本發明屬于微生物發酵領域，尤其是一種高分子量透明質酸產量的方法。
背景技術：
目前國內大部分微生物發酵法生產透明質酸的企業采用的工藝發酵周期長，一般在36-40左右，產物分子量低，產品透光率差(一般在90％左右)，蛋白質含量高，其成品葡萄糖醛酸含量一般為35-38％，部分廠家透明質酸產品形態為纖維狀，此種透明質酸溶解困難，一般要2天左右，且收率低于75％，為了滿足國內不斷擴大的需求市場，透明質酸的生產工藝亟待改善。
目前大都采用發酵法來生產HA，早在1983年日本資生堂采用鏈球菌發酵生產透明質酸。隨后發酵法生產透明質酸的研究越來越廣泛，如日本專利No.58-566922、美國專利No.60-500997、韓國專利No.10-250573等。由于發酵液中含有菌體、蛋白質以及核酸等物質，從發酵液中提取HA的方法主要有以下幾種：A.大量稀釋膜濾法，由于發酵液中菌體等雜質較多，極易造成膜孔堵塞，且大量稀釋易形成操作體積過大；B.高速離心法，除去菌體時對設備的要求很高；C.氯仿法，菌體沉淀中夾帶較多的HA，HA的回收率低，且氯仿對環境污染；D.乙醇沉淀法，是一種較為常用的方法，但由于該法操作時所用設備及車間均必須防爆，這勢必增加了操作的危險性和生產成本。
現有方法中，對透明質酸蛋白的微量含量一般沒有辦法再將其去除，微量的蛋白含量容易造成過敏(因人而異)反應，尤其是用在化妝品領域中，微量蛋白的含量依然存在較大的害處。
技術實現要素：
本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種產品純度高、蛋白含量低的微生物發酵法生產透明質酸的方法。
本發明的目的是通過以下技術方案實現的：
一種提高透明質酸產量的方法，其步驟包括：⑴發酵液的一次處理、發酵液的一次處理⑵發酵液的純化、⑶透明質酸的干燥；具體過程如下：
⑴發酵液的一次處理
將發酵液經板框過濾后得濾液，加入2-4倍的乙醇溶液沉淀，收集沉淀物，加入與濾液等體積的Nacl溶液攪拌溶解，進行板框過濾至澄清，得到二次過濾液；
將二次過濾液經過外部包裹磁化線圈的一段金屬管道，對發酵液進行磁化處理，磁場強度為1-3萬高斯，經過磁化后，水分子變小，提高透明質酸的溶解度，再將濾液用紫外照射10-30秒，使溶液中的蛋白凝結，獲得微聚集效應，再經0.3-0.5微米的濾膜或濾板過濾，使微量蛋白得以去除；，且在板框過濾的介質中加入5wt％的納米磁珠；
⑵發酵液的進一步純化
將過濾后的濾液再加入乙酸調節pH至4.0-5.0，再用乙醇溶液噴淋，獲得沉淀，得到明質酸沉淀物；
⑶透明質酸的干燥
將上述步驟得到的全部沉淀物經2-3次無水乙醇脫水，50-60℃真空干燥后，含水控制在10％以下，即得透明質酸。
而且，所述板框過濾使用的硅藻土中加入活性炭，用于脫色，活性炭的加入量為總硅藻土的20wt％。
而且，所述乙醇溶液的濃度為：95-98％(v/v)。
而且，所述Nacl溶液的濃度為：0.1-2mol/L。
本發明的優點和積極效果是：
1、本發明提高的純化方法純化效果好，尤其是蛋白去除率高，透明質酸產品產率高，可達到8-10g/L，其回收率高達95％，使用性能更加優越，溶解性更好，其透光率達到99％。
2、本發明采用獨創的噴淋制粉技術，使產品結構形態更加細膩，3、本發明將發酵液經二次過濾液經過外部包裹磁化線圈的一段金屬管道，對發酵液進行磁化處理，磁場強度為1-3萬高斯，經過磁化后，水分子變小，提高透明質酸的溶解度，再將濾液用紫外照射10-30秒，使溶液中的蛋白凝結，獲得微聚集效應，再經0.3-0.5微米的濾膜或濾板過濾，使微量蛋白得以去除；能夠將透明質酸開發成無過敏級化妝品級和醫用級產品。
3、本發明在過濾的板框中增加磁珠后，能夠將磁化后的蛋白一進步除去，一進步降低雜蛋白含量，保證透明質酸的純度，降低過敏反應幾率。
具體實施方式
