本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種對(duì)人體體表有保護(hù)作用的益生菌群及其制備方法。
背景技術(shù)：
與人體相關(guān)的微生物這群始終保持不斷變化的狀態(tài)。其中，常駐微生物區(qū)系的組成響應(yīng)于對(duì)宿主而言內(nèi)在和外在的因素而變化，也隨著時(shí)間變化。微生物在人體體內(nèi)和體表的定植一般開(kāi)始于出生后不久，人體益生菌是定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)等內(nèi)部管道，更定植于人體表面，能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱。人體和動(dòng)物體內(nèi)、體表有益的細(xì)菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、放線菌、酵母菌等。例如，通常存在于人類胃腸道的某些微生物提供的健康有益效果已被很好地研究。已有研究顯示：人體腸道及體表?xiàng)⒅鴶?shù)以億計(jì)的細(xì)菌，其種類多達(dá)400余種，鮮重可達(dá)數(shù)公斤！這當(dāng)中有對(duì)人有害的，有些則是有益的。有關(guān)宿主的健康狀態(tài)和宿主的胃腸道微生物組的健康狀態(tài)之間關(guān)系的知識(shí)，已產(chǎn)生了市場(chǎng)定位于改善或維持人類胃腸道微生物組中的一個(gè)或多個(gè)成員的健康狀態(tài)的多種可商購(gòu)獲得的產(chǎn)品。這些可商購(gòu)獲得的產(chǎn)品稱為益生菌。益生菌就是所謂的“好”微生物，其活著被人攝入，使得所引入的微生物能夠定植在此人的胃腸道中。當(dāng)人體住滿足夠的益生菌時(shí)，人就會(huì)處于健康的狀態(tài)，但是一旦體內(nèi)菌群失去平衡。比如，菌種間比例發(fā)生大幅變化或者超出正常數(shù)值時(shí)，那么腹瀉、胃口不佳、免疫力低等一系列病癥就會(huì)隨之而來(lái)，人體的健康就會(huì)亮紅燈。這時(shí)如果適當(dāng)服用一些含有益生菌的產(chǎn)品可以協(xié)助體內(nèi)菌群平衡。對(duì)于腸道和體內(nèi)益生菌，目前已經(jīng)有多種活菌和菌制劑，對(duì)于腸道保護(hù)和菌群恢復(fù)有明顯效果。
相對(duì)于人體體內(nèi)尤其是腸道微生物而言，人體體表微生物的研究和病原微生物預(yù)防措施還非常欠缺。但是，體表微生物的穩(wěn)定性往往比較差，容易受到不良環(huán)境的影響，如紫外線、螨蟲(chóng)侵害、殺菌液、肥皂和水沖洗等都會(huì)顯著改變體表微生物菌群的格局。同時(shí)體表接觸有害微生物的機(jī)會(huì)更高，風(fēng)險(xiǎn)更大。隨著城鎮(zhèn)人口密度的不斷增加，人與人，人與動(dòng)物（寵物）交叉接觸的機(jī)會(huì)也在不斷增加。因此，關(guān)注、保護(hù)和維護(hù)體表微生物菌群，尤其是補(bǔ)充利用益生菌更有必要，效果也將更顯著。
針對(duì)以上需求，本發(fā)明設(shè)計(jì)制作了用于人體體表的微生物益生菌群，提供一種功效多，效果好、存活率高的益生菌群的制備方法，適用于商業(yè)廣泛推廣，以填補(bǔ)目前市場(chǎng)空缺，并滿足對(duì)體表進(jìn)行保護(hù)日益增長(zhǎng)的需要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種功效多，效果好、成活率高的益生菌群適用于商業(yè)廣泛推廣。
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是，該益生菌群由芽孢桿菌、乳酸桿菌、酪酸梭菌、雙歧桿菌、糞鏈球菌、放線菌、酵母菌和光合細(xì)菌中的3種或3種以上的益生菌組成穩(wěn)定制劑。通過(guò)上述技術(shù)方案，采用三種或三種以上的益生菌混合制成的益生菌群相比單個(gè)益生菌，能夠產(chǎn)生協(xié)同作用，從而提高益生菌對(duì)人體的保健功效，治療多種病癥。
