專利名稱：四君子湯的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及中藥制劑質量控制領域，具體涉及ー種四君子湯的質量控制方法。
背景技術：
四君子湯來源于《太平惠民合劑局方》，用于治療脾胃氣虛證，是治療脾胃氣虛證的基本方，后世眾多補脾益氣方劑多從此方衍化而來。方中以人參為君，甘溫益氣，健脾養胃。白木苦溫，健脾燥濕，加強益氣助運之力，為臣藥。茯苓甘淡，健脾滲濕，為佐藥；苓、木合用則健脾祛濕之功更著。炙甘草甘溫，益氣和中，調和諸藥，用為佐使。綜觀全方，參、木、草三味均為甘溫壅滯之品，有阻礙中焦氣機之弊，配茯苓滲濕利竅，具有補中有瀉，補而不滯之效。本方為治療脾胃虛弱的基礎方。方中四味藥物皆平和之品，不偏不盛，不熱不燥，補而不峻，益而無害，取迸語“君子致中和”之義，故名“四君子湯”。四君子湯是一首益氣健 脾的方劑，其藥物組成:人參、白木、茯苓各9克，炙甘草6克。中藥湯劑是中醫藥臨床中歷史悠久應用廣泛的ー種劑型，其療效與其煎煮質量密切相關通過嚴格的質量控制，采用科學的煎藥方法，才能保證藥物有效成份的充分獲得，防止藥效流失，使中藥在臨床中的療效得以充分發揮，所以湯劑質量的控制是臨床用藥的重要保障。四君子湯由于缺少好的質量控制方法，難以保證其臨床療效的穩定性。本發明針對現有技術的不足，采用新的手段對四君子湯的質量進行控制，特別是采用雙波長高效液相色譜法同時測定該方中人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl和甘草酸四種指標性成分的含量，解決了四君子湯質量控制的難題，本發明針對四君子湯提供了ー種使用的質量控制方法。

發明內容
解決的技術問題本發明提供了ー種四君子湯的質量控制方法，該方法利用高效液相色譜法測定湯劑中人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl和甘草酸四種主要指標性成分的含量作為標準，提高后的質量標準能更好地控制藥品的質量，本發明的質量控制方法，具有較強的專屬性和良好的重現性，真正體現藥品安全有效、質量可控。技術方案四君子湯的質量控制方法，利用高效液相色譜法同時測人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl及甘草酸的含量，上述四種成分的含量測定方法為色譜條件色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流動相こ腈-O. 03%wt甲酸溶液；流速0. 9mL/min ;柱溫30°C ;進樣量20μ L，雙波長檢測202nm，250nm ;梯度洗脫程序0 14min, 19%wt こ臆；14 15min, 20. 7%wt こ臆；15 28min, 20. 7%wt こ臆；28 33min, 29%wt こ臆；33 47min, 41%wt こ臆；47 52min, 41%wt こ臆；對照品溶液的制備分別精密稱取人參皂苷Re、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、甘草酸銨對照品，加甲醇溶解，制成人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、人參皂苷Rgl濃度分別為O. 6 O. 8mg/mL、0. 2 O. 25mg/mL、0. 3 O. 4mg/mL的混合標準溶液以及濃度為O. 8 I. Omg/mL的甘早Ife按對照品溶液；
供試品溶液的制備稱取ー劑量的四君子湯，每劑四君子湯組成為人參9克，茯苓9克，白術9克，炙甘草6克，加10倍量的水，浸泡30分鐘，煎煮2次，每次煎煮60min，合并兩次藥液，濃縮至250mL ;精密量取50mL四君子湯藥液，置分液漏斗中，用正丁醇萃取三次，毎次50mL ;合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容至IOmL量瓶中，作為供試品溶液；含量測定精密吸取對照品及供試品溶液20μ L，注入液相色譜儀，測定四君子湯中人參皂苷Re、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、甘草酸含量，不少于設定值，所述設定值中人參皂苷Re、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb I，甘草酸以甘草酸銨含量計，分別為12. Omg, 10. Omg,18. Omg, 28. Omg0有益效果本發明對四君子湯建立了質量控制方法，該方法提供了利用高效液相色譜法雙波長下同時測定湯劑中人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl和甘草酸四種主要指標性成分含量的質量控制方法，該質量標準簡便，且能更好地控制藥品的質量。本發明的質量控制方法，具有較強的專屬性和良好的重現性，真正體現藥品安全有效、質量可控。


