本發明涉及活性成分制備的技術領域，具體地涉及一種由蘑菇或其下腳料制備麥角硫因的方法。

背景技術：

麥角硫因(巰基組氨酸三甲基內鹽，ergothioneine，簡稱為EGT)是1909年在麥角中發現的一種稀有氨基酸，其分子結構如下所示。

麥角硫因是機體內的重要活性物質，但不能由動物機體自身合成，只能從食物中攝取。國外研究表明它在生物體內可起到抗氧化劑作用，具有清除自由基、維持DNA的生物合成、細胞的正常生長及細胞免疫等多種生理功能，可用于戶外護膚產品、防護性的化妝品以及眼科產品的開發，也可作為谷胱甘肽理想的替代品，現在已漸漸得到更多人的關注。已有實驗證明，人和動物攝入麥角硫因是安全的，且美國已有將麥角硫因作為原料開發的緩解關節疼痛，緩解炎癥的膳食補充劑上市銷售。麥角硫因最早在1909年從一種真菌Claviceps purpurea中被發現，后來發現在牛肝菌、蘑菇、毛頭鬼傘等食用菌中能產生麥角硫因。目前麥角硫因的獲得方式主要有化學合成和從天然原料的分離兩類。但是化學合成的麥角硫因由于存在副產物等其他雜質而限制了其在食品、藥品與保健品領域中的應用。對于采用天然來源提取的方法，專利文獻報道的方法大都是利用氧化鋁柱進行分離，然后通過高效液相制備分離。專利申請CN104774182A報道一種從蕈菌菌絲體發酵液中分離麥角硫因的方法，該專利申請中的方法利用超濾膜進行超濾，然后通過HILIC色譜填料進行純化。采用現有的天然原料提取的方法存在的問題是通過現有的提取方法得到的麥角硫因提取物含量很低，一般只有1～5％左右，很難獲得高含量的產品，也很難實現大規模生產。另外，蘑菇生產過程中產生的大量下腳料無法利用，造成了極大的浪費。因此，由天然原料制備麥角硫因已成為研究的新熱點，提出一種高效的麥角硫因制備方法具有重要的經濟和社會意義。

技術實現要素：

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種制備麥角硫因的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)以蘑菇為原料，向所述原料中加入水或體積百分比濃度為5～30％的乙醇水溶液，加熱提取，過濾，將濾液合并，降溫至50℃以下，除去沉淀，保留水提取液的上清液或將乙醇水溶液提取得到的上清液減壓濃縮，得到提取產物；

(2)將步驟(1)得到的提取產物采用大孔樹脂分離吸附，先后用水和體積百分比濃度為5～50％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，減壓濃縮，得到大孔吸附樹脂分離產物；

(3)將步驟(2)得到的大孔吸附樹脂分離產物采用聚酰胺樹脂吸附，先后用水和5～50％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，減壓濃縮，得到麥角硫因提取物。

在本發明步驟(1)中，如果采用乙醇水溶液提取，則乙醇水溶液的濃度以5～30％為宜。由于麥角硫因易溶于水，不易溶于乙醇，濃度過高會導致麥角硫因在高醇溶液中的溶解效果不佳，麥角硫因難以從原料中提取出來。除去沉淀時的溫度如果高于50℃，許多雜質無法完全沉淀下來，導致提取效果不佳。另外，為了便于后續的大孔樹脂分離操作，采用乙醇水溶液提取時，需要將乙醇除去后再作大孔樹脂分離。

優選地，在本發明方法的步驟(1)中，所述蘑菇為榛蘑、金針菇、口蘑、雞腿菇、海鮮菇、白玉菇柄、杏鮑菇、白蘑、猴頭菇、平菇、靈芝、硫磺菌或薄皮纖孔菌中的一種或多種；更優選地，所述蘑菇為蘑菇的菌柄或菌傘、或蘑菇采摘后的下腳料。

優選地，在本發明方法的步驟(1)中，向所述原料中加入按原料質量計2～5倍質量的水或體積百分比濃度為5～30％的乙醇水溶液。

優選地，在本發明方法的步驟(1)中，所述加熱提取的溫度為70～95℃；更優選地，所述加熱提取進行1～3次，每次1～5小時。

優選地，在本發明方法的步驟(1)中，所述過濾采用80～120目的濾網進行。

優選地，在本發明方法的步驟(2)中，所述大孔樹脂的型號為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD300型、X-5型、NKA-Ⅱ型、D101型或816型。