本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)在于，所述益生菌群通過(guò)單獨(dú)發(fā)酵與混合發(fā)酵相結(jié)合而制得。
本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)在于，所述放線菌采用單獨(dú)發(fā)酵，所述芽孢桿菌采用混合發(fā)酵。
本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)在于，所述益生菌群采用避光密封無(wú)氧保存，保存溫度為3~35℃。
本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)在于，所述益生菌群保存溫度為4~25℃。
本發(fā)明進(jìn)一步改進(jìn)在于，所述益生菌群為水劑或凍干粉。
本發(fā)明的益生菌群的應(yīng)用，制備用于治療腳氣、婦科病、性傳播疾病、皮炎病癥的產(chǎn)品。
本發(fā)明的益生菌群的應(yīng)用，所述皮炎病癥包括濕疹或瘙癢皮膚不適應(yīng)癥。
本發(fā)明的益生菌群的應(yīng)用，所述益生菌群為水劑時(shí)，在使用時(shí)，先將益生菌群稀釋5~500倍后，再采用浸泡或擦洗或涂抹或噴霧的方法使用；所述益生菌群為凍干粉時(shí)，在使用時(shí)，采用冷水溶解后再稀釋5~500倍，再采用浸泡或擦洗或涂抹或噴霧的方法使用；使用稀釋液直接對(duì)皮膚或發(fā)病部位進(jìn)行浸泡或涂抹或噴霧；用于腳氣時(shí)，在足療之后，接對(duì)腳部進(jìn)行浸泡或涂抹或噴霧。
本發(fā)明還要解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是，提供一種功效多，效果好、培養(yǎng)存活率高的益生菌群的制備方法，適用于商業(yè)廣泛推廣。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，該益生菌群粉的制備方法，具體步驟如下：
a、使用多層TPY 培養(yǎng)基劃線接種雙歧桿菌， 培養(yǎng)基pH值為6.8~7.2，37℃條件厭氧培養(yǎng)50h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成雙岐桿菌細(xì)菌懸液；使用多層MRS 培養(yǎng)基劃線接種乳酸桿菌種，培養(yǎng)基pH值為6.4~6.6，37℃條件厭氧培養(yǎng)30h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/1ml 懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成乳酸桿菌細(xì)菌懸液；使用高氏一號(hào)培養(yǎng)基劃線接種放線菌，培養(yǎng)基pH值為7.3~7.6，37℃條件厭氧培養(yǎng)48 h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成放線菌細(xì)菌懸液；使用YPD培養(yǎng)基劃線接種酵母菌，培養(yǎng)基pH值為5.3~5.5，37℃條件厭氧培養(yǎng)36 h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成酵母菌細(xì)菌懸液；使用THB培養(yǎng)基劃線接種糞鏈球菌，培養(yǎng)基pH值為7.5~7.9，37℃條件厭氧培養(yǎng)40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成糞鏈球菌細(xì)菌懸液；使用J-瓊脂培養(yǎng)基接種芽孢桿菌或酪酸梭菌，培養(yǎng)基pH值為7.5~7.9，37℃條件厭氧培養(yǎng)40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成芽孢桿菌或酪酸梭菌細(xì)菌懸液；
b、準(zhǔn)備水浴式冷凍干燥裝置，所述水浴式冷凍裝置包括可抽真空的殼體、設(shè)置在所述殼體內(nèi)部的鹽水池和懸于所述鹽水池上方并可自由升降的掛架，所述鹽水池內(nèi)盛放有飽和鹽水，所述鹽水池的外壁上蜿蜒附著有制冷劑管道，所述制冷制管道的兩端分別延伸到所述殼體的外部，所述位于殼體外部的管道上設(shè)置有壓縮機(jī)和散熱器；分別選取至少三種所述步驟（a）中所得到的細(xì)菌懸液均勻地分裝到至少三組安瓿瓶中，并將至少所述三組安瓿瓶分別掛到所述掛架上，將所述飽和鹽水的水溫降低并維持在-18℃，下降所述掛架至所述安瓿瓶?jī)?nèi)的細(xì)菌懸浮液的液面位于所述飽和鹽水的液面以下時(shí)止，并將所述盛放有細(xì)菌懸液的安瓿瓶浸在所述飽和鹽水中凍結(jié)3h ；
