1.一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于包括以下步驟:
1)取PCV2病毒培養液,裂解細胞,得到細胞裂解液;
2)取步驟1)所得的細胞裂解液澄清處理,得到病毒澄清液;
3)取步驟2)所得的病毒澄清液濃縮8~12倍,得到病毒濃縮液;
4)取步驟3)所得的病毒濃縮液利用Sepharose 4FF分子篩層析純化系統純化,純化過程中,先通過蠕動泵以1.56πr2ml/min的流速利用0.9~1.1mol/L PBS溶液進行柱平衡至紫外蛋白檢測儀OD280基線平穩,而后取步驟3)所得的病毒濃縮液上樣,上樣結束后利用0.9~1.1mol/L PBS溶液洗脫,收集紫外蛋白檢測儀OD280的第一洗脫峰;
其中r是層析柱半徑,單位是厘米。
2.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟4)純化之前先用無菌的0.5mol/L的NaOH溶液對Sepharose 4FF分子篩層析純化系統進行循環沖洗20~30min,再用無菌1mol/L PBS對其進行循環沖洗,至PH為6.8~7.2。
3.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟1)具體包括以下操作:取PCV2病毒培養液,反復凍融3次,固液分離取沉淀,利用PBS溶液洗滌3次,棄去上清,加入細胞裂解液裂解,固液分離取沉淀,加入細胞裂解液重懸浮,而后超聲波處理。
4.根據權利要求3所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟1)所述的固液分離均是在4℃條件下以9500r/min的轉速離心20min。
5.根據權利要求3所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟1)中所述加入細胞裂解液裂解是:加入4℃預冷的細胞裂解液,用槍頭吹吸混勻后,冰浴20min。
6.根據權利要求3所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟1)所述超聲處理是以振幅為25%的超聲波每次處理10s,每兩次處理之間的時間間隔30s,超聲處理的總時間為30min。
7.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟2)所述澄清處理是利用孔徑為0.5~0.8μm的濾板實現的。
8.根據權利要求7所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟2)中,先利用0.5mol/L NaOH溶液浸泡濾板5min,而后用1mol/L無菌PBS溶液洗滌至PH為7.0,再澄清處理步驟1)所得的細胞裂解液。
9.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟3)中對病毒澄清液的濃縮是利用孔徑為100KD的中空纖維濾膜實現的。
10.根據權利要求9所述的一種豬圓環病毒2型病毒樣顆粒的純化方法,其特征在于步驟3)中先利用0.5mol/L NaOH溶液浸泡中空纖維濾膜20~30min,而后用1mol/L無菌PBS溶液洗滌至PH為7.0,再濃縮處理步驟2)所得的病毒澄清液。