下面結合實施例，對本發明進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發明的保護范圍。
本發明使用的發酵菌種屬于外來菌種，菌種分類是獸疫鏈球菌。本發明提供的方法中，發酵液的獲得采用如下步驟：
⑴搖瓶種子液：將斜面菌種接種于裝有滅菌培養液400ml的1L錐形瓶中，37℃培養12-16小時，光鏡觀察菌體生長良好，無雜菌污染，即可接種于種子罐中；
⑵種子罐種子液：按搖瓶種子液的配方配制培養液60L，加入種子罐中，通蒸汽加熱，121℃滅菌30分鐘，冷卻至37℃，用火焰法接種，將搖瓶種子液接種于種子罐中，通氣量60L/min，攪拌轉速120-140/min，37℃培養12-16小時，光鏡觀察菌體生長良好，無雜菌污染，即可接種于發酵罐中；
⑶發酵培養：按種子罐的配方，把糖的用量提高到6％，配制培養液600L，加入1噸的發酵罐中，通蒸汽加熱，121℃滅菌30分鐘，冷卻至37℃，將種子液通過移種管道接種于發酵罐中，維持通氣量400-600L/min，攪拌轉速140-160/min，37℃培養24-26小時，發酵過程中，糖的濃度下降至0.5％以下，PH下降很慢或不再下降時，即為發酵終點，得到含有透明質酸發酵液；(以上3個步驟在馬朝梅(廣西柳州化學工業集團有限公司)，發酵法生產透明質酸工藝研究，廣西工學院學報，2007，18(3):8-12中有報道，屬于現有技術，本發明申請就不再更加詳細描述)。
本發明涉及的提高透明質酸產量的方法，其步驟包括：⑴發酵液的一次處理、發酵液的一次處理⑵發酵液的純化、⑶透明質酸的干燥；具體過程如下：
⑴發酵液的一次處理
將發酵液經板框過濾后得濾液，加入2-4倍的乙醇溶液沉淀，收集沉淀物，加入與濾液等體積的Nacl溶液攪拌溶解，進行板框過濾至澄清，得到二次過濾液；
將二次過濾液經過外部包裹磁化線圈的一段金屬管道，對發酵液進行磁化處理，磁場強度為1-3萬高斯，經過磁化后，水分子變小，提高透明質酸的溶解度，再將濾液用紫外照射10-30秒，使溶液中的蛋白凝結，獲得微聚集效應，再經0.3-0.5微米的濾膜或濾板過濾，使微量蛋白得以去除；
在板框過濾的介質中加入5wt％的納米磁珠，加入納米磁珠后能夠增加雜蛋白的去除率，整個溶液經過磁化后，微聚的雜蛋白能夠與磁珠產生吸附作用，進而將其除去。
板框過濾的硅藻土的型號為821號和616號，將兩種硅藻土按比例混合，得到后裝入板框進行過濾，821號和616號硅藻土的重量比例為1：1-5。加入的納米磁珠均勻分布在板框內即可。
⑵發酵液的進一步純化
將過濾后的濾液再加入乙酸調節pH至4.0-5.0，再用乙醇溶液噴淋，獲得沉淀，得到明質酸沉淀物；
⑶透明質酸的干燥
將上述步驟得到的全部沉淀物經2-3次無水乙醇脫水，50-60℃真空干燥后，含水控制在10％以下，即得透明質酸。
⑷發酵液的萃取提純：將發酵液經板框過濾后得濾液，加入3倍的95％乙醇沉淀，收集沉淀物，加入與濾液等體積的0.1mol/L的Nacl溶液攪拌溶解，進行二次板框過濾至澄清，得到二次澄清液；將二次澄清液經0.45微米的濾膜或濾板過濾后，加入乙酸調節pH至4.0-5.0，得到酸處理后的三次澄清液，再用95％乙醇噴淋三次澄清液，再進行沉淀，得到沉淀物；
板框過濾的硅藻土的型號為821號和616號，將兩種硅藻土按比例混合，得到后裝入板框進行過濾，821號和616號硅藻土的重量比例為1：1-5。
⑸干燥制粉：將得到的全部沉淀物經無水乙醇脫水后，用乳化泵進行乳化制粉，得粉狀沉淀，進一步用無水乙醇脫水后，50-60℃真空干燥后，含水控制在10％以下，即得透明質酸。
經本發明得到的透明質酸產品產率高，可達到8-10g/L，其回收率為95％。
產品性能指標：
性狀：白色粉末或細小顆粒；
氣味：無臭無味；
pH(1g/L)：6.9-7.0；
澄清度(1g/L)：透光率>99％；
干燥失重：<8％；
分子量：>1.8×106；
蛋白質：<0.03％；
葡萄糖醛酸：≥44.5％；
敏感性降低80％。