c、將所述鹽水池內(nèi)飽和鹽水排空，將所述殼體內(nèi)抽真空干燥，干燥壓力10Pa，干燥溫度25 ℃，分別收集干燥后益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比稱取至少三種益生菌粉，并混合均勻，得到混合益生菌群；
e、將混合益生菌群，加入三維混合機(jī)中，密封好混合罐，把混合速度調(diào)到20r/min，連續(xù)混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、將所述益生菌群粉成品通過(guò)自動(dòng)顆粒包裝機(jī)按預(yù)設(shè)重量分裝成袋，并置于低溫保存。
本發(fā)明還要解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是，提供一種功效多，效果好、培養(yǎng)存活率高的益生菌群水劑，適用于商業(yè)廣泛推廣。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，將包括1種芽孢桿菌、2種乳酸桿菌、1種雙歧桿菌、1種放線菌和2種光合細(xì)菌的復(fù)合菌制成益生菌群粉，將制得的益生菌群粉溶于水制成益生菌群水劑；保存溫度4-6℃，保質(zhì)期6個(gè)月；用于預(yù)防和治療包括濕疹或瘙癢的皮膚不適應(yīng)癥。
采用本發(fā)明的技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，其產(chǎn)生的有益效果是：采用三種或三種以上的益生菌混合制成的益生菌群相比單個(gè)益生菌，能夠產(chǎn)生協(xié)同作用，從而可以用于人類保健以及治療腳氣、婦科病、性傳播疾病和皮炎病癥等，制備益生菌群粉的方法工藝簡(jiǎn)單，可控性強(qiáng)，培養(yǎng)繁殖率及存活率高，適用于商業(yè)廣泛推廣。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1：選取芽孢桿菌、乳酸桿菌和酪酸梭菌為原料；
該益生菌群粉的制作方法，包括以下步驟：
a、使用多層MRS 培養(yǎng)基劃線接種乳酸桿菌種，培養(yǎng)基pH值為6.4，37℃條件厭氧培養(yǎng)30h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/1ml 懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成乳酸桿菌細(xì)菌懸液；使用J-瓊脂培養(yǎng)基接種芽孢桿菌或酪酸梭菌，培養(yǎng)基pH值為7.8，37℃條件厭氧培養(yǎng)40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成芽孢桿菌或酪酸梭菌細(xì)菌懸液；
b、準(zhǔn)備水浴式冷凍干燥裝置，所述水浴式冷凍裝置包括可抽真空的殼體、設(shè)置在所述殼體內(nèi)部的鹽水池和懸于所述鹽水池上方并可自由升降的掛架，所述鹽水池內(nèi)盛放有飽和鹽水，所述鹽水池的外壁上蜿蜒附著有制冷劑管道，所述制冷制管道的兩端分別延伸到所述殼體的外部，所述位于殼體外部的管道上設(shè)置有壓縮機(jī)和散熱器；分別將所述步驟（a）中所得到的乳酸桿菌和芽孢桿菌和酪酸梭菌細(xì)菌懸液均勻地分裝到三組安瓿瓶中，并將所述三組安瓿瓶分別掛到所述掛架上，將所述飽和鹽水的水溫降低并維持在-18℃，下降所述掛架至所述安瓿瓶?jī)?nèi)的細(xì)菌懸浮液的液面位于所述飽和鹽水的液面以下時(shí)止，并將所述盛放有細(xì)菌懸液的安瓿瓶浸在所述飽和鹽水中凍結(jié)3h ；
c、將所述鹽水池內(nèi)飽和鹽水排空，將所述殼體內(nèi)抽真空干燥，干燥壓力10Pa，干燥溫度25 ℃，分別收集干燥后的乳酸桿菌和芽孢桿菌和酪酸梭菌益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比稱取乳酸桿菌和芽孢桿菌和酪酸梭菌三種益生菌粉，并混合均勻，得到混合益生菌群；
