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一種基于共線性基因開發標記鑒定大白菜?結球甘藍易位系的方法與流程

文檔序號:12056599閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種基于共線性基因開發標記鑒定大白菜-結球甘藍易位系的方法,其特征在于,包括:

a)確定大白菜-結球甘藍易位系中結球甘藍的基因片段區段;

獲得所述結球甘藍的基因片段區段及其側翼區域所有基因序列,以及大白菜中對應的共線性基因序列,并根據共線性基因序列的差異位點設計覆蓋差異位點區域的引物;

b)利用上述設計的引物分別對易位系親本大白菜和親本結球甘藍進行PCR擴增,根據擴增結果確定結球甘藍相對于大白菜特異的基因標記,所述基因標記滿足以下條件:結球甘藍有擴增產物但大白菜沒有擴增產物;或者二者均有擴增產物,但擴增條帶的位置不同;

c)利用上述基因標記,分別對易位系親本大白菜、親本結球甘藍和易位系自交后代進行PCR擴增,根據擴增結果獲得易位系的鑒定結果。

2.根據權利要求1所述的鑒定方法,其特征在于,所述步驟a)中,利用InDel標記法確定大白菜-結球甘藍易位系中結球甘藍的基因片段區段。

3.根據權利要求1所述的鑒定方法,其特征在于,所述大白菜-結球甘藍易位系為大白菜-結球甘藍易位系。

4.根據權利要求3所述的鑒定方法,其特征在于,所述步驟b)中,所述PCR擴增的條件為:

PCR反應總體系20μL,包含10×PCR Buffer(含Mg2+)2μL,2.5mmol/L dNTPs 1.6μL,1U Taqase 0.2μL,50ng/μL Forward primer 1μL,50ng/μL Reverse primer 1μL,50ng/μL模板DNA 1μL,滅菌雙蒸水13.2μL;

PCR擴增程序為:95℃預變性3min,95℃變性30s,57℃退火30s,72℃延伸1.5min,共計35個循環,72℃延伸10min,4℃保溫。

5.根據權利要求3所述的鑒定方法,其特征在于,所述步驟c)中,所述PCR擴增的條件為:

PCR反應總體系20μL,包含10×PCR Buffer(含Mg2+)2μL,2.5mmol/L dNTPs 1.6μL,1U Taqase 0.2μL,50ng/μL Forward primer 1μL,50ng/μL Reverse primer 1μL,50ng/μL模板DNA 1μL,滅菌雙蒸水13.2μL;

PCR擴增程序為:95℃預變性3min,95℃變性3s,57℃退火30s,72℃延伸1.5min,共計35個循環,72℃延伸10min,4℃保溫。

6.根據權利要求1~5任意一項所述的鑒定方法,其特征在于,所述基因標記選自SEQ ID No.1~100所示的基因序列中的一個或多個。

7.用于鑒定大白菜-結球甘藍易位系的基因標記,其特征在于,包括SEQ ID No.1~100所示的基因序列中的一個或多個。

8.權利要求7所述的基因標記在鑒定大白菜-結球甘藍易位系中的應用。

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