本發(fā)明涉及生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種嗜硫小紅卵菌菌株、菌劑、胞外蛋白及菌劑和胞外蛋白的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

辣椒炭疽病(Pepper Anthracnose)是辣椒、甜椒上的一種重要病害。在我國(guó)，辣椒炭疽病主要由紅色炭疽病菌(C.gloeosporioides＝Gloeosporiumpiperatum)、黑色炭疽病菌(C.coccodes＝C.nigrum)、黑點(diǎn)炭疽病菌(C.capsici)和尖孢炭疽菌(C.acutatum(Simmonds))4種病原菌引起。如果氣候高溫高濕，辣椒炭疽病流行擴(kuò)展快、危害時(shí)間長(zhǎng)，可引起辣椒幼苗死亡、爛果，導(dǎo)致辣椒減產(chǎn)30％-50％，嚴(yán)重時(shí)甚至高達(dá)80％，對(duì)辣椒品質(zhì)、產(chǎn)量及成熟果的加工生產(chǎn)均具有很大影響，是辣椒生產(chǎn)的主要障礙之一。

控制和減少炭疽病對(duì)辣椒生產(chǎn)的危害，生產(chǎn)上一般采用化學(xué)防治等措施來(lái)控制。但是隨著化學(xué)殺菌劑的長(zhǎng)期大量使用，不但導(dǎo)致病原物產(chǎn)生耐藥性和抗藥性，而且殺死有益微生物；同時(shí)化學(xué)農(nóng)藥隨大氣循環(huán)和水循環(huán)擴(kuò)散到環(huán)境中，從而造成環(huán)境的污染；再者辣椒作為食用經(jīng)濟(jì)作物，對(duì)其外觀和內(nèi)在質(zhì)量均有特殊的要求，農(nóng)藥殘留及對(duì)食品衛(wèi)生的影響，限制了化學(xué)殺菌劑的大規(guī)模利用。隨著當(dāng)今世界對(duì)農(nóng)作物數(shù)量和質(zhì)量需求的不斷提高、各國(guó)對(duì)保護(hù)人類生存環(huán)境的日益重視、持續(xù)農(nóng)業(yè)和持續(xù)植物保護(hù)觀念的不斷深入、對(duì)環(huán)境問題與無(wú)公害食品的生產(chǎn)需求日益增加，利用生物防治辣椒炭疽病已勢(shì)在必行。

隨著生防菌研究的深入以及生防產(chǎn)品的日益更新，人們開始致力于抗菌活性物質(zhì)的挖掘。一般將生防菌產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)的途徑分為核糖體合成和非核糖體合成兩種。核糖體合成途徑產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)有細(xì)菌素、酶類和其它活性蛋白類；非核糖體合成途徑產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)有脂肽類、抗菌肽及其它類別物質(zhì)諸如大環(huán)內(nèi)酯類、多烯類、酚類物質(zhì)等產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)，包括非核糖體合成的脂肽類抗生素、核糖體合成的細(xì)菌素等。而在眾多活性物質(zhì)中，抗菌蛋白質(zhì)作為生物體抵抗病原菌的入侵，維護(hù)生命活動(dòng)的延續(xù)和運(yùn)行的重要天然物質(zhì)，是重要的抗病資源，在防治辣椒炭疽病方面也將會(huì)獲得廣泛應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種嗜硫小紅卵菌菌株、菌劑、胞外蛋白及菌劑和胞外蛋白的制備方法及應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種嗜硫小紅卵菌菌株，所述嗜硫小紅卵菌菌株為嗜硫小紅卵菌IV-1(Rhodovulum sulfidophilum IV-1)，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC M 2012369，保藏單位地址位于中國(guó)武漢大學(xué)，保藏日期為2012年9月26日。

一種嗜硫小紅卵菌菌劑，所述嗜硫小紅卵菌菌劑采用上述的嗜硫小紅卵菌菌株經(jīng)活化、種子培養(yǎng)、生產(chǎn)培養(yǎng)、離心后制備得到。

一種上述的嗜硫小紅卵菌菌劑的制備方法，包括以下步驟：

第一步：活化：將嗜硫小紅卵菌菌株的保存種按雙層平板培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至紅色單菌落出現(xiàn)；

第二步：種子培養(yǎng)：將第一步中培養(yǎng)的紅色單菌落接入至血清瓶中，在溫度為30℃～32℃、光照條件為2500Lx～4000Lx、pH為7.0條件下，用光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期得到菌液；