優選地，在本發明方法的步驟(2)中，所述梯度洗脫采用以下任一組乙醇水溶液進行：(a)5％、15％、25％、35％和50％；(b)10％、30％和50％；(c)5％、15％、30％和50％。

優選地，在本發明方法的步驟(3)中，所述梯度洗脫采用體積比百分比濃度為(a)5％、15％、35％和50％或(b)10％、20％、30％和50％的乙醇水溶液進行。

優選地，在本發明方法的步驟(1)、(2)或(3)中，所述減壓濃縮的條件為：溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa。減壓濃縮時，溫度過高易導致產品被破壞，不利于保證產品品質的穩定。

優選地，在本發明方法的步驟(1)中，得到的提取產物的糖度為2～40。

優選地，在本發明方法的步驟(2)中，得到的大孔吸附樹脂分離產物的糖度為10～40。

優選地，在本發明方法的步驟(3)中，得到的麥角硫因提取物的糖度為10～20。

各個步驟中的糖度需要適當控制，因為糖度太低會影響后面的分離操作。

優選地，本發明所述的方法還包括步驟(4)：將所述步驟(3)制備的麥角硫因提取物采用ODS中低壓柱吸附，然后用水和體積百分比濃度為5～35％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，得到糖度為10～20的麥角硫因濃縮產物。優選地，在該步驟中，所述梯度洗脫采用以下任一組乙醇水溶液進行：(a)5％、10％、20％和35％；(b)5％、10％、15％、20％和35％；(c)5％、10％、15％、20％、25％和35％；(d)10％、15％、20％、25％和35％；(e)10％、15％、20％和25％；(f)10％、15％、25％和35％。更優選地，所述減壓濃縮在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下進行。

優選地，本發明的方法還包括步驟(5)：將步驟(4)制備的麥角硫因濃縮產物采用Sephadex LH-20柱進行層析純化，用體積百分比濃度為5～25％的甲醇水溶液進行等濃度洗脫，收集富含麥角硫因的洗脫液，將洗脫液減壓濃縮、冷凍干燥，得到麥角硫因。優選地，在該步驟中，所述等濃度洗脫采用體積百分比濃度為5％、10％、15％、20％或25％的甲醇水溶液進行；更優選地，所述減壓濃縮在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下進行。

與現有技術相比，本發明提供的方法可以制備麥角硫因含量為20～98％的提取物，所得提取物能夠達到工業化生產的要求，為麥角硫因提取物的進一步開發利用奠定了基礎。同時，本發明的方法中使用的原料來源于多種真菌蘑菇品種以及蘑菇的多個部位，例如榛蘑、金針菇、口蘑、雞腿菇、海鮮菇、白玉菇柄、杏鮑菇、白蘑、猴頭菇、平菇、靈芝、硫磺菌、薄皮纖孔菌等菌種的菌柄、菌傘以及這些蘑菇采摘后的下腳料等，都可以作為提取麥角硫因的原料；其中，榛蘑、白蘑、杏鮑菇、雞腿菇、口蘑、海鮮菇和金針菇是提供麥角硫因成分較好的植物原料。通過本發明的方法可以大大降低生產成本，減少資源浪費和環境污染，具有巨大的經濟效益。

附圖說明

以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施方案，其中：

圖1是根據本發明實施例4的方法制備得到的麥角硫因的HPLC圖譜；

圖2是根據本發明實施例4的方法制備得到的麥角硫因的ESI-MS圖譜。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。

實施例1

麥角硫因的HPLC檢測方法的條件：

色譜柱：Kromasil 100-5NH₂柱(250mm×4.60mm，E36056)

檢測波長：254nm

流速：1.0ml/min

柱溫：30℃

流動相：乙腈-5mmol/L醋酸銨(80∶20)

進樣量：20μL。

實施例2

(1)提取：在100g榛蘑中加入500g的水，在95℃下溫浸提取3次，提取時間分別為3、2、1小時，過濾，濾網的目數為120，將濾液合并，靜置降溫至溫度低于50℃，棄去沉淀，得上清液；

(2)大孔樹脂吸附分離：將(1)中得到的上清液經HP20型大孔樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為5％、15％、25％、35％、50％的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，將洗脫液合并，然后在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，糖度為40，得到大孔樹脂分離產物；

