一種適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的方法及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明公開一種適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的方法及試劑盒。通過獲得敏感品系棉蚜用0.05%的TritonX-100將殺蟲劑稀釋并獲得藥劑診斷濃度50mg·L-1和60mg·L-1，以該診斷濃度的2倍劑量作為區分劑量，啶蟲脒和吡蟲啉的區分計量分別為100mg.L-1，120mg.L-1；選長7cm、口徑1.5cm玻璃試管中滾膜制成選藥試劑盒，試管內表面積為27.5cm2，管壁的藥劑量分別為0.44μg.cm-2和0.53μg.cm-2，以硅膠塞封口制成測試盒。測試時接入棉田棉蚜測定死亡率，省略了敏感棉蚜的篩選及敏感性鑒定環節，簡便、快速測定并對毒性敏感性進行安全分級，具有良好的應用價值。
【專利說明】一種適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的方法及試劑盒

【技術領域】
[0001] 本發明屬于棉田害蟲檢測【技術領域】，具體地，本發明涉及一種快速指示棉花主要 害蟲棉蚜對化學殺蟲劑啶蟲脒的敏感性測試【技術領域】，進一步講，本發明涉及一種簡便快 速檢測出棉蚜對啶蟲脒藥劑毒性敏感度，安全科學使用藥劑防治棉蚜的【技術領域】。

【背景技術】
[0002] 棉姆67〇陽/0,俗稱膩蟲、蜜蟲、油蟲，屬同翅目，姆科，姆屬，是 一種世界性害蟲，除西藏外，在全國各地都有發生，其中以黃河流域和西北內陸棉區發生危 害較重。棉蚜的寄主范圍廣泛，全世界已知寄主植物74科285種，我國已記載113種，其 中，越冬寄主主要為木槿、花椒、石榴、鼠李等，夏季寄主有棉花及瓜類、茄科、豆科、菊科和 十字花科植物等。棉蚜的成蚜、若蚜都主要集中在棉葉背面或嫩頭吸食汁液。苗期受害，棉 葉卷縮，棉株生長發育緩慢，中部葉片出現油葉，葉表蚜蟲排泄的蜜露常誘發霉菌滋生，嚴 重時導致蕾鈴脫落。
[0003] 中國是世界上最大的棉花生產國，也是最大的棉花消費國，因此棉花生產對于我 國的經濟發展具有重要意義。隨著轉Bt基因棉花在中國的大面積推廣應用，棉蚜等刺吸性 害蟲成為了棉田的主要害蟲，對棉花生產危害嚴重，其中，最常見也是危害最嚴重最具有代 表性的是啶蟲脒、吡蟲啉。目前，棉蚜的防治主要依賴于啶蟲脒、噻蟲嗪、吡蟲啉和阿維菌素 等化學殺蟲劑。
[0004] 在棉蚜對啶蟲脒、吡蟲啉等化學藥劑毒性的敏感性測試方面，目前主要依賴于專 業技術人員利用生物測定法及生物化學法兩種檢測技術進行檢測。應用最廣泛的是生物測 定法，即實驗室內將測試藥劑按照一定的濃度梯度配制成藥液，采集棉田棉蟲牙帶回室內，以 點滴法或者藥膜法測試不同濃度梯度下的死亡率即死亡蟲口數占測試蟲口數的比率，以敏 感性棉蚜為對照，確認48小時后死亡率達50%時的藥劑濃度，計算測試棉蚜及敏感棉蚜在 50%死亡率時的濃度比值。根據抗性劃分標準：〈3倍為敏感、3-5倍為耐藥力增加、5-10倍 為抵抗、10-40倍為中抗、40-60為高抗、>160倍為極高抗。因此當比值小于10,確認該藥劑 為棉蚜敏感藥劑，可以在農業生產中安全使用；該比值達為10-40時，確認該藥劑為棉蚜中 等敏感藥劑，在農業生產中選擇性、謹慎使用；在該比值達到40以上時，確認該藥劑為棉蚜 不敏感藥劑，農業生產中禁止使用。而生物化學法的靶標單一，選擇性更強，但是對儀器設 備和人員專業知識、實驗技能要求較高，總之兩種方法的技術要求均較高，專業性強，耗時 長，均難以在基層農技推廣部門普及使用。


【發明內容】