e、將混合益生菌群，加入三維混合機(jī)中，密封好混合罐，把混合速度調(diào)到20r/min，連續(xù)混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、將所述益生菌群粉成品通過(guò)自動(dòng)顆粒包裝機(jī)按預(yù)設(shè)重量分裝成袋；并置于低溫保存。
實(shí)施例2：選取芽孢桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌為原料；
該益生菌群粉的制作方法，包括以下步驟：
a、使用多層TPY 培養(yǎng)基劃線接種雙歧桿菌，培養(yǎng)基pH值為7.0，37℃條件厭氧培養(yǎng)50h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成雙岐桿菌細(xì)菌懸液；使用多層MRS 培養(yǎng)基劃線接種乳酸桿菌種，培養(yǎng)基pH值為6.4，37℃條件厭氧培養(yǎng)30h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/1ml 懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成乳酸桿菌細(xì)菌懸液；使用J-瓊脂培養(yǎng)基接種芽孢桿菌，培養(yǎng)基pH值為7.8，37℃條件厭氧培養(yǎng)40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成芽孢桿菌細(xì)菌懸液；
b、準(zhǔn)備水浴式冷凍干燥裝置，所述水浴式冷凍裝置包括可抽真空的殼體、設(shè)置在所述殼體內(nèi)部的鹽水池和懸于所述鹽水池上方并可自由升降的掛架，所述鹽水池內(nèi)盛放有飽和鹽水，所述鹽水池的外壁上蜿蜒附著有制冷劑管道，所述制冷制管道的兩端分別延伸到所述殼體的外部，所述位于殼體外部的管道上設(shè)置有壓縮機(jī)和散熱器；分別將所述步驟（a）中所得到的芽孢桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌細(xì)菌懸液均勻地分裝到三組安瓿瓶中，并將所述三組安瓿瓶分別掛到所述掛架上，將所述飽和鹽水的水溫降低并維持在-18℃，下降所述掛架至所述安瓿瓶?jī)?nèi)的細(xì)菌懸浮液的液面位于所述飽和鹽水的液面以下時(shí)止，并將所述盛放有細(xì)菌懸液的安瓿瓶浸在所述飽和鹽水中凍結(jié)3h ；
c、將所述鹽水池內(nèi)飽和鹽水排空，將所述殼體內(nèi)抽真空干燥，干燥壓力10Pa，干燥溫度25 ℃，分別收集干燥后芽孢桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比稱取芽孢桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌三種益生菌粉，并混合均勻，得到混合益生菌群；
e、將混合益生菌群，加入三維混合機(jī)中，密封好混合罐，把混合速度調(diào)到20r/min，連續(xù)混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、將所述益生菌群粉成品通過(guò)自動(dòng)顆粒包裝機(jī)按預(yù)設(shè)重量分裝成袋；并置于低溫保存。
實(shí)施例3：選取雙歧桿菌、糞鏈球菌、有益放線菌和有益酵母菌為原料；
該益生菌群粉的制作方法，包括以下步驟：
a、使用多層TPY 培養(yǎng)基劃線接種雙歧桿菌， 培養(yǎng)基pH值為7.0，37℃條件厭氧培養(yǎng)50h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成雙岐桿菌細(xì)菌懸液；使用高氏一號(hào)培養(yǎng)基劃線接種放線菌，培養(yǎng)基pH值為7.4，37℃條件厭氧培養(yǎng)48 h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成放線菌細(xì)菌懸液；使用YPD培養(yǎng)基劃線接種酵母菌，培養(yǎng)基pH值為5.4，37℃條件厭氧培養(yǎng)36 h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成酵母菌細(xì)菌懸液；使用THB培養(yǎng)基劃線接種糞鏈球菌，培養(yǎng)基pH值為7.8，37℃條件厭氧培養(yǎng)40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成糞鏈球菌細(xì)菌懸液；