(3)聚酰胺樹脂分離：將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物分散至水中(大孔樹脂分離產物∶水＝1∶5，質量比)，采用聚酰胺樹脂吸附，然后用水、體積百分比濃度為5％、15％、35％、50％的乙醇水溶液進行洗脫，通過分析型HPLC檢測分析，收集富含麥角硫因的洗脫液，得到的洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取物，糖度為10，麥角硫因的含量為51.3％。

實施例3

本實施例包括四個步驟，其中步驟(1)至(3)同實施例2，步驟(4)操作如下。

(4)ODS中低壓柱層析分離：通過步驟(3)聚酰胺分離得到的麥角硫因提取物采用ODS中低壓柱進行吸附，用水、體積百分比濃度為5％、10％、20％、35％的乙醇水溶液進行梯度洗脫，每25ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液，然后在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為10的麥角硫因濃縮產物。用實施例1的方法測定，麥角硫因的含量為80.1％。

實施例4

本實施例包括五個括步驟，其中步驟(1)至(4)同實施例3，步驟(5)操作如下。

(5)Sephadex LH-20進行純化：步驟(4)得到的麥角硫因濃縮產物采用Sephadex LH-20柱層柱進行吸附，然后用體積百分比濃度為5％的甲醇進行洗脫，每10ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液，洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為20的濃縮產物，然后經冷凍干燥得到麥角硫因(127mg)。

利用HR-Q-TOF-MS技術進行質譜測定并與文獻數據進行對照，鑒定了根據上述方法分離得到的單體化合物為我們的目標化合物——麥角硫因。在此基礎上利用標準品(美國CHROMDEX公司購買)進行標定，測定麥角硫因的含量為98％。陽離子ESI-MS中給出了準分子離子峰[M]⁺230.0881，與麥角硫因標準品的分子量相符。

實施例5

(1)提取：在1kg杏鮑菇中加入3kg的水，在70℃下溫浸提取2次，每次3小時，過濾，濾網的目數為80，將濾液合并，然后靜置至溫度低于50℃，棄沉淀，得上清液；

(2)大孔樹脂吸附分離：將(1)中得到的上清液經D101型大孔樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為10％、30％、50％的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，將其合并，然后在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到大孔樹脂分離產物，糖度為40；

(3)聚酰胺樹脂分離：將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物分散至水中(大孔樹脂分離產物∶水＝1∶4，質量比)，采用聚酰胺樹脂進行吸附，用水、體積百分比濃度為10％、20％、30％、50％的乙醇水溶液洗脫，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，然后在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取物，糖度為10，麥角硫因的含量為61.2％。

實施例6

本實施例包括四個步驟，其中步驟(1)至步驟(3)同實施例5，步驟(4)操作如下。

(4)ODS中低壓柱層析分離：將經步驟(1)至步驟(3)分離得到的麥角硫因提取物用ODS中低壓柱進行吸附，用水、體積百分比濃度為5％、10％、20％、35％的乙醇水溶液梯度洗脫，每50ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液，并將其在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，糖度為20，得到的麥角硫因濃縮產物，含量為81.3％。

實施例7

本實施例包括五個步驟，其中步驟(1)至步驟(4)同實施例6，步驟(5)操作如下。

(5)Sephadex LH-20進行純化：將(4)中得到的麥角硫因濃縮產物用Sephadex LH-20柱層析進行吸附，然后用體積百分比濃度為25％的甲醇進行洗脫，每10ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為10的濃縮產物，經冷凍干燥得到麥角硫因純品(83mg)。

實施例8

(1)提取：在1000g雞腿菇中加入4000g的體積百分比濃度為5％的乙醇水溶液，在70℃下溫浸提取1次，浸提3小時，過濾，濾網的目數為100，濾液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，糖度為10，得到麥角硫因提取產物；

(2)大孔樹脂吸附分離：將(1)得到的麥角硫因提取產物用水分散(麥角硫因提取產物與水的質量比為1∶3)，靜置2小時，棄去沉淀，上清液經AB-8型大孔樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為10％、30％、50％的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，將其合并。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到大孔樹脂分離產物，糖度為40；

(3)聚酰胺樹脂分離：將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物分散至水中(大孔樹脂分離產物與水的質量比為1∶4)，然后采用聚酰胺樹脂進行吸附，用水、體積百分比濃度為10％、20％、30％、50％的乙醇水溶液洗脫，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取物，糖度為10，麥角硫因含量為42.3％。