第三步：生產(chǎn)培養(yǎng)：將第二步中種子培養(yǎng)后得到的菌液接種到生產(chǎn)瓶中，用光合細(xì)菌生產(chǎn)培養(yǎng)基進(jìn)行生產(chǎn)培養(yǎng)，菌液的接種量為所述光合細(xì)菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的5％，在溫度為30℃～32℃、光照條件為2500Lx～4000Lx、pH＝7.0條件下，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；

第四步：離心：將第三步中生產(chǎn)培養(yǎng)得到的菌液進(jìn)行8000rpm、4℃、15min離心后，收集上清，然后用0.22μm濾膜進(jìn)行抽濾得到濾液，即制得嗜硫小紅卵菌菌劑。

一種胞外蛋白，所述胞外蛋白從上述的嗜硫小紅卵菌菌劑或上述制備方法制備得到的嗜硫小紅卵菌菌劑中提取得到。

一種上述的胞外蛋白的制備方法，具體包括以下步驟：

第一步：硫酸銨沉淀-鹽析：向嗜硫小紅卵菌菌劑中加入硫酸銨至85％飽和度，使所述嗜硫小紅卵菌菌劑中的蛋白析出，得到混合液；

第二步：離心：將所述第一步中得到的混合液以11000rpm轉(zhuǎn)速離心30min得到沉淀，將所述沉淀重懸于PBS緩沖液中得到蛋白重懸液；

第三步：ATKA蛋白純化系統(tǒng)HiTrap Desalting 5mL脫鹽柱脫鹽：將所述第二步中制備得到的蛋白重懸液低溫冷凍濃縮后，采用HiTrap Desalting 5mL脫鹽柱進(jìn)行脫鹽得到蛋白粗品；

第四步：ATKA蛋白純化系統(tǒng)Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱層析分離：將第三步中制得的蛋白粗品采用Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱進(jìn)行層析分離得到胞外蛋白。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述第二步中PBS緩沖液的濃度為0.01M，pH為7.0。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述第三步中蛋白重懸液以15％的上樣比例進(jìn)行HiTrap Desalting 5mL柱脫鹽得到蛋白粗品，將所述蛋白粗品稀釋至10mg/mL。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述第四步中蛋白粗品按2％的上樣比例進(jìn)行Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱層析分離。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述第四步中層析分離后獲得的各個(gè)蛋白組分，然后進(jìn)行活性測(cè)定，合并活性組分，低溫冷凍濃縮即得到胞外蛋白。

一種根據(jù)上述的胞外蛋白或權(quán)利要求5-9任一的提取方法提取得到的胞外蛋白的應(yīng)用，所述胞外蛋白應(yīng)用于辣椒炭疽病防治。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明從嗜硫小紅卵菌IV-1菌劑可以分泌出對(duì)辣椒炭疽病菌具有拮抗作用的胞外蛋白，從而起到對(duì)辣椒炭疽病的抑制作用。

2、本發(fā)明首次從從嗜硫小紅卵菌IV-1菌劑的胞外產(chǎn)物中提取胞外蛋白，其提取工藝簡(jiǎn)單、流程短、成本低，提取過程對(duì)環(huán)境無(wú)污染。

3、本發(fā)明從嗜硫小紅卵菌IV-1菌劑中提取獲得的蛋白組分分子量在約50kD，熱穩(wěn)定性高、耐儲(chǔ)藏、對(duì)辣椒炭疽病的抑制作用明顯。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)例1中嗜硫小紅卵菌IV-1菌株的菌落圖片。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例4中辣椒炭疽菌絲平板測(cè)定試驗(yàn)圖。

圖3為本發(fā)明實(shí)例4中辣椒炭疽病產(chǎn)孢量測(cè)定試驗(yàn)圖。

圖4為本發(fā)明實(shí)例4中辣椒炭疽病原體果實(shí)生測(cè)試驗(yàn)圖。

圖5為本發(fā)明實(shí)例4中辣椒炭疽病溫室生測(cè)試驗(yàn)圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本專利的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明。

請(qǐng)參閱圖1-4，一種嗜硫小紅卵菌菌株，所述嗜硫小紅卵菌菌株為嗜硫小紅卵菌IV-1(Rhodovulumsulfidophilum IV-1)，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC M 2012369，保藏單位地址位于中國(guó)武漢大學(xué)，保藏日期為2012年9月26日。