b、準(zhǔn)備水浴式冷凍干燥裝置，所述水浴式冷凍裝置包括可抽真空的殼體、設(shè)置在所述殼體內(nèi)部的鹽水池和懸于所述鹽水池上方并可自由升降的掛架，所述鹽水池內(nèi)盛放有飽和鹽水，所述鹽水池的外壁上蜿蜒附著有制冷劑管道，所述制冷制管道的兩端分別延伸到所述殼體的外部，所述位于殼體外部的管道上設(shè)置有壓縮機(jī)和散熱器；分別將所述步驟（a）中所得到的四種細(xì)菌懸液均勻地分裝到四組安瓿瓶中，并將所述四組安瓿瓶分別掛到所述掛架上，將所述飽和鹽水的水溫降低并維持在-18℃，下降所述掛架至所述安瓿瓶?jī)?nèi)的細(xì)菌懸浮液的液面位于所述飽和鹽水的液面以下時(shí)止，并將所述盛放有細(xì)菌懸液的安瓿瓶浸在所述飽和鹽水中凍結(jié)3h ；
c、將所述鹽水池內(nèi)飽和鹽水排空，將所述殼體內(nèi)抽真空干燥，干燥壓力10Pa，干燥溫度25 ℃，分別收集干燥后益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比稱取四種益生菌粉，并混合均勻，得到混合益生菌群；
e、將混合益生菌群，加入三維混合機(jī)中，密封好混合罐，把混合速度調(diào)到20r/min，連續(xù)混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、將所述益生菌群粉成品通過(guò)自動(dòng)顆粒包裝機(jī)按預(yù)設(shè)重量分裝成袋；并置于低溫保存。
實(shí)施例4：選取乳酸桿菌、雙歧桿菌、糞鏈球菌和有益放線菌為原料；
該益生菌群粉的制作方法，包括以下步驟：
a、使用多層TPY 培養(yǎng)基劃線接種雙歧桿菌， 培養(yǎng)基pH值為7.0，37℃條件厭氧培養(yǎng)50h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成雙岐桿菌細(xì)菌懸液；使用多層MRS 培養(yǎng)基劃線接種乳酸桿菌種，培養(yǎng)基pH值為6.4，37℃條件厭氧培養(yǎng)30h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/1ml 懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成乳酸桿菌細(xì)菌懸液；使用高氏一號(hào)培養(yǎng)基劃線接種放線菌，培養(yǎng)基pH值為7.4，37℃條件厭氧培養(yǎng)48 h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成放線菌細(xì)菌懸液；使用THB培養(yǎng)基劃線接種糞鏈球菌，培養(yǎng)基pH值為7.8，37℃條件厭氧培養(yǎng)40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成糞鏈球菌細(xì)菌懸液；
b、準(zhǔn)備水浴式冷凍干燥裝置，所述水浴式冷凍裝置包括可抽真空的殼體、設(shè)置在所述殼體內(nèi)部的鹽水池和懸于所述鹽水池上方并可自由升降的掛架，所述鹽水池內(nèi)盛放有飽和鹽水，所述鹽水池的外壁上蜿蜒附著有制冷劑管道，所述制冷制管道的兩端分別延伸到所述殼體的外部，所述位于殼體外部的管道上設(shè)置有壓縮機(jī)和散熱器；分別將所述步驟（a）中所得到的四種細(xì)菌懸液均勻地分裝到四組安瓿瓶中，并將所述四組安瓿瓶分別掛到所述掛架上，將所述飽和鹽水的水溫降低并維持在-18℃，下降所述掛架至所述安瓿瓶?jī)?nèi)的細(xì)菌懸浮液的液面位于所述飽和鹽水的液面以下時(shí)止，并將所述盛放有細(xì)菌懸液的安瓿瓶浸在所述飽和鹽水中凍結(jié)3h ；
c、將所述鹽水池內(nèi)飽和鹽水排空，將所述殼體內(nèi)抽真空干燥，干燥壓力10Pa，干燥溫度25 ℃，分別收集干燥后的四種益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比稱取四種益生菌粉，并混合均勻，得到混合益生菌群；
