專利名稱：一種奧硝唑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物制劑的質量控制方法，具體涉及一種奧硝唑注射液的質量控制方法。
背景技術：
奧硝唑是第三代硝基咪唑類衍生物，奧硝唑臨床用途廣泛，可用于治療由脆弱擬桿菌、狄氏擬桿菌、卵園擬桿菌、多形擬桿菌、普通擬桿菌、梭狀芽胞桿菌、真桿菌、消化球菌和消化鏈球菌、幽門螺桿菌、黑色素擬桿菌、梭桿菌、C02噬織維菌、牙齦類桿菌等敏感厭氧菌所引起的多種感染性疾病。奧硝唑結構為1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑，奧硝唑在加熱或強光照射條件下，化學結構會發生變化會生成其它雜質，其中2-甲基-5-硝基咪唑為奧硝唑注射液中的雜質成分之一，而奧硝唑注射液在滅菌的過程中必須對其進行高溫滅菌，為了嚴格控制好奧硝唑的質量，必須制定奧硝唑的質量檢測方法，但是現有的檢測方法，分離效果不好，檢測靈敏度不高，穩定性差，尤其是不能同時檢測活性成分奧硝唑和雜質如2-甲基-5-硝基咪唑的含量。因此為了控制好奧硝唑制劑的臨床安全性，維護患者的利益，很有必要在現有技術的基礎之上研究設計出能同時檢測奧硝唑制劑中有效成分奧硝唑和雜質2-甲基-5-硝基咪唑的檢測方法。

發明內容
發明目的本發明的目的是解決現有技術的不足，提供一種能同時檢測奧硝唑制劑中有效成分奧硝唑和雜質2-甲基-5-硝基咪唑的檢測方法，該檢測方法可以客觀、全面、準確的評價奧硝唑的質量，對控制奧硝唑注射劑的質量和保證療效具有重要意義。技術方案為了實現以上目的，本發明所提供的奧硝唑的質量控制方法，包括以下步驟(1)標準品的制備取奧硝唑標準品50毫克，用體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為500 μ g/ml奧硝唑標準品的溶液，另取2-甲基-5-硝基咪唑標準品25毫克，用體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為250μ g/ml的2-甲基-5-硝基咪唑標準品溶液，然后將奧硝唑標準品和2-甲基-5-硝基咪唑標準品按體積比為1 1混合得到混合標準品，備用；(2)奧硝唑樣品的制備精密取奧硝唑注射液在120°C條件下加熱3小時至6小時，放冷，備用；(3)標準曲線的制備取步驟(1)得到的混合標準品注入高效液相色譜儀制備標準曲線，色譜條件為色譜柱反相Cw柱，流動相體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min，檢測波長為310nm，柱溫為30°C(4)樣品中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量測定精密吸取奧硝唑注射液樣品20 μ 1，注入高效液相色譜儀分析40分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動相體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min,檢測波長為310nm，柱溫為30°C，并按步驟(3)標準曲線檢測奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量。作為優選方案，本發明提供的奧硝唑的質量控制方法，步驟(3)以奧硝唑的峰面積為縱坐標，濃度(μ g/ml)為橫坐標繪制標準曲線為Y = 6528Χ-42. 71，r = 0. 9997 ；，以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面積為縱坐標，濃度(μ g/ml)為橫坐標繪制標準曲線為Y =8319Χ-155. 8，r = 0. 9999。作為優選方案，本發明所述的奧硝唑的質量控制方法，步驟(2)奧硝唑樣品制備過程中在120°C條件下加熱4小時。作為優選方案，本發明所述的奧硝唑的質量控制方法，步驟(3)和(4)所述的反相C18柱為安捷倫hrbax Extend反相C18柱。作為優選方案，本發明所述的奧硝唑的質量控制方法，步驟C3)和(4)所述的高效液相色譜儀為安捷倫1260分析儀或島津高效液相色譜儀。奧硝唑結構為1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑，奧硝唑在加熱或強光照射條件下，化學結構會發生變化會生成其它雜質，其中2-甲基-5-硝基咪唑為奧硝唑注射液中的雜質成分之一，為了嚴格控制好奧硝唑的質量，能高效的同時檢測奧硝唑注射液中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量，本發明經過大量實驗對流動相組成、流動相的洗脫程序、流速、檢測波長及色譜柱進行篩選。1、本發明針對以上2個成分，通過全波長掃描和3D等高線觀察，確定蒽奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑在310nm處均有較大的吸收，因此本發明采用310nm作為檢測波長，可以準確靈敏的檢測到奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物。