實施例9

本實施例包括四個步驟，其中步驟(1)至步驟(3)同實施例8，步驟(4)操作如下。

(4)ODS中低壓柱層析分離：將通過步驟(3)聚酰胺分離得到的麥角硫因提取物采用ODS中低壓柱吸附，然后用水、體積百分比濃度為5％、10％、15％、20％、35％的乙醇水溶液梯度洗脫，每50ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因濃縮產物，糖度為10，麥角硫因含量為62.7％。

實施例10

本實施例包括五個步驟，其中步驟(1)至步驟(4)同實施例9，步驟(5)操作如下。

(5)Sephadex LH-20進行純化：將(4)中得到的含有麥角硫因濃縮產物用Sephadex LH-20柱層析吸附，然后用體積百分比濃度為15％的甲醇進行洗脫，每10ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為20的濃縮產物，經冷凍干燥得到麥角硫因純品32mg。

實施例11

(1)提取：在100g白蘑中加入200g的體積百分比濃度為10％的乙醇水溶液，在70℃下溫浸提取1次，浸提5小時，過濾，濾液合并。在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下將濾液減壓濃縮，得到麥角硫因提取產物，糖度為10。

(2)大孔樹脂吸附分離：將步驟(1)得到的麥角硫因提取產物用水分散(麥角硫因提取產物與水的質量比為1∶3)，靜置2小時，棄去沉淀，上清液用816型大孔樹脂吸附，然后用水、體積百分比濃度為5％、15％、30％、50％的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，將其合并。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到大孔樹脂分離產物，糖度為40。

(3)聚酰胺樹脂分離：將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物分散至水中(大孔樹脂分離產物與水的質量比為1∶4)，然后采用聚酰胺樹脂進行吸附，用水、體積百分比濃度為10％、20％、30％、50％的乙醇水溶液洗脫，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取物，糖度為10，麥角硫因含量為53.7％。

(4)ODS中低壓柱層析分離：通過步驟(3)聚酰胺分離得到的麥角硫因提取物采用ODS中低壓柱吸附，然后用水、體積百分比濃度為5％、10％、15％、20％、25％、35％的乙醇水溶液梯度洗脫，每50ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因濃縮產物，糖度為10，麥角硫因含量為89.7％。

(5)Sephadex LH-20進行純化：將步驟(4)得到的麥角硫因濃縮產物采用Sephadex LH-20柱層析吸附，用體積百分比濃度為10％的甲醇進行洗脫，每10ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為20的濃縮產物，經冷凍干燥得到麥角硫因的純品(18mg)。

實施例12

(1)提取：在500g口蘑中加入2500g的體積百分比濃度為30％的乙醇水溶液，在70℃下溫浸提取3次，浸提5小時，過濾，濾液合并，靜置至溫度低于50℃，棄沉淀，得上清液；上清液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮至無乙醇，糖度為40，得到麥角硫因提取產物；

(2)大孔樹脂吸附分離：將步驟(1)得到的麥角硫因提取產物分散至水中(麥角硫因提取產物與水的質量比為1∶10)，靜置2小時，棄去沉淀，上清液經X-5型大孔樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為10％、30％、50％乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過結合分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，將其合并，然后在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到大孔樹脂分離產物，糖度為20。

(3)聚酰胺樹脂分離：將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物分散至水中(大孔樹脂分離產物與水的質量比為1∶4)，然后采用聚酰胺樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為10％、20％、30％、50％的乙醇水溶液洗脫，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取物，糖度為20，麥角硫因含量為37.2％；

(4)ODS中低壓柱層析分離：將通過步驟(3)得到的麥角硫因提取物采用ODS中低壓柱進行吸附，用水、體積百分比濃度為10％、15％、20％、25％、35％的乙醇水溶液梯度洗脫，每50ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因濃縮產物，糖度為10，麥角硫因含量為78.1％。

(5)Sephadex LH-20進行純化：將(4)得到的麥角硫因濃縮產物用Sephadex LH-20柱層析吸附，然后用體積百分比濃度為25％的甲醇進行洗脫，每10ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為20的濃縮產物，經冷凍干燥得到麥角硫因純品(12mg)。

實施例13

(1)提取：在500g海鮮菇中加入2000g的體積百分比濃度為20％的乙醇水溶液，在70℃下溫浸提取1次，浸提3小時，過濾，濾液合并，在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取產物，糖度為20；

(2)大孔樹脂吸附分離：將(1)得到的麥角硫因提取產物用水分散(麥角硫因提取產物與水的質量比為1∶4)，靜置2小時，棄去沉淀，上清液經HPD-100型大孔樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為10％、30％、50％的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，將洗脫液合并。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到大孔樹脂分離產物，糖度為40；