一種嗜硫小紅卵菌菌劑，所述嗜硫小紅卵菌菌劑采用上述的嗜硫小紅卵菌菌株經(jīng)活化、種子培養(yǎng)、生產(chǎn)培養(yǎng)、離心后制備得到。

一種上述的嗜硫小紅卵菌菌劑的制備方法，包括以下步驟：

第一步：活化：將嗜硫小紅卵菌菌株的保存種按雙層平板培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至紅色單菌落出現(xiàn)；

第二步：種子培養(yǎng)：將第一步中培養(yǎng)的紅色單菌落接入至血清瓶中，在溫度為30℃～32℃、光照條件為2500Lx～4000Lx、pH為7.0條件下，用光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期得到菌液；

第三步：生產(chǎn)培養(yǎng)：將第二步中種子培養(yǎng)后得到的菌液接種到生產(chǎn)瓶中，用光合細(xì)菌生產(chǎn)培養(yǎng)基進(jìn)行生產(chǎn)培養(yǎng)，菌液的接種量為所述光合細(xì)菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的5％，在溫度為30℃～32℃、光照條件為2500Lx～4000Lx、pH＝7.0條件下，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；

第四步：離心：將第三步中生產(chǎn)培養(yǎng)得到的菌液進(jìn)行8000rpm、4℃、15min離心后，收集上清，然后用0.22μm濾膜進(jìn)行抽濾得到濾液，即制得嗜硫小紅卵菌菌劑。

一種胞外蛋白，所述胞外蛋白從上述的嗜硫小紅卵菌菌劑或上述制備方法制備得到的嗜硫小紅卵菌菌劑中提取得到。

一種上述的胞外蛋白的制備方法，具體包括以下步驟：

第一步：硫酸銨沉淀-鹽析：向嗜硫小紅卵菌菌劑中加入硫酸銨至85％飽和度，使所述嗜硫小紅卵菌菌劑中的蛋白析出，得到混合液；

第二步：離心：將所述第一步中得到的混合液以11000rpm轉(zhuǎn)速離心30min得到沉淀，將所述沉淀重懸于PBS緩沖液中得到蛋白重懸液；

第三步：ATKA蛋白純化系統(tǒng)HiTrap Desalting 5mL脫鹽柱脫鹽：將所述第二步中制備得到的蛋白重懸液低溫冷凍濃縮后，采用HiTrap Desalting 5mL脫鹽柱進(jìn)行脫鹽得到蛋白粗品；

第四步：ATKA蛋白純化系統(tǒng)Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱層析分離：將第三步中制得的蛋白粗品采用Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱進(jìn)行層析分離得到胞外蛋白。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述第二步中PBS緩沖液的濃度為0.01M，pH為7.0。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述第三步中蛋白重懸液以15％的上樣比例進(jìn)行HiTrap Desalting 5mL柱脫鹽得到蛋白粗品，將所述蛋白粗品稀釋至10mg/mL。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述第四步中蛋白粗品按2％的上樣比例進(jìn)行Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱層析分離。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述第四步中層析分離后獲得的各個(gè)蛋白組分，然后進(jìn)行活性測(cè)定，合并活性組分，低溫冷凍濃縮即得到胞外蛋白。

一種根據(jù)上述的胞外蛋白或權(quán)利要求5-9任一的提取方法提取得到的胞外蛋白的應(yīng)用，所述胞外蛋白應(yīng)用于辣椒炭疽病防治。

本發(fā)明從嗜硫小紅卵菌IV-1菌劑可以分泌出對(duì)辣椒炭疽病菌具有拮抗作用的胞外蛋白，從而對(duì)辣椒炭疽病起抑制作用；本發(fā)明首次從從嗜硫小紅卵菌IV-1菌劑的胞外產(chǎn)物中提取胞外蛋白，其提取工藝簡(jiǎn)單、流程短、成本低，提取過程對(duì)環(huán)境無(wú)污染；本發(fā)明從嗜硫小紅卵菌IV-1菌劑中提取獲得的蛋白組分分子量約為50kD，熱穩(wěn)定性高、耐儲(chǔ)藏、對(duì)辣椒炭疽病的抑制作用效果好。

實(shí)施例1

一種嗜硫小紅卵菌菌株為嗜硫小紅卵菌IV-1(Rhodovulum sulfidophilum IV-1)，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC M 2012369，保藏單位地址位于中國(guó)武漢大學(xué)，保藏日期為2012年9月26日，該菌株被命名為嗜硫小紅卵菌IV-1(Rhodovulum sulfidophilum IV-1)。

