1.一種海帶抗氧化肽的分離方法,其特征在于:通過加入緩沖液溶解離心制備海帶抗氧化肽粗提液,再經過柱平衡、上樣、洗滌、洗脫、柱再生、沉淀、離心、脫水和真空干燥等步驟初步分離純化,得到一種海帶抗氧化肽產品。
2.根據權利要求1所述的制備海帶抗氧化肽的方法,其特征在于,該方法包括如下步驟:
(1)溶解離心:取海帶干粉,先用PBS緩沖液將海帶干粉溶解,攪拌2-8h,10000r/min離心5-60min,取上清液;將沉淀溶于2-10倍(w/v)蒸餾水后繼續攪拌2-8h后再次10000r/min離心5-60min,取上清液;再將沉淀溶解于2-10倍(w/v)蒸餾水進行第三次攪拌,離心后取上清液,作為上柱液;
(2)柱平衡:用平衡緩沖液平衡柱體,用恒流泵控制流速為100-700ml/min,平衡時間1-5小時;
(3)上樣:將上柱液加入層析柱,恒流泵控制流速為100-700ml/min;上樣結束后,用平衡緩沖液洗滌層析柱,恒流泵控制流速為200-800ml/min;
洗滌:用洗滌緩沖液洗滌層析柱,恒流泵控制流速為200-800ml/min;
(5)洗脫:洗滌結束后,用洗脫液洗脫層析柱,恒流泵控制流速為300-900ml/min;洗脫的同時,使用核酸蛋白檢測儀粗略測量流出液100-640nmOD值,當OD值接近0.05-0.95時改用紫外分光光度計精密測量OD值,當流出液OD值在0.2-0.7以上,開始收集流出液,直到OD值在0.2-0.7以下,停止收集流出液;
(6)柱再生:洗脫結束后,用氫氧化鈉溶液的再生液洗滌層析柱,之后再用純化水洗滌層析柱,流速均用恒流泵控制在100-1000ml/min;
(7)沉淀:計量收集流出液體積,轉入不銹鋼桶內,邊攪邊加入流出液體積2-8倍量(v/v)的冷乙醇,乙醇溫度不超過-5℃,靜置沉淀12-36小時,至乙醇澄清沉淀物全部沉于不銹鋼桶底部;
(8)離心、脫水:用軟管自然虹吸上層乙醇,下層沉淀物裝入離心杯用低速大容量冷凍離心機離心,使固液分離,設定離心轉速不低于2500-5000rpm;離心結束后,棄去上層母液,收集下層固體,按固體物重量1:2-1:9(w/v)比例于離心杯內加入無水乙醇脫水1-4次,再按上述步驟離心,收集固體物干燥;
(9)真空干燥:將上述盛有離心固體物的離心杯放置于真空干燥箱,干燥10-35小時以上,干燥后即得產品。
3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于:步驟(1)中,按干粉重量1:5-1:90(w/v)的比例量取PBS緩沖液,PBS緩沖液pH7.2~7.4,其中NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO410mmol/L, KH2PO4 2mmol/L。
4.根據權利要求2所述的方法,其特征在于:步驟(2)中,平衡緩沖液為0.05mol/L乙酸鈉溶液(pH 3.0-7.5)。
5.根據權利要求2所述的方法,其特征在于:步驟(4)中,洗滌緩沖液為取0.1mol/L乙酸鈉溶液(pH 2.0-9.0)。
6.根據權利要求2所述的方法,其特征在于:步驟(5)中,洗脫液為1.0mol/L氯化鈉溶液(pH2.5-10.0)。
7.根據權利要求2所述的方法,其特征在于:步驟(6)中,再生液為0.1-1.0mol /L氫氧化鈉溶液。