技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種采用蠶蛹蛋白制備寡肽的方法。

背景技術(shù)：

功能性肽（bioactive peptides）是指對生命活動有益或具有生理作用的肽類化合物，是氨基酸以不同組成和排列方式構(gòu)成的從二肽到復(fù)雜的線性、環(huán)形結(jié)構(gòu)的不同肽類的總稱，具有免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、降血壓、降血脂、抗疲勞、抗氧化等生理調(diào)節(jié)功能。大豆、花生、玉米、小麥、蠶蛹等動植物蛋白的多肽鏈內(nèi)部普遍存在著功能區(qū)，經(jīng)適當(dāng)?shù)牡鞍酌杆夂蠖伎舍尫懦龈鞣N生物活性肽。因此，酶解動植物蛋白以獲取特定生物活性肽的研究迅速成為動物營養(yǎng)學(xué)和生理學(xué)界的研究熱點。但目前國內(nèi)外對天然蛋白活性肽的研究主要集中于大豆活性肽與花生活性肽，而對蠶蛹寡肽的研究才剛剛起步，普遍存在產(chǎn)品水解低、收率低、生物活性低等問題。

蠶蛹是蠶繭抽絲后剩下的主要副產(chǎn)品，產(chǎn)量巨大，我國干蠶蛹年產(chǎn)量高達(dá)50多萬t。蠶蛹營養(yǎng)價值豐富，蛋白含量約為60%，含有人體必需的8種氨基酸，是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白資源。但由于蠶蛹蛋白的水溶性、起泡性、乳化性和持水性較差，異味物質(zhì)與色素往往脫除不徹底，限制了它在食品工業(yè)中的應(yīng)用，造成了優(yōu)質(zhì)蛋白資源的極大浪費。將蠶蛹蛋白酶解為寡肽，不僅可改善其蛋白特性，而且可以拓寬其應(yīng)用領(lǐng)域，提高其資源價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

解決的技術(shù)問題：本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種采用蠶蛹蛋白制備寡肽的方法，該方法可顯著提高蠶蛹蛋白的水解度和寡肽得率，所得產(chǎn)物主要是低分子寡肽。

技術(shù)方案：一種采用蠶蛹蛋白制備寡肽的方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶蛹，洗凈、烘干，破碎成粉末；

步驟2，將粉末加至70-85v/v%乙醇溶液中50-70℃浸提1-3h，過濾，得到濕粉；

步驟3，將濕粉通過纖維素酶進(jìn)行水解處理，滅酶，得到酶解液；

步驟4，將酶解液通過砂濾裝置進(jìn)行過濾后，濾液導(dǎo)入孔徑為200-500nm的陶瓷微濾膜，得到透過液；

步驟5，在透過液中加入復(fù)合酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)液離心后上清經(jīng)干燥即得到寡肽。

進(jìn)一步地，步驟1中粉末粒度在20-40目。

進(jìn)一步地，步驟2中粉末和乙醇溶液的質(zhì)量體積比為100g：300-500mL。

進(jìn)一步地，步驟3中纖維素酶的重量是濕粉重量的3-6%，水解條件為45-55℃、30-70min。

進(jìn)一步地，步驟5中復(fù)合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2組成的混合物。

進(jìn)一步地，步驟5中復(fù)合酶在透過液中的濃度為0.8-1.5wt.%，酶解溫度為45-65℃，透過液pH為6-10。

進(jìn)一步地，步驟2中乙醇溶液中還含有5-8wt.%硅藻土。

有益效果：本發(fā)明的制備方法可顯著提高蠶蛹蛋白的水解度和寡肽得率，所得產(chǎn)物主要是低分子寡肽，僅有少量游離氨基酸。

具體實施方式

實施例1

一種采用蠶蛹蛋白制備寡肽的方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶蛹，洗凈、烘干，破碎成粉末；

步驟2，將粉末加至70v/v%乙醇溶液中50℃浸提3h，過濾，得到濕粉；

步驟3，將濕粉通過纖維素酶進(jìn)行水解處理，滅酶，得到酶解液；

步驟4，將酶解液通過砂濾裝置進(jìn)行過濾后，濾液導(dǎo)入孔徑為200-500nm的陶瓷微濾膜，得到透過液；

步驟5，在透過液中加入復(fù)合酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)液離心后上清經(jīng)干燥即得到寡肽。

其中，步驟1中粉末粒度在20目；步驟2中粉末和乙醇溶液的質(zhì)量體積比為100g：300mL；步驟3中纖維素酶的重量是濕粉重量的3%，水解條件為45℃、70min；步驟5中復(fù)合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2組成的混合物，復(fù)合酶在透過液中的濃度為0.8wt.%，酶解溫度為45℃，透過液pH為6。

本實施例中蠶蛹蛋白的水解度達(dá)29.2%，寡肽得率高達(dá)為81.14%；所得寡肽的數(shù)均分子量為665.5 Da、重均分子量為726.9 Da、肽含量達(dá)74.6%，而游離氨基酸含量僅為7.33%。

實施例2

一種采用蠶蛹蛋白制備寡肽的方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶蛹，洗凈、烘干，破碎成粉末；

