專利名稱：一種人工誘導花鰻鱺性腺發育成熟的方法
技術領域：
本發明屬于水產養殖領域，是一種鰻鱺的人工繁殖技術，具體涉及激素誘導花鰻鱺性腺發育成熟的方法。
背景技術：
花鰻鱺(Anguilla marmorata)俗名鱸鰻、花鰻、雪鰻、鱔王、溪鰻等，在分類學中屬于硬骨魚綱(Osteichthyes)、鰻鱺目(Anguilliformes)、鰻鱺科(Anguillidae)、鰻鱺屬 (Anguilla)，是鰻鱺屬魚類中分布最廣的種類，分布范圍東至太平洋的中部諸島，西至印度洋的馬達加斯加島，南至澳大利亞南部，北至朝鮮、日本南部。在我國主要見于海南、廣東、 福建、臺灣等省的河流及海域中。花鰻鱺是一種降海生殖洄游性魚類，在淡水河流湖泊中生長，性成熟后洄游到離海岸數千里之外的產卵場進行產卵。自然狀態下，鰻鱺在降海生殖洄游過程中完成性腺的發育，到達產卵場時性腺成熟。近年來，由于過度捕撈、環境污染、攔河建壩等人類活動加劇，花鰻鱺的自然資源明顯衰退，我國已將其列為二級保護動物。花鰻鱺不但肉質鮮美，營養價值高，而且有藥用價值，素有“淡水人參”之稱，系優質食用魚類。目前，海南等地積極發展花鰻鱺人工養殖業， 市場前景廣闊，產業發展勢頭良好，已成為淡水養殖的名貴新品種。然而，鰻鱺屬魚類的人工繁殖技術至今仍未解決。養殖鰻苗全部依賴于捕撈野生鰻苗，造成自然資源的急劇衰退。鰻鱺的人工繁殖技術屬于世界性的難題，相關研究始于上個世紀40年代，由于其生活史的特殊性，國內外學者做了大量的研究工作，現有的人工誘導鰻鱺方法主要依賴多次注射外源激素，并在日本鰻鱺上已獲得階段性成功。然而，花鰻鱺人工催產催熟的研究在國內外是一片空白，本方法通過人工誘導花鰻鱺催產催熟，將為花鰻鱺的人工繁殖打下基石出。

發明內容
本發明的目的在于提供一種人工誘導花鰻鱺性腺發育成熟的方法，解決花鰻鱺在人工飼養條件下，其性腺無法自然發育成熟的問題。本發明所提供的誘導花鰻鱺性腺發育成熟的方法如下(1)親魚的馴養親魚選用3齡以上的健康人工塘養花鰻鱺；其中挑選的雄性花鰻鱺規格要求體重0. 425-0. 875kg,體長55_66cm ；挑選的雌性花鰻鱺規格要求體重 1. 305-2. 89kg，體長73-99cm。馴養期間水溫控制在22_26°C ；全天M小時避光；活餌料和鰻魚粉混合投喂，每日3次；親魚養殖密度為1尾/缸(規格為IOOcmX60cmX50cm的玻璃缸)；馴養時間為1個月。(2)馴養結束后，停止投喂，雌性花鰻鱺需要過度至半海水后開始催熟，而雄性花鰻鱺在淡水中進行催熟。(3)誘導性腺發育成熟雄性花鰻鱺采用肌肉注射HCG進行催熟；雌性花鰻鱺采用肌肉注射LHRH-A2和鯉魚腦垂體勻漿進行催熟。
其特征在于(1)親魚選用3齡以上健康塘養花鰻鱺；馴養期間水溫控制在22_26°C ；全天M小時避光；活餌料和鰻魚粉混合投喂，每日3次；親魚養殖密度為1尾/缸；馴養時間為1個月。(2)雌性花鰻鱺催產池逐步增加鹽度至半海水，每日鹽度提高2-3，直至鹽度為