2、由于以上1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基_5_硝基咪唑和2_甲基_5_硝基咪唑化合物的極性存在較大的相似，因此在色譜柱上同時分離比較困難，本發明首先對流動相的組成進行了大量篩選，確定采用體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸作為流動相組成，由于二個化合物容易電離成離子狀態，導致分離和洗脫效果差，因此本發明在流動相中添加一定量的冰醋酸調節PH值，但是流動相的酸性太強，又會導致化合物溶解性差，甚至會沉淀堵塞色譜柱，因此調整流動相到合適的PH值非常重要，本發明通過不同冰醋酸加入量的篩選，確定最佳的流動相，從而可以保證在色譜柱上達到很好的分離效果，不會出現峰重疊或拖尾現象，而且能保證極性相似的二個化合物在色譜柱上有很好的分離度。3、同時本發明還對流動相的流動速度進行了考察，如流速過快，分離度不夠理想，因此本發明分別考察了 lmL/min、0. 8mL/min、0. 6mL/min、0. 5mL/min、0. 4mL/min 不同流速，實驗結果表明，當流動相的流速為lmL/min時，1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑和2-甲基-5-硝基咪唑的峰形最好、分離度最好，理論塔板數最高，因此本發明采用流動相的流速為lmL/min。4、同時本發明對色譜柱的柱溫進行了篩選，考察了色譜柱在20 V、25 °C、28 V、30°C和35°C條件下化合物的分離效果，實驗結果表明，色譜柱在30°C條件下分離效果最好，分離重復性和穩定性最好。因此本發明采用色譜柱的柱溫為30°C。5、同時本發明對色譜柱也進行了篩選，分別考察了安捷倫(Agilent)反相C18、反相C8柱，Waters反相C18、反相C8柱，實驗結果表明，以安捷倫(Agilent)反相C18柱的分離效果最好。因此，本發明以安捷倫(Agilent)反相C18柱作為分析柱。有益效果本發明提供的奧硝唑的質量控制方法和現有技術相比具有以下優點
本發明根據奧硝唑注射劑中活性成分和雜質成分的結構性質特點，通過大量實驗篩選出最佳的流動相組成，洗脫程序、流速，檢測波長、色譜柱等分析條件，經多次實驗驗證表明，本發明提供的奧硝唑的質量控制方法可以在線同時檢測活性成分和雜質，因此具有很高的分析效率，可以克服現有檢測方法中準確度低、穩定性差，不能同時檢測二個成分等諸多缺點，且本發明提供的質量檢測方法穩定性好、對各分析成分的分離度好，可以靈敏準確的定性、定量檢測分析各化合物。因此，本發明提供的奧硝唑的質量控制方法可以可以客觀、全面、準確的評價奧硝唑注射劑的質量，對控制奧硝唑注射劑的質量和保證臨床療效具有重要意義。


圖1為奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑混合標準品的高效液相色譜檢測分析圖。圖2為奧硝唑注射劑樣品的高效液相色譜檢測分析圖。
具體實施例方式下面結合具體實施例進一步闡明本發明，應理解這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍，在閱讀了本發明之后，本領域技術人員對本發明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權利要求所限定的范圍。實施列奧硝唑的質量控制方法，包括以下步驟(1)標準品的制備取奧硝唑標準品50毫克，用體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為500 μ g/ml奧硝唑標準品的溶液，另取2-甲基-5-硝基咪唑標準品25毫克，用體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為250μ g/ml的2-甲基-5-硝基咪唑標準品溶液，然后將奧硝唑標準品和2-甲基-5-硝基咪唑標準品按體積比為1 1混合得到混合標準品，備用；(2)奧硝唑樣品的制備精密取揚子江藥業集團南京海陵藥業有限公司生產的奧硝唑注射液 5 批(1110191、1110151、1109072、1109211、1117311)在 120°C條件下加熱 3 小時，放冷，備用；(3)標準曲線的制備取步驟(1)得到的混合標準品，用0.45 μ m微孔濾膜過濾后注入高效液相色譜儀制備標準曲線，色譜條件為色譜柱反相Cw柱，流動相體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min,檢測波長為310nm，柱溫為30°C(4)樣品中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量測定精密吸取步驟(2)奧硝唑注射液樣品20 μ 1，注入高效液相色譜儀分析40分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動相體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min，檢測波長為310nm，柱溫為30°C，并按步驟(3)標準曲線檢測奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量，具體實驗結果如表1和表2所示。以上所述的奧硝唑的質量控制方法，步驟(3)以步驟(3)以奧硝唑的峰面積為縱坐標，濃度(μ g/ml)為橫坐標繪制標準曲線為=Y = 6528X-42. 71，r = 0. 9997 ；以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面積為縱坐標，濃度(μ g/ml)為橫坐標繪制標準曲線為:Y = 8319Χ-155. 8, r = 0. 9999。通過以上分析，有效成分奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物在本發明提供的分析條件下，能夠很好的達到分離，分離度均達到1.5以上，各化合物的標準曲線的線性關系良好，r值均達到0.999以上。因此本發明提供的分析方法，準確可靠，可以靈敏準確的定性、定量檢測奧硝唑注射液，為奧硝唑注射液的質量控制提供科學依據。表1奧硝唑注射劑中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物的檢測結果