[0005] 為了解決現有害蟲對化學藥劑毒性的敏感性測定中現有方法技術要求高、專業性 強，耗時長而難以在基層農技推廣部門普及使用的技術難題，本發明旨在提供一種適用大 田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的方法及試劑盒，不僅省略了敏感棉蚜的篩選及敏感性鑒定 環節，而且夠簡便、快速測定測試棉蚜對啶蟲脒、吡蟲啉藥劑的毒性敏感性，并對毒性敏感 性進行分級，告知該藥劑能否安全使用。
[0006] 本發明解決其技術問題所采用的技術方案： 通過野外自然選取棉姆室內汰選獲得敏感品系棉姆，用0. 05%的TritonX-IOO蒸饋水 將啶蟲脒液稀釋成 〇? lmg. L'O. 15mg. L'O. 2mg. L'O. 25mg. I/1 和 0? 5mg. I/1 不同濃度，以 藥膜法測試敏感品系棉蚜死亡率，得到其99%死亡率時的藥液濃度分別為50mg. L'設定 齊IJ量為50mg. I71啶蟲脒溶液作為敏感品系棉蚜測試的診斷濃度，以該診斷濃度的2倍劑量 作為田間敏感品系棉蚜的區分劑量IOOmg. I71 ;同樣的方法獲得吡蟲啉的區分計量為120 mg. L'以區分劑量在長7cm、口徑I. 5cm玻璃試管中滾膜制成選藥試劑盒，滾膜采用將殺 蟲劑啶蟲脒和吡蟲啉原藥按照區分計量分別稀釋成濃度IOOmg. I71和120mg. L'再分別均 勻涂在試管的內表面，試管內表面積為27. 5cm2，室溫放置晾干，避免太陽直射，每平方厘米 管壁的藥劑量按照啶蟲脒和吡蟲啉溶液分別為〇. 44呢和0. 53呢，之后以硅膠塞封口制成 試劑盒；接入棉田測試棉蚜，測定3小時后的死亡率，死亡率超過94%時評價測試棉蚜對啶 蟲脒為高度敏感，而對吡蟲啉，死亡率超過90%時評價測試棉蚜對吡蟲啉為高度敏感，否則 要加大藥劑量。
[0007] 具體的，本發明提供了一種適用大田棉花種植中敏感棉蚜檢測鑒別的方法，具體 操作方法如下： (1)按照田間抽樣標準，采集帶有棉蚜的棉葉，并帶回室內。
[0008] (2)取蚜時先將棉蚜抖落在白紙以防造成棉蚜喙的機械損傷，選取活波大小一致 的無翅蚜放入診斷試管，每管20-30頭以硅膠塞封口，每個藥劑7個診斷試管重復，3個空白 診斷試管作為對照。
[0009] (3)將殺蟲劑啶蟲脒溶液按照區分計量稀釋后均勻涂在試管的內表面，要求玻璃 試管長7cm、口徑I. 5cm，試管內表面積為27. 5cm2，每平方厘米管壁的藥劑量按照吡蟲啉溶 液0.44呢，0.53呢為啶蟲脒每平方厘米管壁的藥劑量，室溫放置晾干，避免太陽直射，制 備獲得適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的試劑盒。
[0010] (4)將裝有蚜蟲的診斷試管放置室內，避免陽光直射，3小時后檢查死亡率。
[0011] (5)接入棉田測試棉?，測定3小時后的死亡率，死亡率超過94%時評價測試棉蚜 對啶蟲脒為高度敏感，而對吡蟲啉，死亡率超過90%時評價測試棉蚜對吡蟲啉為高度敏感， 否則要加大藥劑量。
[0012] 同時，本發明提供一種適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別試劑盒的制備。選用 玻璃試管長7cm、口徑I. 5cm，試管內表面積為27. 5cm2，將殺蟲劑啶蟲脒、吡蟲啉溶液按照區 分計量稀釋后均勻涂在試管的內表面，每平方厘米管壁的藥劑量按照吡蟲啉溶液〇. 44呢， 0. 53呢為啶蟲脒每平方厘米管壁的藥劑量，室溫放置晾干，避免太陽直射，之后以硅膠塞 封口，制備獲得適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的試劑盒。
