功能，取樣點易修復不會破壞制品的外觀，適用于對各類名貴木材 制品的抽樣。②取樣和前處理無需專業技術工作者，只需經過培訓即可上崗。③采用酯醇提 取液，充分萃取出木材的有效成分。④鑒別的結果從"類"的級別提升到"種"的層面。⑤GC-MS 3D指紋圖譜特征峰保留時間D1的一致性、質譜圖D2的一致性和峰面積D3的準確性完全 通過數據系統處理，多層面確證鑒別樣品的真偽。
[0024] 以下結合具體實施例對本發明的鑒別方法作進一步詳細的說明： 首先建立標準交趾黃檀種屬提取液GC-MS 3D指紋圖譜。
[0025] 1.1、標準樣品的預處理 確定1 〇批真交趾黃檀種屬作為標準樣品，分別用直徑為3 · 0mm的鉆頭鉆取深度10mm標 準樣品約0. lg置于提取瓶中，加入5mL乙酸乙酯：甲醇=10:1的混合液作為提取溶劑，超聲提 取5-10min(如果超聲提取兩次或多次的話，則需合并提取液并通過氮吹濃縮至lmL左右）， 再經有機相微孔濾膜(〇.45μπι)過濾，得到10個待上機預處理樣品，置于樣品瓶中。
[0026] 1.2、GC_MS3D指紋圖譜的獲取 將上述10個經過預處理標準樣品（即交趾黃檀提取液或交趾黃檀提取物)分別進行氣 相色譜-質譜聯用儀檢測，分別得到以樣品提取物總離子流色譜圖特征峰的保留時間D1、質 譜圖D2和峰面積D3作為定性參數組成GC-MS 3D指紋圖譜。
[0027] 氣相色譜-質譜聯用儀參數:毛細管色譜柱是DB-5MS: 30m X 0.25mm X 0.25μπι;進樣 量是lyL，進樣口溫度是250°C ;柱溫初始溫度是60°C保持2min，然后以5°C/min升至280°C保 持5min;質譜接口溫度是270°C ;質譜掃描模式是全掃描，質量掃描范圍是35amu-350amu;進 樣方式是脈沖不分流;載氣是氦氣（2 99.999%)，流量是1 .OmL/min;離子化方式是EI，離子 化電壓是70eV;離子源溫度是230°C，四級桿溫度是150°C。
[0028] 1.3、根據這十個交趾黃檀提取物總離子流色譜圖共有特征峰的保留時間D1、質譜 圖D2和峰面積D3,整理得出交趾黃檀提取物GC-MS 3D指紋圖譜特征峰及其化學物質信息 表，見下表1和附圖1。
[0029] 表 1

本發明的鑒別是基于提取物總離子流色譜圖特征峰的保留時間D1、質譜圖D2和峰面積 D3作為定性參數組成GC-MS 3D指紋圖譜準確判斷交趾黃檀制品真偽的鑒別方法，鑒于待檢 樣品的產地、取樣部位及取樣量等的差異性，存在提取物個別特征峰含量差異性較大，甚至 缺少個別低含量特征峰屬于正常現象。經上述十批測試真品整理交趾黃檀數據庫發現，十 批交趾黃檀提取物中出現檢出的化學物質峰面積低于檢出限的一般低于三個，因此，真偽 鑒別判定的必要條件是:①保留時間（D1)的一致性是允許偏差±0.5min。②質譜圖（D2)的 一致性是檢出的化學物質檢索匹配率大于90%，允許出現五個檢出的化學物質匹配率小于 90%。③峰面積(D3)的準確性，最多允許五個檢出的化學物質峰面積低于檢出限，必不可少 的成分是特征峰11(紫檀芪）和特征峰15(雌二醇-3-甲醚），且兩者百分比含量總和大于 50% 〇
[0030] 需鑒別的幾個樣品： 實施例一 ：1、將檢測樣品一按照上述標準樣品的預處理方法中的步驟（1.1)(1.2)，得 到樣品一的GC-MS 3D指紋圖譜（如圖2)，及圖譜特征峰的化學物質信息與表1對照的匹配 表，如下表2。
[0031] 表 2
