合物對(duì)丁香假單胞菌生長(zhǎng)的抑制作用見下表：
由上表可以看出龍膽苦苷及實(shí)施例2和實(shí)施例4合成的衍生物對(duì)丁香假單胞菌生長(zhǎng)的均有抑制作用，并且衍生物對(duì)丁香假單胞菌生長(zhǎng)的抑制作用比龍膽苦苷更有效。
以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。