[0013] 本發明中，采用的制備試劑盒與采用的適用大田棉花種植中敏感棉蚜檢測鑒別的 方法兩者密不可分，兩者相互依存共同達到適用大田棉花種植中敏感棉蚜檢測鑒別的目 的。
[0014] 本發明根據棉蚜種群的敏感度水平，將常見啶蟲脒作和吡蟲啉為試驗選用殺蟲 齊IJ，經試驗驗證了棉蚜種群的敏感度水平為啶蟲脒〉吡蟲啉，確定敏感度診斷劑量即LC99, 選擇吡蟲啉藥劑的區分劑量為IOOmg ? I71和120mg ? L'
[0015] 本發明根據棉蚜種群的敏感度水平，將常見的2種殺蟲劑啶蟲脒和吡蟲啉、作為 試驗選用殺蟲劑，經試驗驗證了啶蟲脒、吡蟲啉、噻蟲嗪和阿維菌素3h的毒殺棉蚜的死亡 率分別為100%和98%，于是通過計算和實驗確定0. 44呢和0. 53呢分別為啶蟲脒和吡蟲 啉每平方厘米管壁的藥劑量，并在棉田測試棉蚜效果最好。
[0016] Triton X-100即聚乙二醇辛基苯基醚，是一種非離子型表面活性劑，或稱去污劑， 分子量為646. 86 (C34H62Oll),它能溶解脂質，以增加抗體對細胞膜的通透性，免疫細胞化學 中Triton X-100常用濃度為1%和0? 3%，本發明證明了采用0? 05%的TritonX-IOO蒸餾水 配制成啶蟲脒溶液獲得效果最好。
[0017] 通過實施本發明具體的
【發明內容】
，可以達到以下效果： (1)本發明提供一種適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的方法及試劑盒，不僅省略 了敏感棉蚜的篩選及敏感性鑒定環節，而且夠簡便、快速測定測試棉蚜對啶蟲脒、吡蟲啉藥 劑的毒性敏感性，并對毒性敏感性進行分級，告知該藥劑能否安全使用。
[0018] (2)本發明在測試棉蚜對測試藥劑毒性是否敏感的基礎上，方便區分測試棉蚜對 藥劑毒性的敏感性級別，告知用戶是否可以安全使用該藥劑用以防治棉蚜。試劑盒制作簡 便，應用簡單，測試快速，特別適用于農業技術推廣人員或者農民的田間快速測定選擇敏感 性藥劑。
[0019]

【具體實施方式】
[0020] 下面，舉實施例說明本發明，但是，本發明并不限于下述的實施例。另外，在下述的 說明中，如無特別說明，％皆指m/m質量百分比。
[0021] 本發明中選用的所有試劑和儀器都為本領域熟知選用的，但不限制本發明的實 施，其他本領域熟知的一些試劑和設備都可適用于本發明以下實施方式的實施。
[0022] 實施例一：適用大田棉花種植中敏感棉蚜檢測鑒別的方法 通過野外自然選取棉姆室內汰選獲得敏感品系棉姆，用0. 05%的TritonX-IOO蒸饋 水將啶蟲脒液稀釋成 0. lmg. L'O. 15mg. L'O. 2mg. L'O. 25mg. I/1 和 0. 5mg. I71，以藥膜法 測試敏感品系棉蚜死亡率，得到其99%死亡率時的藥液濃度分別為50mg. I71，設定劑量為 50mg. I71啶蟲脒溶液作為敏感品系棉蚜測試的診斷濃度，以該診斷濃度的2倍劑量作為田 間敏感品系棉蚜的區分劑量IOOmg. I71 ;同樣的方法獲得吡蟲啉的區分計量為120 mg. L' 以區分劑量在長7cm、口徑I. 5cm玻璃試管中滾膜制成選藥試劑盒，滾膜采用將殺蟲劑啶蟲 脒和吡蟲啉原藥按照區分計量分別稀釋成濃度IOOmg. I71和120mg. I71，再分別均勻涂在試 管的內表面，試管內表面積為27. 5cm2,室溫放置晾干，避免太陽直射，每平方厘米管壁的藥 劑量按照啶蟲脒和吡蟲啉溶液分別為〇. 44呢和0. 53P ;接入棉田測試棉蚜，測定3小時后 的死亡率,死亡率超過94%時評價測試棉蚜對啶蟲脒為高度敏感，而對吡蟲啉，死亡率超過 90%時評價測試棉蚜對吡蟲啉為高度敏感，否則要加大藥劑量。
[0023] 實施例二：適用大田棉花種植中敏感棉蚜檢測鑒別的方法 一種適用大田棉花種植中敏感棉蚜檢測鑒別的具體方法操作如下： (1)按照田間抽樣標準，采集帶有棉蚜的棉葉，并帶回室內。