步驟2，將粉末加至75v/v%乙醇溶液中60℃浸提3h，過濾，得到濕粉；

步驟3，將濕粉通過纖維素酶進(jìn)行水解處理，滅酶，得到酶解液；

步驟4，將酶解液通過砂濾裝置進(jìn)行過濾后，濾液導(dǎo)入孔徑為200-500nm的陶瓷微濾膜，得到透過液；

步驟5，在透過液中加入復(fù)合酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)液離心后上清經(jīng)干燥即得到寡肽。

其中，步驟1中粉末粒度在40目；步驟2中粉末和乙醇溶液的質(zhì)量體積比為100g：400mL；步驟3中纖維素酶的重量是濕粉重量的5%，水解條件為50℃、40min；步驟5中復(fù)合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2組成的混合物，復(fù)合酶在透過液中的濃度為1.1wt.%，酶解溫度為50℃，透過液pH為8。

本實施例中蠶蛹蛋白的水解度達(dá)31.5%，寡肽得率高達(dá)為82.43%；所得寡肽的數(shù)均分子量為654.7Da、重均分子量為735.2 Da、肽含量達(dá)75.9%，而游離氨基酸含量僅為6.54%。

實施例3

一種采用蠶蛹蛋白制備寡肽的方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶蛹，洗凈、烘干，破碎成粉末；

步驟2，將粉末加至80v/v%乙醇溶液中70℃浸提2h，過濾，得到濕粉；

步驟3，將濕粉通過纖維素酶進(jìn)行水解處理，滅酶，得到酶解液；

步驟4，將酶解液通過砂濾裝置進(jìn)行過濾后，濾液導(dǎo)入孔徑為200-500nm的陶瓷微濾膜，得到透過液；

步驟5，在透過液中加入復(fù)合酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)液離心后上清經(jīng)干燥即得到寡肽。

其中，步驟1中粉末粒度在20目；步驟2中粉末和乙醇溶液的質(zhì)量體積比為100g：500mL；步驟3中纖維素酶的重量是濕粉重量的5%，水解條件為55℃、40min；步驟5中復(fù)合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2組成的混合物，復(fù)合酶在透過液中的濃度為1.3wt.%，酶解溫度為60℃，透過液pH為6。

本實施例中蠶蛹蛋白的水解度達(dá)27.8%，寡肽得率高達(dá)為75.2%；所得寡肽的數(shù)均分子量為647.1 Da、重均分子量為722.5 Da、肽含量達(dá)69.6%，而游離氨基酸含量僅為6.52%。

實施例4

一種采用蠶蛹蛋白制備寡肽的方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶蛹，洗凈、烘干，破碎成粉末；

步驟2，將粉末加至85v/v%乙醇溶液中70℃浸提1h，過濾，得到濕粉；

步驟3，將濕粉通過纖維素酶進(jìn)行水解處理，滅酶，得到酶解液；

步驟4，將酶解液通過砂濾裝置進(jìn)行過濾后，濾液導(dǎo)入孔徑為200-500nm的陶瓷微濾膜，得到透過液；

步驟5，在透過液中加入復(fù)合酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)液離心后上清經(jīng)干燥即得到寡肽。

其中，步驟1中粉末粒度在40目；步驟2中粉末和乙醇溶液的質(zhì)量體積比為100g：500mL；步驟3中纖維素酶的重量是濕粉重量的6%，水解條件為55℃、30min；步驟5中復(fù)合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2組成的混合物，復(fù)合酶在透過液中的濃度為1.5wt.%，酶解溫度為65℃，透過液pH為10。

本實施例中蠶蛹蛋白的水解度達(dá)30.1%，寡肽得率高達(dá)為80.25%；所得寡肽的數(shù)均分子量為657.8 Da、重均分子量為718.4 Da、肽含量達(dá)72.1%，而游離氨基酸含量僅為7.15%。

實施例5

本實施例與實施例2的區(qū)別在于：步驟2中乙醇溶液中還含有5-8wt.%硅藻土。

一種采用蠶蛹蛋白制備寡肽的方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶蛹，洗凈、烘干，破碎成粉末；

步驟2，將粉末加至75v/v%乙醇溶液中60℃浸提3h，乙醇溶液中含有5wt.%硅藻土，過濾，得到濕粉；

步驟3，將濕粉通過纖維素酶進(jìn)行水解處理，滅酶，得到酶解液；

步驟4，將酶解液通過砂濾裝置進(jìn)行過濾后，濾液導(dǎo)入孔徑為200-500nm的陶瓷微濾膜，得到透過液；

步驟5，在透過液中加入復(fù)合酶進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)液離心后上清經(jīng)干燥即得到寡肽。

其中，步驟1中粉末粒度在40目；步驟2中粉末和乙醇溶液的質(zhì)量體積比為100g：400mL；步驟3中纖維素酶的重量是濕粉重量的5%，水解條件為50℃、40min；步驟5中復(fù)合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2組成的混合物，復(fù)合酶在透過液中的濃度為1.1wt.%，酶解溫度為50℃，透過液pH為8。

本實施例中蠶蛹蛋白的水解度達(dá)34.2%，寡肽得率高達(dá)為85.62%；所得寡肽的數(shù)均分子量為667.8.7Da、重均分子量為742.9Da、肽含量達(dá)77.1%，而游離氨基酸含量僅為5.62%。