14-17為止。(3)雄性花鰻鱺在催熟期間均采用淡水培育。(4)雄性花鰻鱺采用肌肉注射HCG進行催熟，劑量為500U/kg ·體重，每周注射一次，注射6周；雌性花鰻鱺采用肌肉注射LHRH-A2和鯉魚腦垂體(CPE)勻漿進行催熟， LHRH-A2劑量為250 μ g/kg ·體重，CPE的劑量為4粒/kg ·體重，每7-9天注射一次，注射
15-18次。在誘導雄性花鰻鱺精巢發育成熟過程中，分別對在海水和淡水的中雄性花鰻鱺的催熟效果對比，結果顯示兩組魚的精巢均發育成熟，其精子活力均在15%左右，快速運動時間和壽命沒有明顯差異，說明雄性花鰻鱺在海水和淡水中的催熟效果是一樣的。因此，在淡水中進行雄性花鰻鱺催熟是本發明專利技術的一個創新點，這樣會減少不必要的人力和物力的損耗。采用LHRH-A2和鯉魚腦垂體勻漿的混合物誘導雌性花鰻鱺性腺發育成熟是本發明專利技術的又一個創新點，利用促性腺激素釋放素類似物誘導花鰻鱺自身產生內源型促性腺激素，并且配合外源促性腺激素(鯉魚腦垂體)共同作用，效果良好。通過實施本方案，親魚性腺發育成熟，腹部明顯突起，用手撫摸腹面凸處，明顯感到性腺松軟有彈性。在任意挑選的15尾實驗組雌魚中，5尾卵巢發育完全成熟，平均 GSI(性腺系數)為20.9 士 5. 04% (最大達到27.3%) ；5尾卵巢發育至成熟期，平均GSI為 7. 2士2. 86% ；5尾卵巢發育至卵黃生成期，平均GSI為2. 32士 1.5% ；而對照組的性腺停留在未發育的II期(GSI為1. 18士0. 39%)，解剖實驗組雌魚人工催產催熟觀察發現，卵巢上可見大量卵子。而雄性花鰻鱺GSI (性腺系數)達到9. 5士2. 1%，擠壓腹部可收集到乳白色精液。


圖1 對照組雄性花鰻鱺腹部解剖2 實驗組雄性花鰻鱺腹部解剖3 對照組雌性花鰻鱺腹部解剖4 實驗組雌性花鰻鱺腹部解剖圖
具體實施例方式下列實施方法是本發明的一個具體應用實例，而不僅限于此實例。(1)將收集的人工塘養鰻鱺按1尾/缸的密度放入玻璃缸中馴養，采用室內循環水養殖系統，全天M小時避光，水溫控制在22-26°C。馴養時間為1個月，馴養期間活餌料和鰻魚粉混合投喂，每日3次，每次投喂3小時后將吃剩的飼料清理干凈。(2)親魚從淡水進入半海水需要經過滲透壓及生理調節的整個過程，需要一定時間。雌性花鰻鱺鹽度調節期間不投喂餌料。停止投喂的第2天起，每日鹽度提高2-3，直至鹽度提高到14-17為止，歷時7-9天，觀察親魚若有不適表現，立即停止提高鹽度，等親魚狀態穩定后再繼續增加鹽度直至達到要求為止。(3)過渡半海水后開始花鰻鱺催熟實驗。雄性花鰻鱺催熟過程將親魚從玻璃缸中撈出，放入冰水混合物中麻醉10-20分鐘；麻醉后使用浸過冰水的毛巾包住親魚頭部，將魚類生理鹽水溶解的HCG(劑量為500U/kg 體重)，注射器從背部肋間扎入，注射完畢后在針孔處擦涂紅霉素軟膏，以防止感染，每周注射一次，共注射6次。