專利名稱：一種沙丁胺醇人工抗原合成方法及在膠體金免疫試紙條的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物化工技術領域，具體地，涉及一種沙丁胺醇人工抗原合成方法及在膠體金免疫試紙條的應用。
背景技術：
隨著社會進步和人們生活水平的提高，食品中獸藥殘留問題越來越引起人們的重視。人們的身心健康需要得到越來越高的重視。要提高畜禽產品的安全，除了嚴格控制疫情和加強管理外，對獸藥及添加劑等有毒化學物質殘留的監測與控制至關重要，所以科學可靠的獸藥殘留檢測方法是評價動物源食品質量安
全與否的科學保證。沙丁胺醇(salbutamol，SAL)是一種選擇性β 2受體激動劑，白色或類白色的粉末，無臭，味微苦，在水中易溶，能溶于甲醇，具有強效松弛支氣管平滑肌作用，臨床用于支氣管哮喘的防治和治療。其又名舒喘寧、索布胺、阿布叔醇等，化學名為4-羥基-5-羥甲基-α-(叔丁胺)甲基苯乙醇胺，分子式C13H21NO3，相對分子質量為239。SAL—般為人工合成。沙丁胺醇臨床最初是用于支氣管哮喘的防治和治療，但由于SAL和最早用于飼料添加劑的鹽酸克倫特羅(CL)結構和性質相似，而鹽酸克倫特羅目前的監管力度較大，所以近年來不法分子使之成為CL的替代品，將SAL添加于飼料的主要目的是促進動物生長，使動物體內的營養成分由脂肪向肌肉轉移，表現為營養“再分配效應”，具有調控動物體營養代謝路徑，增強脂肪分解代謝，促進蛋白質合成，顯著增加酮體瘦肉率的作用。動物飼用含SAL的飼料，便會大量積蓄體中，存留時間較長，而且一般烹飪過程很難使其失活、清除，人長期食用會出現心悸、頭痛、惡心、嘔吐、肌肉痛、戰栗、神經過敏、肌肉振顫等，特別是可誘發和加重糖尿病、心血管 、腦血管系統病人的病情，所以要嚴禁含SAL的食品流入市場。膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，形成帶負電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA, ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合，因而在基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。膠體金免疫層析法將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果。該法現已發展成為診斷試紙條，使用十分方便。

發明內容
本發明的一個目的是克服現有沙丁胺醇檢測技術的不足，提供一種新的沙丁胺醇人工抗原，基于所述抗原可以建立方便、快捷、特異、準確的沙丁胺醇膠體金檢測方法。本發明的另一個目的是提供基于所述抗原的沙丁胺醇膠體金檢測方法。本發明的目的通過以下技術方案予以實現:
一種沙丁胺醇人工抗原，所述沙丁胺醇人工抗原的結構式如式(I )所示:
權利要求
1.一種沙丁胺醇人工抗原，其特征在于所述沙丁胺醇人工抗原的結構式如式(I )所示:
2.一種制備如權利要求1所述沙丁胺醇人工抗原的方法，其特征在于，包括以下步驟: S1.將硫酸沙丁醇溶于PB緩沖液中得到硫酸沙丁胺醇溶液； S2.向SI所述硫酸沙丁胺醇溶液中加入甲醛，反應； S3.向S2加入載體蛋白進行偶聯反應，反應后透析，收集透析液即得沙丁胺醇人工抗原； 其中，S3中所述載體蛋白為牛血清白蛋白或卵清蛋白。
3.根據權利要求2所述制備方法，其特征在于，S3中所述載體蛋白為牛血清白蛋白時，硫酸沙丁胺醇與牛血清白蛋白的質量比為5 10:1 ;載體蛋白為卵清蛋白時，硫酸沙丁胺醇與卵清蛋白的質量比為1:50 100。
4.根據權利要求2所述制備方法，其特征在于，SI中所述PB緩沖液的pH值為6.0，濃度為0.05M。
5.根據權利要求2所述制備方法，其特征在于，S2中所述甲醛的用量按照50mg硫酸沙丁醇加100 200ul甲醛的比例確定。
6.根據權利要求2所述制備方法，其特征在于，S2中所述反應的時間為5 20分鐘；S3中偶聯反應的時間為24 48小時。
7.根據權利要求2所述制備方法，其特征在于，S3中所述透析是采用磷酸鹽緩沖液為透析液，所述磷酸鹽緩沖液PH值為7.38 7.45，濃度為0.01M/L。
8.根據權利要求2所述制備方法，其特征在于，S3中所述載體蛋白為牛血清白蛋白時，合成的抗原為沙丁胺醇免疫原；所述載體蛋白為卵清蛋白時，合成的抗原為沙丁胺醇包被原。
9.一種利用權利要求1或2所述沙丁胺醇人工抗原的沙丁胺醇膠體金法檢方法。
10.根據權利要求9所述方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: S1.用權利要求8所述沙丁胺醇免疫原免疫動物； S2.收集并純化抗體； S3.將抗體噴涂于玻璃纖維紙上得到膠體金-多抗結合物玻璃纖維條； S4.將權利要求8所述沙丁胺醇包被原噴涂于硝酸纖維素膜上制備檢測線，同時將羊抗兔IgG 二抗噴涂于硝酸纖維素膜上制備質控線；. 55.將樣品墊、S3中膠體金-多抗結合物玻璃纖維條、S4中含檢測線和質控線的硝酸纖維素膜和吸水紙組裝成膠體金試紙條；. 56.檢測。
全文摘要
本發明公開了一種沙丁胺醇人工抗原合成方法及在膠體金免疫試紙條的應用。本發明所述的沙丁胺醇人工抗原的結構式如式(Ⅰ)所示其中，所述載體蛋白protein為牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)；基于所述人工抗原制備得到包被原和免疫原，本發明建立了膠體金法檢測沙丁胺醇的方法，簡單易操作，成本低，特異性和重復性很好。
文檔編號G01N33/558GK103073635SQ20121058839
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月31日 優先權日2012年12月31日
發明者陳觀銀, 黃顯會, 李帥鵬 申請人:華南農業大學