本發明涉及了一種快速檢測黃曲霉毒素B1的方法及試劑盒，屬于酶聯免疫分析領域。
背景技術：
黃曲霉毒素（Aflatoxins）是黃曲霉和寄生曲霉等產生的一組結構類似的次生代謝產物，是一組以二吠喃香豆素為基本結構的化合物。廣泛存在于各種糧食谷物和飼料及其加工品中，對人類和動物表現出很強的毒性。黃曲霉毒素1993年被世界衛生組織（WHO）的癌癥研究機構劃定為Ⅰ類致癌物。其中黃曲霉毒素B1（AFB1）的致癌性、致突變性、致畸性均居首位。
現有技術中常用的黃曲霉毒素檢測技術主要有薄層層析法（TLC)、高效液相色譜法（HPLC)、免疫學分析法。前兩者具有樣品前處理步驟繁瑣，耗時費力，儀器價格昂貴，需要專業人員操作等的缺點，而免疫學分析法具有特異性強、樣品前處理簡單、成本低、對實驗人員和環境的污染危害小等優點。免疫學分析法特別是酶聯免疫吸附分析技術具有快速、靈敏度高、操作簡單、適應性強等優點，適合高通量樣品篩選，因此對于快速檢測黃曲霉毒素的殘留，ELISA方法更具優勢。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種快速檢測黃曲霉毒素B1的方法及試劑盒，以便快速、簡便地檢測黃曲霉毒素B1。
本發明所述的檢測黃曲霉毒素B1試劑盒包括：黃曲霉毒素B1標準溶液，黃曲霉毒素B1包被反應板，酶標抗原，酶標抗原稀釋緩沖液，底物液，顯色液，終止液，樣品稀釋液，濃縮洗滌液，濃縮PBS溶液。
基于上述，所述黃曲霉毒素B1試劑盒的黃曲霉毒素B1標準溶液濃度分別為：0 ng/ml，0.1 ng/ml，0.25 ng/ml，0.5 ng/ml，1 ng/ml，2 ng/ml。
基于上述，所述黃曲霉毒素B1試劑盒的黃曲霉毒素B1包被反應板，包被液是黃曲霉毒素B1抗體，濃度為2~6 ug/ml，每孔包被90~160 ul的包被液。
本發明所述的快速檢測黃曲霉毒素B1試劑盒的方法，包括以下步驟：
1) 取上述所述包被反應板，洗滌0~1次，甩干，拍干；
2) 分別在包被反應板各孔加入50 μL黃曲霉毒素B1標準溶液、50 μL待測樣液；
3) 每孔均加入50 μL酶標抗原工作溶液；
4) 放入37 ℃培養箱，孵育8 min～15 min；
5) 取出反應板，洗滌4~5次，甩干、拍干后，每孔分別加入50 μL的底物液和50 μL的顯色液；
6) 放入37 ℃培養箱，孵育8 min～15 min；
7) 每孔分別加入50 μL的終止液，用450 nm酶標儀讀取各孔的吸光度。
本發明提供了一種快速檢測黃曲霉毒素B1的方法及試劑盒，反應時間縮短到25~35分鐘，大大縮短了檢測時間，同時簡化了洗滌過程，加快了實驗反應進程，可有效提高批量檢測速度。能快速、簡便、靈敏、準確地檢測黃曲霉毒素B1。
具體實施方式
下面通過具體實施方式，對本發明的技術方案做進一步的詳細描述。
實施例1
一種快速檢測黃曲霉毒素B1的方法及試劑盒
一、包被反應板的制備
1、將黃曲霉毒素B1抗體加入反應板中，抗體包被液濃度為2 ug/ml，每孔包被150 ul，保鮮膜密封后4 ℃冰箱過夜后，洗滌1次，拍干。
2、每孔加入250 ul封閉液后，包被反應板密封后，37 ℃孵育2小時。
3、取出包被反應板，甩干，拍干，37 ℃烘干1.5小時。
二、黃曲霉毒素B1的超級快試劑盒
1、取相應的包被反應板放在框架上，對反應孔進行編號，設定1~6號孔為AFB1標準對照孔，其余孔為樣品孔。
2、洗滌：每孔加入250 μL（約5滴）洗滌液，放置1 min。甩干，在吸水紙上拍干。