雌性花鰻鱺催熟過程將親魚從玻璃缸中撈出，放入冰水中麻醉10-20分鐘后，用浸過冰水的毛巾包住其頭部，用魚類生理鹽水溶解的LHRH-A2和鯉魚腦垂體(CPE)勻漿，采用ImL注射器肌肉注射，LHRH-A2 劑量為250 μ g/kg ·體重，CPE的劑量為4粒/kg ·體重，注射完畢后在針孔處擦涂紅霉素軟膏，以防止感染，每7-9天注射一次，共注射15-18次。通過實施本方案，親魚性腺發育成熟，腹部明顯突起，用手撫摸腹面凸處，明顯感到性腺呈松軟狀態。解剖發現雌性花鰻鱺的卵巢上可見大量卵子；雄性花鰻鱺通過擠壓腹部可收集到乳白色精液。這為進一步研究花鰻鱺的全人工繁殖提供了前期的技術保證。
權利要求
1.一種人工誘導花鰻鱺性腺發育成熟的方法，其步驟和方法包括(1)親魚的馴養親魚選用3齡以上的健康人工塘養花鰻鱺；馴養期間水溫控制在 22-260C ；全天M小時避光；活餌料和鰻魚粉混合投喂，每日3次；親魚養殖密度為1尾/ 缸；馴養時間為1個月。(2)馴養結束后，停止投喂，雌性花鰻鱺需要過度至半海水后開始催熟；而雄性花鰻鱺在淡水中進行催熟。(3)誘導性腺發育成熟雄性花鰻鱺采用肌肉注射HCG進行催熟；雌性花鰻鱺采用肌肉注射LHRH-A2和鯉魚腦垂體勻漿進行催熟。
2.按照權利要求1所述的誘導花鰻鱺性腺發育的方法，其特征在于親魚選用塘養花鰻鱺；其中挑選的雄性花鰻鱺規格要求體重0. 425-0. 87^g，體長55-66cm ；挑選的雌性花鰻鱺規格要求體重1. 305-2. 89kg，體長73-97cm。馴養期間水溫控制在2246°C ；全天M 小時避光；活餌料和鰻魚粉混合投喂，每日3次；親魚養殖密度為1尾/缸；馴養時間為1個月。
3.按照權利要求1所述的誘導花鰻鱺性腺發育的方法，其特征在于；逐步增加鹽度至半海水，每日鹽度提高2-3，直至鹽度調為14-17為止。
4.按照權利要求1所述的誘導花鰻鱺性腺發育的方法，其特征在于雄性花鰻鱺采用肌肉注射HCG進行催熟，劑量為500U/kg·體重，每周注射一次，注射時間為6周；雌性花鰻鱺采用肌肉注射LHRH-A2和鯉魚腦垂體(CPE)勻漿進行催熟，LHRH-A2劑量為250 μ g/kg 體重，CPE的劑量為4粒/kg ·體重，每7-9天注射一次，注射次數為15-18次。
全文摘要
本發明公開了一種人工誘導花鰻鱺性腺發育成熟的方法，其方法如下雄性花鰻鱺采用肌肉注射HCG進行催熟，劑量為500U/kg·體重，每周注射一次，注射時間為6周；雌性花鰻鱺采用肌肉注射LHRH-A2和鯉魚腦垂體(CPE)勻漿進行催熟，LHRH-A2劑量為250μg/kg·體重，CPE的劑量為4粒/kg·體重，每7-9天注射一次，注射次數15-18次。通過實施本方案，親魚性腺發育成熟，腹部明顯突起，用手撫摸腹面凸處，明顯感到性腺呈松軟狀態，雌性花鰻鱺可以排出成熟卵子；雄性花鰻鱺通過擠壓腹部可收集到乳白色精液。這為進一步研究花鰻鱺的全人工繁殖提供了前期的技術保證。
文檔編號A01K61/00GK102232363SQ20101016955
公開日2011年11月9日 申請日期2010年4月26日 優先權日2010年4月26日
發明者周雯伊, 尹紹武, 林浩然, 駱劍, 齊興柱, 齊鑫 申請人:海南大學