(3)聚酰胺樹脂分離：將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物分散至水中(大孔樹脂分離產物與水的質量比為1∶4)，然后用聚酰胺樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為10％、20％、30％、50％的乙醇水溶液洗脫，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取物，糖度為10，麥角硫因含量為29.2％；

(4)ODS中低壓柱層析分離：將步驟(3)得到的麥角硫因提取物用ODS中低壓柱進行吸附，然后用水、體積百分比濃度為10％、15％、20％、25％的乙醇水溶液梯度洗脫，每50ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因濃縮產物，糖度為20，麥角硫因含量為51.3％；

(5)Sephadex LH-20進行純化：將(4)中得到的麥角硫因濃縮產物用Sephadex LH-20柱層析吸附，用體積百分比濃度為20％的甲醇進行洗脫，每10ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06-0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為10的濃縮產物，經冷凍干燥得到麥角硫因純品(8.9mg)。

實施例14

(1)提取：在500g金針菇中加入2500g的體積百分比濃度為15％的乙醇水溶液，在70℃下溫浸提取1次，浸提5小時，過濾，濾液合并，并在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，糖度為20，得到麥角硫因提取產物。

(2)大孔樹脂吸附分離：將(1)中得到的麥角硫因提取產物用水分散(麥角硫因提取產物與水的重量比為1∶4)，靜置2小時，棄去沉淀，上清液經HPD300型大孔樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為10％、30％、50％的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，將其合并。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，糖度為40，得到大孔樹脂分離產物。

(3)聚酰胺樹脂分離：將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物分散至水中(大孔樹脂分離產物與水的質量比為1∶4)，采用聚酰胺樹脂吸附，然后用水、體積百分比濃度為10％、20％、30％、50％的乙醇水溶液洗脫，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，糖度為10，得到麥角硫因提取物，含量為32.9％。

(4)ODS中低壓柱層析分離：將步驟(3)得到的麥角硫因提取物采用ODS中低壓柱進行吸附，用水、體積百分比濃度為10％、15％、25％、35％的乙醇水溶液梯度洗脫，每50ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液，并將其在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa減壓濃縮，得到麥角硫因濃縮產物，糖度為20，含量為57.2％。

(5)Sephadex LH-20進行純化：將(4)中得到的麥角硫因濃縮產物采用Sephadex LH-20柱層析進行吸附，然后用體積百分比濃度為10％的甲醇進行洗脫，每10ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為10的濃縮產物，經冷凍干燥得到麥角硫因的純品(21mg)。

實施例15

(1)提取：在1kg平菇中加入5kg的體積百分比濃度為10％的乙醇水溶液，在70℃下溫浸提取1次，浸提5小時，過濾，濾液合并，然后在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取產物，糖度為10；

(2)大孔樹脂吸附分離：將(1)得到的麥角硫因提取產物用水分散(麥角硫因提取產物與水的質量比為1∶1)，靜置2小時，棄去沉淀，上清液經NKA-II型大孔樹脂吸附，用水、體積百分比濃度為10％、30％、50％的乙醇水溶液梯度洗脫，每250ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液，將其合并。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到大孔樹脂分離產物，糖度為15；

(3)聚酰胺樹脂分離：將步驟(2)得到的大孔樹脂分離產物分散至水中(大孔樹脂分離產物與水的質量比為1∶4)，然后采用聚酰胺樹脂進行吸附，用水、體積百分比濃度為10％、20％、30％、50％的乙醇水溶液洗脫，通過分析型HPLC檢測，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因提取物，糖度為10，麥角硫因含量為27.3％；

(4)ODS中低壓柱層析分離：將通過步驟(3)聚酰胺分離得到的麥角硫因提取物采用ODS中低壓柱吸附，然后用水、體積百分比濃度為10％、15％、20％、25％、35％富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到麥角硫因濃縮產物，糖度為20，麥角硫因含量為49.8％；

(5)Sephadex LH-20純化：將(4)中得到的麥角硫因濃縮產物采用Sephadex LH-20柱吸附，用體積百分比濃度為10％的甲醇進行洗脫，每10ml作為一個接收體積，通過分析型HPLC檢測，以麥角硫因純品作為對照品，收集富含麥角硫因的洗脫液。洗脫液在溫度≤60℃，真空度為0.06～0.08MPa的條件下減壓濃縮，得到糖度為15的濃縮產物，經冷凍干燥得到麥角硫因純品(5mg)。