本發明涉及口腔醫療領域，涉及一種口腔拭子的檢測方法。
背景技術：
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口腔拭子是分子流行病學、遺傳學和法醫學研究中重要的核酸來源，其收集具有取樣簡便、安全、成本低、無創傷的優點。低溫檢測對核酸的冷打擊使其在保存后不能取得理想的檢測效果，高溫檢測核酸又會使能量代謝加劇、細菌的繁殖速度加快，致使核酸在短時間內就表現衰退死亡現象。經過研究表明口腔拭子核酸最佳保存溫度在25℃—45℃，必須在此溫度下檢測，而現今的檢測方法效果不佳，因此，需要一種檢測方法能滿足常溫長時間的目的。
技術實現要素：
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有鑒于此，本發明提供一種解決或部分解決上述問題的一種口腔拭子的檢測方法。
為達到上述技術方案的效果，本發明的技術方案為：一種口腔拭子的檢測方法，其特征在于，包含以下步驟：
取50份口腔拭子，進行編號KJ001～KJ0050，具體檢測方法如下：
在檢測前將所有口腔拭子置于應恢復至室溫的25-27℃下，并且輕輕地旋轉以及震蕩予以混合；
1)從密封袋中取出用抗體包被的酶標板，在記錄紙上標記樣品的位置；
2)在A2孔和B2孔內各加入80μl未經稀釋的陰性對照；
3)C2孔和D2孔內各加入80μl未經稀釋的陽性對照；
4)在剩余的孔內分別加入80μl被檢樣品；
5)用蓋子蓋住酶標板，在室溫的25-27℃下孵育40分鐘；
6)吸出(倒出)孔中的內容物，用超純水洗3-5次，每孔加入350μl的超純水容量，最后一次超純水洗同時使用吸水紙，并輕輕拍打；
7)加80μl酶標二抗到所述抗體包被的酶標板的各孔中，用蓋子蓋住，在室溫的25-27℃下孵育80分鐘，加100μl底物試劑到所述抗體包被的酶標板的各孔中，用蓋子蓋住，在室溫的25-27℃下孵育80分鐘；
8)加100μl終止液到所述抗體包被的酶標板的各孔中，并終止反應。
本發明的有益效果是：本發明的優點為操作簡單、考慮全面，在口腔拭子的檢測中，控制了保存的溫度區間及保存的時間長度，能更好地應用到實際情況中。
具體實施方式.
為了使本發明所要解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行詳細的說明。應當說明的是，此處所描述的具體實施例僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明，能實現同樣功能的產品屬于等同替換和改進，均包含在本發明的保護范圍之內。具體方法如下：
稀釋液是影響口腔拭子核酸常溫保存效果的關鍵因素，稀釋液的主要作用是：一方面用于擴大核酸體積以滿足生產需求；另一方而保護核酸的功能特征。稀釋液中所含的各種成分對口腔拭子核酸的保護作用也各不相同，核酸需要產生能量以維持細胞代謝和自身運動。葡萄糖不僅能為核酸提供能量，還可以維持稀釋液的滲透壓，在絕大多數配方中使用。過酸過堿的環境都不利于核酸生存，稀釋液中需要添加一定量的緩沖物質以維持核酸pH。碳酸氫鈉或檸檬酸鈉常被用來調節稀釋液的pH，Tris和HEPES等緩沖劑的緩沖能力更強。EDTA
是一種螯合劑，能夠與稀釋液中的金屬離子尤其是Ca2+結合，減少進入細胞內的Ca2+，防止誘發核酸獲能和頂體反應的發生，以達到抑制核酸活動，增加核酸保存時間的效果。一定濃度的+能維持核酸膜上Na+-K+泵運轉，但必須保證核酸細胞內的K+濃度高于細胞外的K濃度，這樣才能產生ATP維持核酸的存和運動，因而稀釋液可添加適量的KC1。另外，稀釋液中添加抗生素可以抑制細菌的繁殖，主要的常用的抗生素有青霉素，慶大霉素等。但由于現代社會對于抗生素的濫用，使得很多細菌對于常用抗生素有著明顯的抗性，所以，新型的抗生素適用于口腔拭子核酸常溫保存的研究已經迫在眉睫。
口腔拭子核酸單獨的保存，其中的有害微生物不僅會爭奪營養物質，而且代謝產生的有毒代謝廢物會改變保存環境，嚴重影響保存效果。現存在的菌類有大腸桿菌、沙門氏菌、克雷伯菌、變形桿菌、和棒狀桿菌等。革蘭氏陰性菌為公豬精液中常見的菌類。因此在稀釋劑中添加對革蘭氏陰性菌有抑制效果的抗生素最佳。在稀釋液中添加慶大霉素來抑制細菌的生長，對細胞的不良作用小。在稀釋液中添加0.2mg/ml的聚維酮碘能夠殺死致病細菌，且對精液常溫保存質量指標無影響。有研究者在對不同來源的口腔拭子進行細菌分離、鑒定、培養及藥敏試驗時發現，檢出的五種細菌中，環丙沙星、氧氟沙星和諾氟沙星等奎若酮類藥物對其抑制效果較好，且發現變形桿菌、棒狀桿菌和沙門氏菌對青霉素和克林霉素具有耐藥性。比較了抗生素及組合對水牛精液中細菌的抑菌效果，結果顯示，青霉素、鏈霉素和慶大霉素全部具有抗菌圈，而泰樂菌素、林肯霉素、新霉素和大觀霉素有不同程度的耐藥現象。在抗生素組合方面慶泰林大的抗生素組合最佳。實際應用中，抗生素的選擇會因稀釋劑成分的不同而不同。
以上所述僅為本發明之較佳實施例，并非用以限定本發明的權利要求保護范圍。同時以上說明，對于相關技術領域的技術人員應可以理解及實施，因此其他基于本發明所揭示內容所完成的等同改變，均應包含在本權利要求書的涵蓋范圍內。
本發明的有益效果是：本發明的優點為操作簡單、考慮全面，在口腔拭子的檢測中，控制了保存的溫度區間及保存的時間長度，能更好地應用到實際情況中。