圖I為四君子湯供試品溶液高效液相色譜(HPLC)圖，其中a為四君子湯供試品溶液202nm波長下的HPLC圖；b為四君子湯供試品溶液250nm波長下的HPLC圖。圖2對照品溶液HPLC圖，其中a為人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl對照品溶液在202nm波長下的HPLC圖；b為甘草酸對照品溶液250nm波長下的HPLC圖。圖3四君子湯陰性對照HPLC圖，其中a為四君子湯供試品溶液202nm波長下人參陰性對照的HPLC圖；b為四君子湯供試品溶液250nm波長下甘草陰性對照的HPLC圖。圖4為對照品溶液標準曲線圖，其中a為人參皂苷Rgl線性關系圖，b為人參皂苷Re線性關系圖，c為人參皂苷Rbl線性關系圖，d為甘草酸銨線性關系圖。圖5九份四君子湯樣品中各指標性成分的含量，其中a為人參皂苷Rgl含量圖，b為人參皂苷Re含量圖，c為人參皂苷Rbl含量圖，d為甘草酸含量圖。
具體實施例方式結合具體實施方式
，對本發明進ー步說明如下實施例I :四成分同時測定的含量測定方法為藥材、儀器與試劑四君子湯方中的人參(Panax ginseng C. A. Mey.;吉林產，批號110710)、白術(Atractylodes macrocephala Koidz.;浙江產，批號 110306)、獲茶(Poria cocos (Schw.)Wolf ;安徽產,批號 110513)、炎甘草(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Praeparata cumMelle ;內蒙古產，批號110519)四種飲片均購自南京海源中藥飲片有限公司。Waters2695高效液相色譜儀；Waters2589檢測器；UNIQUE_S15超純水發生器；BP211D電子天平(德國Sartorius公司)；KQ_500DE型醫用數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。人參皂苷Rgl對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110703-201027)，人參皂苷Re對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110754-200822 )，人參皂苷Rb I對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110704-200921 )，甘早酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110731-200614)。こ腈(美國天地試劑公司，色譜純，純度き99. 9%，批號1102374)，其余試劑為分析純。方法與結果 測定波長的選擇分別精密稱取人參皂苷Re、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、甘草酸銨對照品適量，加甲醇溶解，制成人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、人參皂苷Rgl濃度分別為O. 7995mg/mL、O. 342mg/mL、0. 3805mg/mL的混合標準溶液以及濃度為O. 8224mg/mL的甘草酸銨對照品溶液，在200 400nm波長范圍掃描，測得三種人參皂苷和甘草酸的最大吸收波長λ max分別為 202nm 和 250nm。色譜條件色譜柱BDSHYPERS IL C18 (250 X 4. 6mm, 5um), thermo scientific ;流動相:こ腈-O. 03%wt甲酸溶液(溶液中甲酸的濃度為O. 03%wt，溶劑為水)，梯度洗脫程序0 14min, 19%wt 乙臆；14 15min, 20. 7%wt 乙臆；15 28min, 20. 7%wt 乙臆；28 33min,29%wt こ月青；33 47min, 41%wt こ月青；47 52min, 41%wt こ月青；流速0. QmT ,/mi η ;柱溫:300C ;進樣量20μし雙波長檢測202nm，250nm。采樣時間52min ；對照品溶液的制備分別精密稱取13. 68mg人參皂苷Re，15. 22mg人參皂苷Rgl，15. 99mg人參皂苷Rbl, 5. 14mg甘草酸銨對照品，分別置10mL，IOmL, 5mL, 5mL量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，得I. 368mg/mL人參皂苷Re對照品儲備溶液，I. 522mg/mL人參皂苷Rgl對照品儲備溶液，3. 