專利名稱：皺紋盤鮑精子冷凍保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種皺紋盤鮑精子的保存方法，尤其是一種保存期長、存活率高、運輸 方便的皺紋盤鮑精子冷凍保存方法。
背景技術(shù)：
皺紋盤鮑(Haliotis discushannai)的營養(yǎng)價值較高，被稱為“軟黃金”，在國際市 場上每噸售價達(dá)4 6萬美元，為此，皺紋盤鮑的人工繁殖或增養(yǎng)殖發(fā)展迅速。但是由于多 年人工繁殖導(dǎo)致苗種質(zhì)量下降，人工育苗期間稚鮑剝離后大量死亡、單位面積和總體出苗 率降低，不但嚴(yán)重影響了養(yǎng)成用苗，而且養(yǎng)殖成鮑也會出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。為解決苗種質(zhì)量下降 的問題，每年需從原產(chǎn)地選取雄性種鮑，采集其精子后再與養(yǎng)殖地雌性種鮑所產(chǎn)的卵子人 工受精。長途運輸種鮑不但占用空間大、運輸成本高，而且會造成種鮑死亡，同時還存在著 檢疫繁瑣等問題。另外從種質(zhì)資源保護(hù)的角度考慮也需要建立精子庫，以進(jìn)行遺傳學(xué)方面 的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述技術(shù)問題，提供一種保存期長、存活率 高、運輸方便的皺紋盤鮑精子冷凍保存方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種皺紋盤鮑精子冷凍保存方法，其特征是將按如下 步驟進(jìn)行a.用消毒的自然海水將活力90%以上的精子稀釋至8X IO8 11 X IO8個/ml，得 到精子稀釋液；b.將精子稀釋液與抗凍液按體積比1 2混合并裝入冷凍管中，冰箱內(nèi)4°C預(yù)冷 10 15min，置于液氮罐內(nèi)液氮面上方8cm處15min，再浸入液氮中，所述抗凍液是將甘油、 二甲基亞砜及煮沸消毒海水混合制成混合液，各組分體積百分比分別為甘油8%、二甲基亞 砜10%、水82%，再向混合液中加入蔗糖及海藻糖，蔗糖的加入量為2. 5g/100ml，海藻糖的 加入量為0. 95g/100ml。本發(fā)明所保存的皺紋盤鮑精子保存期長、運輸方便，解凍后成活率可達(dá)70%、受精 率達(dá)40 %，可避免長途運輸種鮑所存在的占用空間大、運輸成本高、種鮑死亡及檢疫繁瑣等 問題，可用于皺紋盤鮑精子庫的建立、鮑的引種和雜交，利于皺紋盤鮑的種質(zhì)資源保護(hù)。
具體實施例方式a.用消毒的自然海水(現(xiàn)有養(yǎng)殖皺紋盤鮑用海水)將活力90%以上的精子稀釋 至8 X IO8 11 X IO8個/ml，得到精子稀釋液；b.將精子稀釋液與抗凍液按體積比1 2混合并裝入冷凍管中，冰箱內(nèi)4°C預(yù)冷 10 15min，置于液氮罐內(nèi)液氮面上方8cm處保持15min，再浸入液氮中，所述抗凍液是將甘 油、二甲基亞砜及煮沸消毒 海水混合制成混合液，各組分體積百分比分別為甘油8%、二甲基亞砜10%、水82%，再向混合液中加入蔗糖(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品)及 海藻糖(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品)，蔗糖的加入量為2. 5g/100ml，海藻糖的加入量 為 0. 95g/100ml。 需要使用精子時，將冷凍管從液氮罐中取出，置于20°C水中解凍。解凍后精子成活 率70%，將精子與卵子人工受精，受精率為40%。
權(quán)利要求
一種皺紋盤鮑精子冷凍保存方法，其特征是將按如下步驟進(jìn)行a.用消毒的自然海水將活力90％以上的精子稀釋至8×108～11×108個/ml，得到精子稀釋液；b.將精子稀釋液與抗凍液按體積比1∶2混合并裝入冷凍管中，冰箱內(nèi)4℃預(yù)冷10～15min，置于液氮罐內(nèi)液氮面上方8cm處15min，再浸入液氮中，所述抗凍液是將甘油、二甲基亞砜及煮沸消毒海水混合制成混合液，各組分體積百分比分別為甘油8％、二甲基亞砜10％、水82％，再向混合液中加入蔗糖及海藻糖，蔗糖的加入量為2.5g/100ml，海藻糖的加入量為0.95g/100ml。
全文摘要
本發(fā)明公開一種保存期長、存活率高、運輸方便的皺紋盤鮑精子冷凍保存方法，按如下步驟進(jìn)行用消毒的自然海水將活力90％以上的精子稀釋至8×108～11×108個/ml，得到精子稀釋液；將精子稀釋液與抗凍液按體積比1∶2混合并裝入冷凍管中，冰箱內(nèi)4℃預(yù)冷10～15min，置于液氮罐內(nèi)液氮面上方8cm處15min，再浸入液氮中，所述抗凍液是將甘油、二甲基亞砜及煮沸消毒海水混合制成混合液，各組分體積百分比分別為甘油8％、二甲基亞砜10％、水82％，再向混合液中加入蔗糖及海藻糖，蔗糖的加入量為2.5g/100ml，海藻糖的加入量為0.95g/100ml。
文檔編號A01N1/02GK101828546SQ20101017880
公開日2010年9月15日 申請日期2010年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月21日
發(fā)明者劉志丹, 李霞, 王 琦, 秦艷杰 申請人:大連水產(chǎn)學(xué)院