參見圖1：本發(fā)明的嗜硫小紅卵菌菌株IV-1，為革蘭氏陰性菌，經(jīng)生理生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定為嗜硫小紅卵菌，主要生物學(xué)特征有：雙層固體平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)4d～8d，形成紅色的圓形菌落，菌落邊緣整齊光滑、菌落直徑0.2mm～0.60mm；液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)7d呈深紅色；在厭氧和微氧條件下生長(zhǎng)良好；生理化特性為V-P反應(yīng)與甲基紅反應(yīng)陰性、H₂S反應(yīng)、明膠液化、脲酶試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)均陽(yáng)性，最適生長(zhǎng)溫度30℃～32℃，pH＝7。

實(shí)施例2

一種嗜硫小紅卵菌菌劑，所述嗜硫小紅卵菌菌劑采用實(shí)施例1的嗜硫小紅卵菌菌株經(jīng)活化、種子培養(yǎng)、生產(chǎn)培養(yǎng)、離心后制備得到，具體的制備方法，包括以下步驟：

第一步：活化：將嗜硫小紅卵菌菌株的保存種按雙層平板培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至紅色單菌落出現(xiàn)；

第二步：種子培養(yǎng)：將第一步中培養(yǎng)的紅色單菌落接入至血清瓶中，在溫度為30℃～32℃、光照條件為2500Lx～4000Lx、pH為7.0條件下，用光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期得到菌液；

第三步：生產(chǎn)培養(yǎng)：將第二步中種子培養(yǎng)后得到的菌液接種到生產(chǎn)瓶中，用光合細(xì)菌生產(chǎn)培養(yǎng)基進(jìn)行生產(chǎn)培養(yǎng)，菌液的接種量為所述光合細(xì)菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的5％，在溫度為30℃～32℃、光照條件為2500Lx～4000Lx、pH＝7.0條件下，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；

第四步：離心：將第三步中生產(chǎn)培養(yǎng)得到的菌液進(jìn)行8000rpm、4℃、15min離心后，收集上清，然后用0.22μm濾膜進(jìn)行抽濾得到濾液，即制得嗜硫小紅卵菌菌劑。

實(shí)施例3

一種胞外蛋白，胞外蛋白從實(shí)施例2的嗜硫小紅卵菌菌劑提取得到，具體制備方法，包括以下步驟：

第一步：硫酸銨沉淀-鹽析：向嗜硫小紅卵菌菌劑中加入硫酸銨至85％飽和度，使所述嗜硫小紅卵菌菌劑中的蛋白析出，得到混合液；

第二步：離心：將所述第一步中得到的混合液以11000rpm轉(zhuǎn)速離心30min得到沉淀，將所述沉淀重懸于PBS緩沖液中得到蛋白重懸液；PBS緩沖液的濃度為0.01M，pH為7.0；

第三步：ATKA蛋白純化系統(tǒng)HiTrap Desalting 5mL脫鹽柱脫鹽：將所述第二步中制備得到的蛋白重懸液低溫冷凍濃縮后，采用HiTrap Desalting 5mL脫鹽柱進(jìn)行脫鹽得到蛋白粗品；蛋白重懸液以15％的上樣比例進(jìn)行HiTrap Desalting 5mL柱脫鹽得到蛋白粗品，將所述蛋白粗品稀釋至10mg/mL；

第四步：ATKA蛋白純化系統(tǒng)Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱層析分離：將第三步中制得的蛋白粗品采用Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱進(jìn)行層析分離得到胞外蛋白；蛋白粗品按2％的上樣比例進(jìn)行Superdex 200 Increase 10/300GL層析柱層析分離；層析分離后獲得的各個(gè)蛋白組分，然后進(jìn)行活性測(cè)定，合并活性組分，低溫冷凍濃縮即得到胞外蛋白。

實(shí)施例4：

一種實(shí)施例3的胞外蛋白在辣椒炭疽病病防治中的應(yīng)用，具體的應(yīng)用方法為：

辣椒炭疽菌絲平板測(cè)定試驗(yàn)：以辣椒膠孢炭疽病菌為靶標(biāo)，采用平板法做抑菌試驗(yàn)。將胞外蛋白加入10mLPDA培養(yǎng)基中，配制成含終濃度200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL的蛋白平板，并將200μg/mL進(jìn)行100℃處理15min滅活為對(duì)照，接入培養(yǎng)7d的辣椒炭疽病病菌，28℃培養(yǎng)，重復(fù)5次，28℃培養(yǎng)3d后計(jì)算蛋白液對(duì)炭疽病菌的抑制率。