化合物保留時間(min)混合標液批號 1110191批號 1110151批號 1109072批號 1109211批號 1117311奧硝唑7.4937.4937.4977.4927.4937.4932_甲基_5-石肖基咪唑3.6833.6843.6933.6973.6913.689表2奧硝唑注射劑中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物的檢測結果
化合物峰面積混合標液批號 1110191批號 1110151批號 1109072批號 1109211批號 1117311奧硝唑17635813 8861857786185738618575861857586185752_甲基_5-石肖基咪唑29045892071122932217612291421263由表1和表2的實驗結果表明，本發明提供的奧硝唑注射劑的檢測方法，可以同時檢測到5批奧硝唑注射劑中奧硝唑化合物和2-甲基-5-硝基咪唑類化合物，且具有較好的分離度，從保留時間看出，各化合物和對照品具有很好的匹配度；并且從本發明表2的實驗結果表明，本發明處理過的奧硝唑樣品中，雜質2-甲基-5-硝基咪唑的百分含量均低于0.2%，也表明本發明樣品的質量可靠性。且以上實驗結果表明，本發明提供的檢測方法只要進一針樣品即可定性和定量檢測到活性成分和是否有雜質成分，相比現有技術具有方便、快捷、工作效率高的優點，且對控制和全面評價奧硝唑注射劑質量具有很好的應用價值。另外本發明提供的奧硝唑的質量控制方法穩定性和重復性好，可以客觀、全面、準確的評價奧硝唑注射劑的質量，對控制奧硝唑注射劑的質量和保證臨床療效具有重要意義。以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。
權利要求
1.一種奧硝唑的質量控制方法，其特征在于，包括以下步驟(1)標準品的制備取奧硝唑標準品50毫克，用體積比為3070 0. 2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為50(^g/ml奧硝唑標準品的溶液，另取2-甲基_5_硝基咪唑標準品25毫克，用體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為25(^g/ml的2-甲基-5-硝基咪唑標準品溶液，然后將奧硝唑標準品和2-甲基-5-硝基咪唑標準品按體積比為1 :1混合得到混合標準品，備用；(2)奧硝唑樣品的制備精密取奧硝唑注射液在120°C條件下加熱3小時至6小時，放冷，備用；(3)標準曲線的制備取步驟(1)得到的混合標準品注入高效液相色譜儀制備標準曲線，色譜條件為色譜柱反相Cw柱，流動相體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min，檢測波長為310nm，柱溫為30°C ；(4)樣品中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量測定精密吸取步驟(2)奧硝唑注射液樣品20μ 1，注入高效液相色譜儀分析40分鐘，色譜條件為色譜柱反相Q8柱，流動相體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min，檢測波長為310nm，柱溫為30°C，并按步驟(3)標準曲線檢測奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量。
2.根據權利要求1所述的奧硝唑的質量控制方法，其特征在于，步驟(3)中以奧硝唑的峰面積為縱坐標，濃度μ g/ml為橫坐標繪制標準曲線為Y = 6528Χ 一 42. 71，r=0. 9997 ；，以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面積為縱坐標，濃度μ g/ml為橫坐標繪制標準曲線為Y =8319Χ — 155. 8，r=0. 9999。
3.根據權利要求1所述的奧硝唑的質量控制方法，其特征在于，步驟(2)奧硝唑樣品制備過程中在120°C條件下加熱4小時。
4.根據權利要求1所述的奧硝唑的質量控制方法，其特征在于，步驟(3)和⑷所述的反相Cw柱為安捷倫hrbax Extend反相Cw柱。
全文摘要
本發明公開了一種奧硝唑的質量控制方法，該方法采用高效液相色譜法同時在線檢測奧硝唑和雜質成分2-甲基-5-硝基咪唑。本發明通過大量實驗優選出最佳的流動相組成，洗脫程序、流速，檢測波長和色譜柱等分析條件，經多次實驗驗證表明，本發明提供的奧硝唑的質量控制方法，穩定性和重復性好、分析效率高、分離度好，可以靈敏準確的定性、定量檢測各化合物，從而可以客觀、全面、準確的評價奧硝唑注射劑的質量，對控制奧硝唑注射劑的質量和保證臨床療效具有重要意義。
文檔編號G01N30/89GK102565271SQ20121000468
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月10日 優先權日2012年1月10日
發明者王麗楠, 肖鑫, 顧林 申請人:揚子江藥業集團南京海陵藥業有限公司