[0024] (2)取蚜時先將棉蚜抖落在白紙以防造成棉蚜喙的機械損傷，選取活波大小一致 的無翅蚜放入診斷試管，每管20-30頭以硅膠塞封口，每個藥劑7個診斷試管重復，3個空白 診斷試管作為對照。
[0025] (3)將殺蟲劑啶蟲脒、吡蟲啉溶液按照區分計量稀釋后均勻涂在試管的內表面， 要求玻璃試管長7cm、口徑I. 5cm，試管內表面積為27. 5cm2，每平方厘米管壁的藥劑量按照 吡蟲啉溶液〇. 44呢，0. 53呢為啶蟲脒每平方厘米管壁的藥劑量，室溫放置晾干，避免太陽 直射，制備獲得適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的試劑盒。
[0026] (4)將裝有蚜蟲的診斷試管放置室內，避免陽光直射，3小時后檢查死亡率。
[0027] (5)接入棉田測試棉?，測定3小時后的死亡率，死亡率超過94%時評價測試棉蚜 對啶蟲脒為高度敏感，而對吡蟲啉，死亡率超過90%時評價測試棉蚜對吡蟲啉為高度敏感， 否則要加大藥劑量。
[0028] 判別標準：如果測試棉蚜的死亡率達到如下的標準(表1)，說明該藥劑能有效的 控制田間種群，否則就要加大施藥量，但原則上不能超過推薦劑量的上限。
[0029] 表1 :棉蚜死亡判別標準

【權利要求】
1. 一種適用大田棉花種植中敏感棉蚜檢測鑒別的方法，其特征在于，具體操作方法如 下： (1) 按照田間抽樣標準，采集帶有棉蚜的棉葉，并帶回室內； (2) 取蚜時先將棉蚜抖落在白紙以防造成棉蚜喙的機械損傷，選取活波大小一致的無 翅蚜放入診斷試管，每管20-30頭以硅膠塞封口，每個藥劑7個診斷試管重復，3個空白診斷 試管作為對照； (3) 將殺蟲劑啶蟲脒溶液按照區分計量稀釋后均勻涂在試管的內表面，要求玻璃試管 長7cm、口徑1. 5cm，試管內表面積為27. 5cm2,每平方厘米管壁的藥劑量按照吡蟲啉溶液 0. 44呢，0.53呢為啶蟲脒每平方厘米管壁的藥劑量，室溫放置晾干，避免太陽直射，制備 獲得適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的試劑盒； (4) 將裝有蚜蟲的診斷試管放置室內，避免陽光直射，3小時后檢查死亡率； (5) 接入棉田測試棉蚜，測定3小時后的死亡率，死亡率超過94%時評價測試棉蚜對啶 蟲脒為高度敏感，而對吡蟲啉，死亡率超過90%時評價測試棉蚜對吡蟲啉為高度敏感，否則 要加大藥劑量。
2. -種適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別試劑盒，其特征在于，所述的適用大田 棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別試劑盒通過如下方式制備獲得：選用玻璃試管長7cm、口徑 1. 5cm，試管內表面積為27. 5cm2,將殺蟲劑啶蟲脒、吡蟲啉溶液按照區分計量稀釋后均勻涂 在試管的內表面，每平方厘米管壁的藥劑量按照吡蟲啉溶液0. 44呢，0. 53呢為啶蟲脒每平 方厘米管壁的藥劑量，室溫放置晾干，避免太陽直射，之后以硅膠塞封口，制備獲得適用大 田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的試劑盒。
【文檔編號】G01N33/50GK104407125SQ201410738107
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月7日 優先權日:2014年12月7日
【發明者】劉小寧, 劉寧, 張學濤, 高希武, 張東海, 李芬, 馬紀 申請人:新疆大學, 劉小寧