3、實驗加樣：1~6號孔分別加入50 μL的AFB1標準溶液（0，0.1，0.25，0.5，1，2 ppb），其余孔加入相應的待測樣液。
4、加酶標抗原：各反應孔均加入50 μL的酶標抗原工作溶液。輕輕振搖包被反應板框架，使試劑充分混勻。蓋上蓋子，放入37 ℃培養箱，孵育8 min。
5、洗滌：取出反應板，甩干，拍干。每孔加入250 μL（約5滴）的洗滌液，放置1 min。甩干并拍干。按上述操作再重復洗滌4次。
6、顯色：反應板拍干后，每孔分別加入50 μL的底物液和50 μL的顯色液。輕輕振搖包被反應板框架，使試劑充分混勻。蓋上蓋子，放入37 ℃培養箱，孵育8 min。
7、讀取數值：取出反應板，每孔加入50 μL的終止液。輕輕振搖包被反應板框架，使反應板中的試劑充分混勻。放入450 nm酶標儀中讀取各孔的吸光度（OD值）數值。用數據處理軟件進行處理得出濃度值。
實施例2
一、包被反應板的制備
1、將黃曲霉毒素B1抗體加入反應板中，抗體包被液濃度為6 ug/ml，每孔包被90 ul，保鮮膜密封后4 ℃冰箱過夜后，洗滌1次，拍干。
2、每孔加入250 ul封閉液后，包被反應板密封后，37 ℃孵育2小時。
3、取出包被反應板，甩干，拍干，37 ℃烘干1.5小時。
二、黃曲霉毒素B1的超級快試劑盒
1、取相應的包被反應板放在框架上，對反應孔進行編號，設定1~6號孔為AFB1標準對照孔，其余孔為樣品孔。
2、洗滌：每孔加入250 μL（約5滴）洗滌液，放置1 min。甩干，在吸水紙上拍干。
3、實驗加樣：1~6號孔分別加入50 μL的AFB1標準溶液（0，0.1，0.25，0.5，1，2 ppb），其余孔加入相應的待測樣液。
4、加酶標抗原：各反應孔均加入50 μL的酶標抗原工作溶液。輕輕振搖包被反應板框架，使試劑充分混勻。蓋上蓋子，放入37 ℃培養箱，孵育15 min。
5、洗滌：取出反應板，甩干，拍干。每孔加入250 μL（約5滴）的洗滌液，放置1 min。甩干并拍干。按上述操作再重復洗滌4次。
6、顯色：反應板拍干后，每孔分別加入50 μL的底物液和50 μL的顯色液。輕輕振搖包被反應板框架，使試劑充分混勻。蓋上蓋子，放入37 ℃培養箱，孵育15 min。
7、讀取數值：同實施例1。
實施例3
一、包被反應板的制備
1、將黃曲霉毒素B1抗體加入反應板中，抗體包被液濃度為4 ug/ml，每孔包被100 ul，保鮮膜密封后4 ℃冰箱過夜后，洗滌1次，拍干。
2、每孔加入250 ul封閉液后，包被反應板密封后，37 ℃孵育2小時。
3、取出包被反應板，甩干，拍干，37 ℃烘干1.5小時。
二、黃曲霉毒素B1的超級快試劑盒
1、取相應的包被反應板放在框架上，對反應孔進行編號，設定1~6號孔為AFB1標準對照孔，其余孔為樣品孔。
2、洗滌：每孔加入250 μL（約5滴）洗滌液，放置1 min。甩干，在吸水紙上拍干。
3、實驗加樣：1~6號孔分別加入50 μL的AFB1標準溶液（0，0.1，0.25，0.5，1，2 ppb），其余孔加入相應的待測樣液。
4、加酶標抗原：各反應孔均加入50 μL的酶標抗原工作溶液。輕輕振搖包被反應板框架，使試劑充分混勻。蓋上蓋子，放入37 ℃培養箱，孵育11 min。
5、洗滌：取出反應板，甩干，拍干。每孔加入250 μL（約5滴）的洗滌液，放置1 min。甩干并拍干。按上述操作再重復洗滌4次。
6、顯色：反應板拍干后，每孔分別加入50 μL的底物液和50 μL的顯色液。輕輕振搖包被反應板框架，使試劑充分混勻。蓋上蓋子，放入37 ℃培養箱，孵育10 min。
7、讀取數值：同實施例1。