酞酸酯類塑化劑通用半抗原、抗原的合成方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明“酞酸酯類塑化劑通用半抗原、抗原的合成方法及應(yīng)用”，涉及生物檢測技術(shù)。本發(fā)明以4-硝基鄰苯二甲酸為原料，通過酯化和還原反應(yīng)，形成半抗原，用戊二醛法將其與載體蛋白偶聯(lián)，得到酞酸酯類塑化劑通用人工抗原。通過紫外光譜掃描證實了人工抗原的成功合成，免疫動物實驗表明本發(fā)明制備的人工抗原具有良好的免疫原性，產(chǎn)生的抗體群選性好，靈敏度高。本發(fā)明的抗原或抗體可用于酞酸酯類塑化劑的免疫分析中，滿足快速檢測食品或環(huán)境介質(zhì)中的酞酸酯類塑化劑殘留的需要，應(yīng)用前景廣闊。
【專利說明】酞酸酯類塑化劑通用半抗原、抗原的合成方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)，具體為酞酸酯類塑化劑通用人工抗原的制備方法及應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]酞酸酯(Phthalic Acid Esters，PAEs)類化合物是塑料生產(chǎn)中最常用的一類塑化劑，占增塑劑市場份額的88%，大約包含30種化合物，最常用的如鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)等，主要用于生產(chǎn)醫(yī)療制品、塑料玩具、化妝品、食品包裝、農(nóng)用地膜等，由于酞酸酯與產(chǎn)品基質(zhì)間為非共價結(jié)合，致使其在生產(chǎn)、加工和使用過程中不斷向環(huán)境中釋放，已成為全球性的最普遍的一類環(huán)境污染物。毒理學(xué)研究表明:酞酸酯是一類內(nèi)分泌干擾物，具有雌激素效應(yīng)，并表現(xiàn)出一定的生物累積性，是一種具有生殖毒性和發(fā)育毒性的環(huán)境雌激素，并與肥胖癥和糖尿病的發(fā)生有關(guān)。美國EPA和我國環(huán)境監(jiān)測總部都將酞酸酯類化合物列為環(huán)境中優(yōu)先控制的有機(jī)污染物，衛(wèi)生部也將16種酞酸酯列入《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單(第六批)》。
[0003]目前酞酸酯的檢測多采用儀器分析法，需要昂貴的儀器設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員，對檢材要求較高，樣品前處理和提純過程費時費力，不能滿足現(xiàn)代檢測對方便、快速、準(zhǔn)確的要求。酶聯(lián)免疫吸附法和膠體金試紙條法操作簡便，對樣本要求不高，可實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測的要求。但是，酞酸酯類化合物種類繁多，常常為多個化合物同時被檢出。現(xiàn)有的免疫分析主要針對特定的酞酸酯化合物，不能實現(xiàn)酞酸酯類塑化劑的多殘留檢測。因此，本發(fā)明以4-硝基鄰苯二甲酸為原料，設(shè)計一種酞酸酯類塑化劑的通用人工抗原，為建立酞酸酯類塑化劑的多殘留免疫檢測技術(shù)提供基礎(chǔ)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對目前酞酸酯類塑化劑免疫分析檢測領(lǐng)域的需求和不足，提供一種酞酸酯類塑化劑通用半抗原和人工抗原的合成方法。試驗數(shù)據(jù)表明，該通用抗原具有較高的免疫原性，制備的抗血清與酞酸酯類塑化劑具有良好的親和性，抗體通用性好，靈敏度高。
[0005]一種酞酸酯類塑化劑的通用半抗原，其特征在于:其分子結(jié)構(gòu)式如式(I)所示:

【權(quán)利要求】
1.一種酞酸酯類塑化劑的通用半抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式(I)所示:
2.一種酞酸酯類塑化劑的通用人工抗原，其特征在于:是在權(quán)利要求1中所述的通用半抗原式(I)的氨基基團(tuán)上偶聯(lián)載體蛋白得到的分子。
3.權(quán)利要求2所述的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、雞卵清白蛋白OVA、人血清白蛋HSA、鑰孔血藍(lán)蛋白KLH中的一種。
4.權(quán)利要求1所述的通用半抗原的合成方法，其合成步驟為: (1)取10-20g的4-硝基鄰苯二甲酸，加入到30mL無水乙醇，邊攪拌邊緩慢加入H2SO4,120°C反應(yīng)7h，蒸餾除去反應(yīng)產(chǎn)生的水和多余的乙醇；趁熱轉(zhuǎn)至冰水中，取析出固體用10%的Na2CO3 (pH7-8)洗滌至水層無色后，用無水乙醇重結(jié)晶得到淺黃色晶體； (2)取0.7-1.5g的淺黃色晶體溶于200mL苯中，加入純鋅粉，分次加入濃HCL，室溫下攪拌12h后向反應(yīng)液中加入冷水,用NaOH中和反應(yīng)液至堿性,用苯進(jìn)行分離萃取,萃取液經(jīng)水洗后用無水Na2SO4干燥 ，蒸餾除去苯后用無水乙醇重結(jié)晶，得到淡黃色晶體，即為酞酸酯類塑化劑通用半抗原。
5.權(quán)利要求2所述的通用人工抗原的合成方法，其合成步驟為: (1)取酞酸酯類塑化劑通用半抗原加入N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，在室溫磁力攪拌下至充分溶解后，4°C下逐滴加入2.5%的戊二醛溶液，半抗原:戊二醛=1:2 (摩爾比)，避光混勻并在磁力攪拌下反應(yīng)2h，得到A液； (2)取牛血清白蛋白，半抗原:牛血清白蛋白=80:1(摩爾比)，用pH9.6,0.05M的碳酸鹽緩沖液溶解，低溫保存，此液為B液； (3)在冰水浴中將A液緩慢滴加到B液中，并在攪拌條件下繼續(xù)反應(yīng)過夜，將混合液移入透析袋中，用PBS緩沖液透析3-4天，每天更換2次PBS緩沖液；使用凍干法將透析袋中的液體制成粉末，即得到酞酸酯類塑化劑通用人工抗原。
6.權(quán)利要求2和3所述的通用人工抗原的應(yīng)用，其特征在于在制備抗血清、抗體或雜交瘤細(xì)胞中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要去2和3所述的通用人工抗原的應(yīng)用，其特征在于在檢測酞酸酯類塑化劑、食品或環(huán)境介質(zhì)中的酞酸酯類塑化劑殘留中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N33/544GK104130144SQ201410368522
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月30日
【發(fā)明者】孫鳳霞, 羅小玲, 彭夏雨, 盧春霞, 康立超, 唐宗貴, 方婷婷, 謝勇 申請人:新疆農(nóng)墾科學(xué)院, 孫鳳霞