198mg/mL人參皂苷Rbl對照品儲備溶液和I. 028mg/mL甘草酸銨對照品儲備溶液。供試品溶液的制備稱取一劑量的四君子湯，姆劑四君子湯組成為人參9克,獲茶9克，白術9克,炎甘草6克，加10倍量的水，浸泡30分鐘，煎煮2次，每次煎煮60min，合并兩次藥液，濃縮至250mL。精密量取50mL四君子湯藥液，置分液漏斗中，用正丁醇萃取三次，每次50mL。合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇適量分次溶解，移置IOmL量瓶中，加甲醇至刻度，作為供試品溶液。線性關系考察每份儲備液分別精密吸取5、10、20、30、40 μ L，注入高效液相色譜儀，測定，以對照品的量(μ g)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，結果所得的峰面積A與對照品進樣量m ( μ g)進行線性回歸，各對照品的回歸方程見表1，各個對照品的線性關系考察結果圖4。表I各對照品線性回歸方程及其線性范圍
対照品回歸方程線性范圍(μ g) \~R2
人參皂苷 Rgl y=423317x-106189I. 522 12. 176O. 9999
權利要求
1.四君子湯的質量控制方法，其特征在于高效液相色譜法同時測人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl及甘草酸的含量，上述四種成分的含量測定方法為 色譜條件色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流動相こ腈-O. 03%wt甲酸溶液；流速0. 9mL/min ;柱溫30°C ;進樣量20μ L，雙波長檢測202nm，250nm ;梯度洗脫程序O 14 min，19%wt こ臆；14 15 min, 20. 7%wt こ臆；15 28 min, 20. 7%wt こ臆；28 .33 min, 29%wt こ臆；33 47 min, 41%wt こ臆；47 52 min, 41%wt こ臆； 對照品溶液的制備分別精密稱取人參皂苷Re、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、甘草酸銨對照品，加甲醇溶解，制成人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、人參皂苷Rgl濃度分別為O. 6^0. 8mg/mL、0. 2 O. 25 mg/mL、0. 3 O. 4mg/mL的混合標準溶液以及濃度為O. 8 I. O mg/mL的甘草Ife按對照品溶液； 供試品溶液的制備稱取ー劑量的四君子湯，每劑四君子湯組成為人參9克，茯苓9克，白術9克，炙甘草6克，加10倍量的水，浸泡30分鐘，煎煮2次，每次煎煮60min，合并兩次藥液，濃縮至250mL ;精密量取50mL四君子湯藥液，置分液漏斗中，用正丁醇萃取三次，每次50mL ;合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容至10 mL量瓶中，作為供試品溶液； 含量測定精密吸取對照品及供試品溶液20 μ L，注入液相色譜儀，測定四君子湯中人參皂苷Re、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、甘草酸含量，不少于設定值，所述設定值中人參皂苷Re、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl，甘草酸以甘草酸銨含量計，分別為12.0 mg, 10. O mg,.18. O mg, 28. O mg。
全文摘要
四君子湯的質量控制方法，利用高效液相色譜法同時測人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1及甘草酸的含量，上述四種成分的含量測定方法為對照品溶液的制備；供試品溶液的制備；含量測定設定值中人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1，甘草酸以甘草酸銨含量計，分別為12.0mg，10.0mg，18.0mg，28.0mg。該質量標準簡便，且能更好地控制藥品的質量。本發明的質量控制方法，具有較強的專屬性和良好的重現性，真正體現藥品安全有效、質量可控。
文檔編號G01N30/02GK102841160SQ201210369048
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月27日 優先權日2012年9月27日
發明者吳皓, 郁紅禮, 徐秋香, 陸兔林, 宮樂 申請人:南京中醫藥大學