本實用新型涉及一種接種器具，確切講是一種將目標真菌與寄主植物的接種部接觸，使真菌侵入寄主植物的接種器具，特別是適用于在硬質的木本植物中接種的器具。

背景技術：

人工使病原真菌與寄主植物感病部位接觸，創造條件使病原物侵入并誘致寄主發病的過程叫接種。接種是證病過程的重要步驟，在研究寄生現象發病規律，測定品種抗病性，藥劑防病效果評價時都需要接種。因此，接種方法直接影響試驗效果。

植物病害人工接種方法，是根據病害的傳染方式和侵染途徑設計的，植物病害的種類很多、其傳染方式和侵染途徑各異。真菌的接種方法有可采用無接種工具的方法和采用接種工具的方法兩類，其中采用接種工具的方法有：

1）噴霧法，這種方法是將配置好的孢子懸浮液，噴在寄主表面，病原菌可以從氣孔、傷口或表皮侵入。

2）涂抹法，即將病原菌用毛筆或刷涂抹在植物表面，使孢子萌發侵入。

3）注射法，將孢子懸浮液用注射器注射入記住生長點或幼嫩部分。

4）針刺法，人工制造機械損傷后，將菌餅貼在傷口處誘發病害。

現有的接種方法可參見《植病研究方法》方中達，1998。但傳統的接種方法往往具有接種效率低，癥狀發生慢，接種一致性差等缺點，而且前述的方法中1和2的方法在接種后還需要保濕48小時，而方法3和4的對于幼苗階段的較小個體，以及離體葉片等組織結構，很難定量實施侵染。

中國發明專利201410604178.7公開了一種食用菌木簽菌種的制作方法，屬于食用菌生產種植領域。該方法包括如下步驟：將紗布或牛皮紙訂于木簽的一端放入石灰水中浸泡至木簽內部無白心，撈出木簽晾干表水；將面粉、玉米粉、白砂糖、石膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、菇豐素、維生素B₁加到水中，加熱至漿糊狀得到粘合劑；將木簽與粘合劑混合攪拌至粘合劑均勻附著在木簽表面，加入麩皮或米糠攪拌至其均勻粘附木簽表面70-80%時，將木簽裝入聚丙烯袋或菌種瓶中，封口后滅菌；在無菌條件下接種菌種，置于20-26℃培養10-20天，即可長滿菌絲。但這種木簽菌種卻不適合用于真菌接種，特別是不適合于在樹木類的硬質植物上接種。

中國發明專利申請201310720075.2公開一種木釘菌種方法，該專利所用的接種木釘是用枝丫、廢材、次品食簽棍、油條、杏條制作成粗度為0.5cm的帶有尖端的棒狀木釘，其使用時是用5%濃度的常溫白糖水浸泡24小時撈出再拌入菌釘體積的10%的營養料即可裝袋用于接種。但這種木釘浸入培養基會軟化，再用這種木釘在質地較硬的寄主，例如樹木上，接種時將可能無法剌入寄主，實現接種作業。

技術實現要素：

本實用新型給出一種可克服現有技術不足的真菌接種工具。

本實用新型的接種具由帶有尖端的棒狀金屬件和鑲嵌于棒狀金屬件上的的接種體構成，其中的接種體由木質或竹質或其它可以使細菌、真菌在上附著的材料構成，且接種體至少有一部分外露于棒狀金屬件的外表面。

本實用新型的接種方法使用的接種具還可以是由木制或竹制其一端帶圓錐體、圓錐體后設置為圓柱體的接種體和固定于圓錐體頭部的金屬尖端構成。

優選地，本實用新型的接種具的金屬尖端與木制或竹制圓錐體間嵌鑲固定，或者用螺紋固定。

本實用新型的接種工具所用的金屬為不銹鋼。

本實用新型的優點是：

1、由于本實用新型采用帶有尖端的金屬棒狀結構，特別是不銹鋼針尖便于組織刺傷，尤其適合于樹干堅硬的林木接種， 完全不存在現有技術中接種木釘軟化的不足。另一方面，本實用新型的接種具在使用后只要洗凈、滅菌后即可重復使用，也可在特殊情況下將更換接種體，因此使用本實用新型的接種具可節省成本。

2、本實用新型的接種具上設置的木質或竹質的接種體，即可以染菌以侵染寄主，同時更便于精確觀測病原菌侵入點，精準定點觀測和統計。

3、誤差小。以往制備孢子懸浮液或者孢子涂抹，為了保證達到較高的病原菌濃度，需要用血球計數板配制孢子懸浮液。但血球計數板統計數據僅僅是一個倍數換算的統計學估計值，往往和實際情況誤差較大（如：用血球計數板統計孢子濃度達到1×10⁶個/ml，而實際可能只有1×10⁵個/ml，最多能差10倍）。采用本實用新型的工具將不用配制孢子懸浮液，在搖床上能保證每個接種體所帶菌量均勻一致，避免產生誤差。

4、均勻性好。傳統的孢子懸浮液接種、涂抹接種等方法，只是將一定濃度的孢子接種至植物，但均勻性很難保證，尤其是接種種子、幼苗等較小個體，可能發生漏接種的現象（如噴霧接種法：有些種子表面可能在噴霧中，接觸到10個孢子，而有些可能1個都沒有）。本實用新型的接種工具制備過程中，勻速搖床使接種具上木質或竹質接種體與病原菌充分混勻，從最大概率上保證了每個接種具帶菌量的一致，接種過程中刺入植物，保證了接種過程中病原物數量的均勻，與處理間的一致。

