本發明涉及一種從枝菌根真菌摩西球囊霉的培養基及培養方法,具體為涉及一種摩西球囊霉(Glomus mosseae)的培養基及培養方法。
背景技術:
自然界中普遍存在著由真菌與植物根形成的共生體——菌根,叢枝菌根是菌根中最普遍、數量最多的一種。叢枝菌根真菌(Arbuscular Mycorrhizal Fungi,AM)是土壤中存在的一類有益微生物,約占土壤微生物總量的5%~36%,是生物量最大的一類土壤真菌,它能夠與80%以上的陸生植物形成良好的互利共生體,能夠在植物根系皮層細胞內形成叢枝,部分形成泡囊結構,因此該類真菌被稱為叢枝菌根真菌,屬于球囊霉真菌。
摩西球囊霉菌屬于從枝菌根真菌中的一種,近年來,如何獲得高產量、高密度、高質量的菌根菌劑,是國際上倍受關注的微生物熱點課題。現有條件下,只能采用將叢枝菌根真菌與植物共生的方法進行開放式培養,主要方法有:盆缽培養法、營養薄層法、靜水培養法、氣霧培養法、雙重無菌培養法、玻璃珠培養法、大田培養法等技術,但這些技術存在的問題是:產孢量少、保存時間短、操作技術難度大、易受到污染、培養成本和技術要求高等。目前我國關于叢枝菌根真菌的生產與應用仍然處于起步階段,關于叢枝菌根真菌摩西球囊霉的培養方法報道還較少。
技術實現要素:
本發明的目的是提供一種摩西球囊霉的培養基及離體純培養方法,所采用的技術方案如下。
(1)單孢離體培養基配制。
固體培養基的組分為:淀粉2%、硝酸鉀0.1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.05%、硫酸亞鐵0.01%、瓊脂粉2%,pH值7.0~7.2。
作為優選,可采用液體培養基替代固體培養基,液體培養基的組分為:淀粉2%、硝酸鉀0.1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.5%、硫酸亞鐵0.01%、蛋白胨0.5%、酵母粉0.5%,pH值7.0~7.2。
(2)單孢獲取。
稱取20g含有摩西球囊霉(編號為HEBO7B)的沸石沙,在體式顯微鏡下挑取該菌株的單個孢子,在生物顯微鏡下,觀察孢子形態。
孢子果:黃棕至淺褐色,多為不規則圓形,內含1至多個孢子,200-600μm,有菌絲被。
孢子:淺黃至黃褐色,幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不規則。孢子壁:3層。1無色透明,易脫落,厚約0.5-1μm,Melzer′s試劑中呈淺粉紅色;L2無色透明,0.8-1.6μm。L3淺黃至黃棕色,層積壁,厚1.5-3μm,在連點處增厚至6μm。
連孢菌絲:寬8μm.連點漏斗狀,漏斗底部有厚凹隔。
(3)培養基接種培養。
將上述獲得的摩西球囊霉單胞子,接種到培養基中,恒溫30℃靜置培養7~10天,出現黃綠色-黃褐色菌絲。
(4)形態鑒定。
吸取少量培養基,在顯微鏡下觀察,形態學鑒定符合上述摩西球囊霉的特征,鑒定為摩西球囊霉菌株。
本發明實現了摩西球囊霉的實驗室分離純培養,打破了叢枝菌根真菌依賴作物共生的限制,具有廣闊的應用前景。
具體實施方式
本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式,還包括各具體實施方式間的任意組合。
實施例1。
本實施方式摩西球囊霉的培養基及離體純培養方法按以下步驟實現。
(1)株單孢離體培養基配制。
固體培養基組分為:淀粉2%、硝酸鉀0.1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.05%、硫酸亞鐵0.01%、瓊脂粉2%,pH值7.0~7.2。
(2)單孢獲取。
稱取20g含有摩西球囊霉(編號為HEBO7B)的沸石沙,在體式顯微鏡下挑取該菌株的單個孢子,在生物顯微鏡下,觀察孢子形態。
孢子果:黃棕至淺褐色,多為不規則圓形,內含1至多個孢子,200-600μm,有菌絲被。
孢子:淺黃至黃褐色,幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不規則。孢子壁:3層。1無色透明,易脫落,厚約0.5-1μm,Melzer′s試劑中呈淺粉紅色;L2無色透明,0.8-1.6μm。L3淺黃至黃棕色,層積壁,厚1.5-3μm,在連點處增厚至6μm。
連孢菌絲:寬8μm.連點漏斗狀,漏斗底部有厚凹隔。
(3)培養基接種培養。
將上述獲得的摩西球囊霉單胞子,接種到固體培養基中,恒溫30℃靜置培養7天,出現黃綠色-黃褐色菌絲。
(4)形態鑒定。
挑取少量培養基中的菌絲,在顯微鏡下觀察,形態學鑒定符合上述摩西球囊霉的特征,鑒定為摩西球囊霉菌株。
實施例2 。
本實施方式摩西球囊霉的培養基及離體純培養方法按以下步驟實現。
(1)株單孢離體培養基配制。
液體培養基為:淀粉2%、硝酸鉀0.1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.5%、硫酸亞鐵0.01%、蛋白胨0.5%、酵母粉0.5%,pH值7.0~7.2。
(2)單孢獲取。
稱取20g含有摩西球囊霉(編號為HEBO7B)的沸石沙,在體式顯微鏡下挑取該菌株的單個孢子,在生物顯微鏡下,觀察孢子形態。
孢子果:黃棕至淺褐色,多為不規則圓形,內含1至多個孢子,200-600μm,有菌絲被。孢子:淺黃至黃褐色,幼嫩孢子乳白色。球形、近球形、不規則。孢子壁:3層。1無色透明,易脫落,厚約0.5-1μm,Melzer′s試劑中呈淺粉紅色;L2無色透明,0.8-1.6μm。L3淺黃至黃棕色,層積壁,厚1.5-3μm,在連點處增厚至6μm。連孢菌絲:寬8μm.連點漏斗狀,漏斗底部有厚凹隔。
(3) 培養基接種培養。
將上述獲得的摩西球囊霉單胞子,接種到液體培養基中,恒溫30℃震蕩培養10天。
(4)形態鑒定。
吸取少量液體培養基,在顯微鏡下觀察,形態學鑒定符合上述摩西球囊霉的特征,鑒定為摩西球囊霉菌株。