抑制率＝(菌落直徑_{對(duì)照菌落}-菌落直徑_蛋白處理)/菌落直徑_{對(duì)照菌落}×100％。

參見圖2，圖2中編號(hào)1、2、3、4、5、6分別為滅活蛋白、牛血清蛋白200μg/mL、空白對(duì)照和50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的胞外蛋白組分處理，從圖中2中可以知道：胞外蛋白液在濃度為50μg/mL仍具有一定活性；高溫處理后的蛋白喪失對(duì)辣椒炭疽病的防治效果。當(dāng)濃度達(dá)到200μg/mL以上時(shí)，對(duì)辣椒炭疽病的防治效果達(dá)到72.53％。0.01M、pH＝7.0的PBS緩沖液為空白對(duì)照。

辣椒炭疽病產(chǎn)孢量測(cè)定試驗(yàn)：以辣椒膠孢炭疽病菌為靶標(biāo)，將胞外蛋白均勻混入到20mL馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，調(diào)整蛋白終濃度為200μg/mL，接入培養(yǎng)5d的辣椒炭疽病病菌菌餅(6mm)、28℃、180rpm搖菌培養(yǎng)，培養(yǎng)8天后統(tǒng)計(jì)其產(chǎn)孢量。

參見圖3，圖3中編號(hào)1、2、3分別為100mg/mL嘧菌酯、胞外蛋白200μg/mL、空白對(duì)照處理，從圖3中可以知道：胞外蛋白處理的產(chǎn)孢量為4.1×10⁴個(gè)/ml，與嘧菌酯處理后的產(chǎn)孢量相當(dāng)，而空白對(duì)照的產(chǎn)孢量達(dá)到3.6×10⁶個(gè)/ml.。0.01M、pH＝7.0的PBS緩沖液為空白對(duì)照。

辣椒炭疽病原體果實(shí)生測(cè)試驗(yàn)：采集成熟果，經(jīng)表面消毒后，用HAMILTON微量注射器的針頭在果面上刺2個(gè)接種點(diǎn)，將辣椒葉煎液：胞外蛋白：孢子＝1：1：1比例配制的孢子懸浮液(濃度為1×10⁶個(gè)/mL)，每點(diǎn)注入10μL于果肉中，25～28℃、12h光照/d、RH≥95％的條件下培養(yǎng)，第7天調(diào)查發(fā)病情況。病斑直徑≥4mm的視為發(fā)病，統(tǒng)計(jì)發(fā)病率，即病斑數(shù)占總接種點(diǎn)的百分率。設(shè)4次重復(fù)，每重復(fù)至少5個(gè)果。

參見圖4，圖4中編號(hào)1、2、3分別表示濃度為100mg/mL嘧菌酯、胞外蛋白200μg/mL、空白對(duì)照處理，從圖中4中可以發(fā)現(xiàn)：對(duì)照處理的辣椒炭疽病菌發(fā)病率為90％，而胞外蛋白液處理后辣椒未發(fā)病，與嘧菌酯效果相當(dāng)。0.01M、pH＝7.0的PBS緩沖液為空白對(duì)照。

辣椒炭疽病溫室生測(cè)試驗(yàn)：用10％辣椒葉煎液配制孢子懸浮液(濃度為1×10⁶個(gè)/mL)噴霧接種苗齡為4～5葉期的幼苗，以葉面滴水為宜。接種后立即保濕24h，7d后再重復(fù)噴水保濕24h。鑒定期間幼苗保持在26～28℃、10h光照/d條件下培養(yǎng)，14d后調(diào)查。病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，無(wú)癥狀病斑；1級(jí)，病斑直徑1mm，1～2片葉發(fā)病；2級(jí)，病斑直徑大于1mm，2片真葉發(fā)病；3級(jí)，有許多大斑，產(chǎn)生孢子或2片以上真葉發(fā)病，植株畸形、矮化；4級(jí)，有許多大斑，產(chǎn)生大量孢子，病株瀕于枯死或已枯死。

參見圖5，圖5中編號(hào)1、2、3分別表示濃度為100mg/mL嘧菌酯、胞外蛋白200μg/mL、空白對(duì)照處理，從圖中4中可以發(fā)現(xiàn)：空白對(duì)照處理的辣椒已全枯死，胞外蛋白液處理后辣椒炭疽病防效達(dá)75.63％。0.01M、pH＝7.0的PBS緩沖液為空白對(duì)照。

上面對(duì)本專利的較佳實(shí)施方式作了詳細(xì)說(shuō)明，但是本專利并不限于上述實(shí)施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下做出各種變化。