2、鑒別 根據上述樣品的GC-MS 3D指紋圖譜特征峰的化學物質信息表(表2)與表1及圖1與圖2 對照可知:①保留時間(D1)的一致性要求允許偏差±0.5min，符合要求。②質譜圖（D2)的一 致性是檢索匹配率大于90%，其中有十六個特征峰的質譜圖匹配率小于90%，兩個特征峰的 質譜圖匹配率大于90%，不符合要求。③峰面積(D3)的準確性要求檢出的化學物質峰面積低 于檢出限最多允許五個，樣品檢出的化學物質峰面積有十六個為0,且未檢出必不可少的成 分是特征峰11(紫檀芪)和特征峰15(雌二醇-3-甲醚），不符合要求。因此，該交趾黃檀種屬 制品為假冒產品。
[0032] 實施例二 1、將檢測樣品二按照上述標準樣品的預處理方法中的步驟(1.1)(1.2)，得到樣品二的 GC-MS 3D指紋圖譜(如圖3所示），及圖譜特征峰的化學物質信息與表1對照的匹配表，如下 表3所示。
[0033] 表 3
2鑒別 根據上述樣品的GC-MS 3D指紋圖譜特征峰的化學物質信息表(表3)與表1及圖1與圖3 對照可知:①保留時間(D1)的一致性要求允許偏差±0.5min，符合要求。②質譜圖（D2)的一 致性是檢索匹配率大于90%，其中有一個特征峰的質譜圖匹配率小于90%，十七個特征峰的 質譜圖匹配率大于90%，符合要求。③峰面積(D3)的準確性要求檢出的化學物質峰面積低于 檢出限最多允許五個，樣品中只有檢出的化學物質特征峰8(6-甲氧基黃烷酮）的峰面積為 〇,又不屬于必不可少的成分特征峰11(紫檀芪）和特征峰15(雌二醇-3-甲醚)其中之一，且 必不可少的成分兩者百分比含量總和65%，符合要求。因此，該交趾黃檀種屬制品為真品。 [0034]實施例三：1、將檢測樣品三按照上述標準樣品的預處理方法中的步驟（1.1) (1.2)，得到樣品三的GC-MS 3D指紋圖譜(如圖4)，及圖譜特征峰的化學物質信息與表1對照 的匹配表，如下表4。
[0035]表 4
2、鑒別 根據上述樣品的GC-MS 3D指紋圖譜特征峰的化學物質信息表(表4)與表1及圖1與圖4 對照可知:①保留時間(D1)的一致性要求允許偏差±0.5min，其中特征峰13沃氏物保留時 間偏差大于〇.5min，列為可疑特征峰。②質譜圖（D2)的一致性是檢索匹配率大于90%，其中 有十六個特征峰的質譜圖匹配率小于90%，兩個特征峰的質譜圖匹配率大于90%，不符合要 求。③峰面積(D3)的準確性要求檢出的化學物質峰面積低于檢出限最多允許五個，樣品檢 出的化學物質峰面積有十五個為0,且未檢出必不可少的成分是特征峰11(紫檀芪)和特征 峰15(雌二醇-3-甲醚），不符合要求。因此，該交趾黃檀種屬制品為假冒產品。
【主權項】
1. 一種基于指紋圖譜的微損鑒別交趾黃檀種屬的方法，其特征在于包括以下步驟： (1)、交趾黃檀種屬指紋圖譜的建立： (1.1) 、樣品的預處理： 用直徑為1.5-3.0_的鉆頭鉆取深度為5-10mm的交趾黃檀種屬木肩樣品0.05-0.2g于 提取瓶中，加入提取溶劑3-8mL，超聲提取5-1 Omin，得提取液，再經有機相微孔濾膜過濾置 于樣品瓶中，得到待上機預處理樣品，其中所述提取溶劑為乙酸乙酯：甲醇=10:1-8:1的混 合物； (1.2) 、指紋圖譜的獲取： 將上述預處理樣品進行氣相色譜-質譜聯用儀檢測，得到以總離子流色譜圖特征峰的 保留時間、質譜圖和峰面積作為定性參數組成的GC-MS 3D指紋圖譜;氣相色譜-質譜聯用儀 參數設置為：毛細管色譜柱是DB-5MS: 30m X 0.25mm X 0.25μπι;進樣量是0.5-lyL，進樣口溫 度是230-250°C;柱溫初始溫度是50-70°C保持2min，然后以4-6°C/min升至280°C保持4-6min;質譜接口溫度是250-270°C ;質譜掃描模式是全掃描，質量掃描范圍是35amu-350amu; 進樣方式是脈沖不分流;載氣是氦氣（2 99.999%)，流量是1.0-1.5mL/min;離子化方式是 EI，離子化電壓是70eV;離子源溫度是230°C，四級桿溫度是150°C ; (1.3) 、確定交趾黃檀種屬的標準GC-MS 3D指紋圖譜特征峰： 確定多批交趾黃檀種屬標準樣品，按上述（1.1)(1.2)步驟得到提取物總離子流色譜圖 共有特征峰的保留時間、質譜圖和峰面積，整理得出用作標準的交趾黃檀提取物GC-MS 3D 指紋圖譜特征峰及其化學物質信息表； (2 )、交趾黃檀木真偽鑒別判定方法： 將按步驟（1.1)(1.2)獲得的交趾黃檀種屬待檢樣品的GC-MS 3D指紋圖譜中特征峰的 保留時間、質譜圖和峰面積的數據與標準GC-MS 3D指紋圖譜中的特征峰對照，通過核對兩 特征峰保留時間、質譜圖和峰面積的一致性或相似性來判定交趾黃檀種屬樣品的真偽； 其中保留時間的一致性允許偏差±〇.5min，質譜圖的一致性是匹配率大于90%，允許出 現5個檢出的化學物質匹配率小于90%，峰面積的一致性是最多允許五個檢出的化學物質峰 面積低于檢出限，必不可少的成分是第11個特征峰的成分紫檀芪和第15個特征峰的成分雌 二醇-3-甲醚，且兩者百分比含量總和大于50%。2. 根據權利要求1所述的基于指紋圖譜的交趾黃檀種屬微損鑒別的方法，其特征在于 上述保留時間的一致性是參考安捷倫數據處理系統來判斷的，保留時間允許偏差± 0.5min，超出允許偏差列為可疑特征峰。3. 根據權利要求2所述的基于指紋圖譜的微損鑒別交趾黃檀種屬的方法，其特征在于 上述保留時間的一致性偏差應小于〇.2min，避免色譜峰漂移影響分析結果。4. 根據權利要求1所述的基于指紋圖譜的微損鑒別交趾黃檀種屬的方法，其特征在于 上述質譜圖的一致性可參考收入安捷倫數據處理系統的譜庫的交趾黃檀提取物GC-MS 3D 指紋圖譜特征峰的質譜圖，并結合上述交趾黃檀種屬的標準GC-MS 3D指紋圖譜特征峰，以 保證樣品檢出的化學物質質譜圖得到合理解釋的匹配率大于90%，保證樣品檢出的化學物 質質譜圖檢索的一致性。5. 根據權利要求1所述的基于指紋圖譜的微損鑒別交趾黃檀種屬的方法，其特征在于 上述峰面積的響應值是待測質量離子峰高除以1/2平均噪聲高度，確定樣品檢出的化學物 質的檢出限，保證樣品檢出的化學物質峰面積D3響應值的檢出限和準確性。
【專利摘要】本發明涉及基于指紋圖譜的微損鑒別交趾黃檀種屬的方法。所述方法包括鉆頭微孔取樣，將待檢樣品加入溶劑超聲提取，以提取液總離子流色譜圖特征峰的保留時間D1、質譜圖D2和峰面積D3作為定性參數組成GC-MS？3D指紋圖譜，再通過核對待檢樣品的GC-MS？3D指紋圖譜中特征峰與標準交趾黃檀種屬的GC-MS？3D指紋圖譜中特征峰的3D數據匹配的一致性或相似性，來判定交趾黃檀種屬樣品的真偽。本發明利用有機物唯一性的質譜圖D2作為重要定性參數之一，再加上定性參數D1和D3，構成3D指紋圖譜，多層面“指”“紋”的確證保證交趾黃檀種屬進行準確判斷真偽的鑒別方法。本發明方法，實現了對交趾黃檀制品真偽的鑒別，結果準確可靠，且是微損取樣，取樣少易修復，不破壞制品的外觀。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105588892
【申請號】CN201510899947
【發明人】仇鎮武, 陳智勇, 黃明華, 胡傳寶, 謝梅妍, 郭佳, 張穎欣, 何舒敏, 梁永洪
【申請人】中山市中廣測協同創新中心
【公開日】2016年5月18日
【申請日】2015年12月9日