5、發病快。噴霧接種法、涂抹接種法等方法，需等待病原菌萌發，芽管生長，再形成附著孢，侵入植物，會受到植物表皮蠟質層、角質層等影響,出現癥狀往往需要10天左右時間。采用本實用新型的接種工具接種，可直接造成創傷，能迅速使病原物侵入植物,大約3-4天即可觀察到癥狀，考察病原菌對植物造成的危害，測量病原菌在植物中的生長、擴展速度。

6、定點性強，便于觀察。采用現有的接種工具不容易從宏觀上確定究竟是哪些孢子萌發侵入植物，具體觀測時容易受到多處侵入點的互相影響。而使用本實用新型，其侵入點固定，即從針刺處開始侵染，容易觀測病原菌侵入植物的過程、程度，并定點測量病原菌在植物上的擴展速度。

7、本實用新型的接種具更為實用并可使操作更加方便簡單。傳統針刺法后，也用孢子懸浮液或者菌餅接種。孢子懸浮液仍存在上述的缺點。而菌餅接種法存在以下問題：1菌落不同區域產生的菌餅帶菌量不同，病原菌活性不同，所以不同菌餅處理間一致性差；2菌餅接種過程需要其他工具輔助制造傷口，菌餅接種后還要封閉保濕，易污染；木質的接種工具易發生軟化而難于剌入較硬的寄主。本實用新型的接種具前端為一金屬的尖端，本身就是制造創傷的工具；再加上是用金屬制備，由于材料質地的原因，使其有相當的剛度而容易剌入堅硬的木質寄主內，同時當接種體在與培養基作用時不影響其金屬尖端的剛度，更不會造成現有的木釘前端變軟的不足；接種具中的嵌入的木質或竹質部件本身形成一個接種體，它可以與病原菌共同培養，可攜帶大量病原菌，使接種作業簡捷方便。所以本實用新型的方法及接種具集合了多重作用，并可使操作更為簡單。

附圖說明

附圖1為本實用新型的接種具示意圖。圖中：1為接種具的棒狀金屬件，2為鑲嵌于棒狀金屬件上的木質或竹質的部件，3為棒狀金屬件的尖端部分。

附圖2為附圖1的A-A向剖面示意圖。

附圖3為本實用新型的另一實施例示意圖。

具體實施方式

以下是本實用新型的實施例。

本實用新型的接種工具的一個實施例如圖1所示，是由棒狀金屬件1和鑲嵌于棒狀金屬件上的木質或竹質的接種體2構成，棒狀金屬件1的前端是一個尖端部分。在實際制備中可以如附圖1所示在棒狀金屬件1上開設一個通孔，再在通孔內嵌鑲一塊由木質或竹質材料的接種體2，這樣接種體2的兩端將可以外露以與培養菌接觸。接種工具也可以制成在棒狀金屬件1上開設一個盲孔，在盲孔內嵌鑲一塊由木質或竹質材料的接種體，這一結構中接種體將只有一個露在外面，在盲孔的孔頂可以設置一個頂絲，旋轉頂絲可以將嵌鑲入盲孔的接種體頂出盲孔以便于更換。

本實用新型的接種工具的第三個實施例如圖3示，它是由木制或竹制其一端帶圓錐體、圓錐體后設置為圓柱體，及嵌鑲于圓錐體頭部的金屬尖端構成。本實用新型的接種工具中，其金屬尖端與木制或竹制圓錐體間嵌鑲固定，或者用螺紋固定，即在金屬制的尖端和木制或竹制圓錐體與金屬制尖端相配合處各自設置相互配合的陽螺紋的陰螺紋。

本實用新型的接種工具所用的金屬最好采用不銹鋼。

本實用新型的接種工具的一個實際制品的尺寸如下：其圓柱體部分長10mm、直徑2mm，尖端部分長5mm。

使用本實用新型進行接種的過程如下：

將純化后的目標病原菌，打出5mm直徑菌餅，加入前述的三角瓶內的液體培養基中，放在恒溫搖床（依據不同病原菌調整溫度）上，轉速150r/min，培養10-15天，病原菌持續生長。然后將接種具121℃高壓30min滅菌2次，第3次浸入馬鈴薯葡萄糖液體培養基中滅菌后，再在無菌環境下將接種具轉移到液體培養的病原菌三角瓶中，每250ml中加入數十枚接種具。然后繼續放在恒溫搖床（依據不同病原菌調整溫度）上進行病原菌培養，搖床轉速150r/min，培養時間約72h。再從培養基中取出染菌的接種具，在無菌環境下利用其前部的尖端刺入確定為寄主的幼苗根莖部，或葉片或樹木莖部等部位，造成人為創傷，使接種體部分與寄主接種部位相接觸，即可促進病原菌從傷口侵入，用于離體葉片侵染、病害系統侵染等試驗。

采用本實用新型的方法接種與未接種的進行對比可見：寄主的接種部位已經呈現感染現象，表明已經被接種感染，而相對比的未染菌的接種具剌傷的植株雖然也被剌傷，但卻并不呈現感染現象。

為檢驗接種體的可靠性，將10個接種具放在滅菌培養皿（90mm）中，加入5ml無菌水，充分攪動搖勻，洗下接種體表面的孢子形成懸浮液。在普通顯微鏡下（100×）統計20個視野中的孢子數量，根據顯微鏡的視野直徑和培養皿內徑計算每個接種體上的孢子數量。共10個重復。用目鏡測微尺測得，顯微鏡100×下每個視野的直徑為2mm，90mm培養皿底蓋內徑為85mm，培養皿底蓋共有1805.25個視野，每個接種體帶孢子數為：

。每個接種體所帶孢子數為48～62，平均為56個，經SPSS方差分析，每個接種體所帶孢子數量無顯著差異。