e、將混合益生菌群，加入三維混合機(jī)中，密封好混合罐，把混合速度調(diào)到20r/min，連續(xù)混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、將所述益生菌群粉成品通過(guò)自動(dòng)顆粒包裝機(jī)按預(yù)設(shè)重量分裝成袋；并置于低溫保存。
實(shí)施例5：選取乳酸桿菌、酪酸梭菌、雙歧桿菌、糞鏈球菌和有益酵母菌為原料；
該益生菌群粉的制作方法，包括以下步驟：
a、使用多層TPY 培養(yǎng)基劃線接種雙歧桿菌， 培養(yǎng)基pH值為7.0，37℃條件厭氧培養(yǎng)50h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成雙岐桿菌細(xì)菌懸液；使用多層MRS 培養(yǎng)基劃線接種乳酸桿菌種，培養(yǎng)基pH值為6.4，37℃條件厭氧培養(yǎng)30h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/1ml 懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成乳酸桿菌細(xì)菌懸液；使用YPD培養(yǎng)基劃線接種酵母菌，培養(yǎng)基pH值為5.4，37℃條件厭氧培養(yǎng)36 h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成酵母菌細(xì)菌懸液；使用THB培養(yǎng)基劃線接種糞鏈球菌，培養(yǎng)基pH值為7.8，37℃條件厭氧培養(yǎng)40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成糞鏈球菌細(xì)菌懸液；使用J-瓊脂培養(yǎng)基接種酪酸梭菌，培養(yǎng)基pH值為7.8，37℃條件厭氧培養(yǎng)40h，取出在3℃條件下5000r/min 離心25min 收集菌體，并將離心收集的菌體以0.15g/ml懸浮于滅菌后的生理鹽水中制成酪酸梭菌細(xì)菌懸液；
b、準(zhǔn)備水浴式冷凍干燥裝置，所述水浴式冷凍裝置包括可抽真空的殼體、設(shè)置在所述殼體內(nèi)部的鹽水池和懸于所述鹽水池上方并可自由升降的掛架，所述鹽水池內(nèi)盛放有飽和鹽水，所述鹽水池的外壁上蜿蜒附著有制冷劑管道，所述制冷制管道的兩端分別延伸到所述殼體的外部，所述位于殼體外部的管道上設(shè)置有壓縮機(jī)和散熱器；分別將所述步驟（a）中所得到的五種細(xì)菌懸液均勻地分裝到五組安瓿瓶中，并將所述五組安瓿瓶分別掛到所述掛架上，將所述飽和鹽水的水溫降低并維持在-18℃，下降所述掛架至所述安瓿瓶?jī)?nèi)的細(xì)菌懸浮液的液面位于所述飽和鹽水的液面以下時(shí)止，并將所述盛放有細(xì)菌懸液的安瓿瓶浸在所述飽和鹽水中凍結(jié)3h ；
c、將所述鹽水池內(nèi)飽和鹽水排空，將所述殼體內(nèi)抽真空干燥，干燥壓力10Pa，干燥溫度25 ℃，分別收集干燥后的五種益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比稱取五種益生菌粉，并混合均勻，得到混合益生菌群；
e、將混合益生菌群，加入三維混合機(jī)中，密封好混合罐，把混合速度調(diào)到20r/min，連續(xù)混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、將所述益生菌群粉成品通過(guò)自動(dòng)顆粒包裝機(jī)按預(yù)設(shè)重量分裝成袋并置于低溫保存。
實(shí)施例6.
一種益生菌群水劑，將包括1種芽孢桿菌、2種乳酸桿菌、1種雙歧桿菌、1種放線菌和2種光合細(xì)菌的復(fù)合菌制成益生菌群粉，將制得的益生菌群粉溶于水制成益生菌群水劑；保存溫度4-6℃，保質(zhì)期為6個(gè)月；用于預(yù)防和治療包括濕疹或瘙癢的皮膚不適應(yīng)癥，使用時(shí)將益生菌群水劑直接涂抹在患處或用棉紗布濕敷于患處保持5分鐘以上。
最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個(gè)具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。