荔枝花粉收集保存方法
【專利摘要】本發明公開了荔枝花粉的收集保存方法，屬于果樹授粉【技術領域】。其采集保存方法步驟是：1、采集發育階段成熟未開裂的荔枝花藥，將采集到的花藥裝入玻璃培養皿中；2、將上述裝有花藥的玻璃培養皿放入干燥箱中，利用干燥箱進行對玻璃培養皿內的花藥進行干燥處理；3、將干燥結束的花藥和散出來的花粉倒入不銹鋼篩，過篩后裝入離心管；4、將上述裝入離心管的花粉密封，放入-86℃以下超低溫冰箱保存。本發明方法簡便易行，不同天氣條件下均可進行收集，獲得的花粉發芽率高，保存時間最長。
【專利說明】荔枝花粉收集保存方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于果樹授粉【技術領域】，更具體涉及一種荔枝花粉的收集保存方法。
【背景技術】
[0002]荔枝是廣東、廣西、海南和福建等四省區最重要的水果。目前荔枝產業存在品種結構不合理和成熟期非常集中二大難題，而品種創新是解決這二大難題不可缺的一個重要環節。一直以來，主要通過實生選種實現荔枝品種的創新。由于長期采取嫁接、圈枝的無性繁殖方法，單一品種的種植，以及因土地征收導致的許多種質資源的丟失，產區荔枝的遺傳多樣性不斷喪失，通過實生選種實現荔枝品種的創新難以為繼。人工雜交育種將是荔枝品種創新的主要途徑，花粉的收集保存是荔枝人工雜交育種實現種質創新的重要環節。
[0003]目前關于荔枝花粉的收集保存沒有成熟的技術。前人研究的荔枝花粉收集保存方法，僅適用于花粉即采即用和花期相遇的品種之間授粉，以及早熟品種的花粉授晚熟品種，最長在_30°C冰箱內貯藏150天，只能滿足當年授粉需要，不能解決第二年授粉的問題。并且，前人的干燥方法多采用太陽光自然晾曬，這種方法受限于天氣狀況，而且干燥效果不穩定。

【發明內容】

[0004]本發明的目的在于提供一種荔枝花粉的收集、干燥、保存方法，貯存一年發芽率不變可用于第二年的人工授粉，解決因自然環境不良等原因造成的荔枝品種授粉受精困難問題，滿足授粉的需要，特別是早熟品種的人工授粉，同時對荔枝種質創新具有重要的應用價值。
[0005]經長期的調研發現，荔枝雄花發育可分為三個階段，第一階段，花藥剛伸出雄花花托，花絲不明顯；第二階段，花絲伸長一半`；第三階段，花絲伸長充分但花藥沒有開裂。在雄花發育第一階段提取花藥并干燥，沒有發現成熟的花粉；雄花發育第二階段和第三階段提取花藥并干燥，大量成熟的花粉存在。因此，成熟花藥定義為雄花發育第二階段至第三階段的花藥。為此，本荔枝花粉(花藥)采摘的標準是:采摘成熟未開裂的花藥，即該花藥指雄花發育第二階段至第三階段的花藥，即花絲伸長一半或充分伸長但花藥沒有開裂的。
[0006]采回來的花藥，如在陰雨天氣摘采時，可將花藥先放置在吸水紙上，利用吸水紙將花藥表面上的水吸干，再將花藥裝在玻璃培養皿內，裝入的花藥量以均勻鋪開以能均勻干燥為準，優選為均勻鋪開兩層內的花藥厚度。花藥裝好后將其放入干燥箱內，而花藥的干燥是花粉收集保存的重要環節。經研究發現荔枝花藥干燥的第I個小時，水分揮發最快，達到每小時水分相對揮發量42.65% ;干燥的第2個小時，每小時水分相對揮發量20.10% ;從第3個小時開始，水分揮發很少。同時，干燥過程中花藥的開裂節奏較水分的揮發節奏慢，干燥的第I小時出粉率只有10%，第2小時出粉率62%，第3小時出粉率85%，第4小時出粉率達到93%。因此荔枝花藥干燥過程可分成二個階段，最初的2小時是水分揮發階段，第2-3小時是花藥開裂階段。干燥溫度45°C~50°C，會導致荔枝花粉發芽率明顯下降，花藥出粉率也低于70% ;干燥溫度30°C~35°C，不會導致花粉發芽率下降，但干燥時間影響花藥出粉率。因此本發明綜合提出了荔枝花藥干燥的適宜技術指標，這種干燥技術不受天氣條件影響，任何天氣條件下均可采集荔枝花粉。這技術就是利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理，處理時分為花藥水分揮發階段和花藥開裂階段，其水分揮發階段在40°C下進行，花藥開裂階段在30°C~35°C下進行。
[0007]具體的干燥箱進行對 玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理操作是:首先用40°C溫度去除花藥水分的50-60% ;然后下調溫度至35°C去除花藥的大部分水分；最后將溫度再次下調至27°C~28°C，將花藥干燥至開裂階段即可。其干燥時間，可視采摘回來的花藥干燥程度而定，當晴好天氣時，首先設定溫度40°C干燥2小時，然后設定溫度35°C，干燥I小時，最后設定溫度27°C~28°C，干燥I~2小時；當陰雨天時，首先設定溫度40°C干燥2小時，然后設定溫度35°C，干燥2小時，最后設定溫度27°C~28°C，干燥4~6小時。
[0008]將花藥干燥后，利用150目不銹鋼篩篩選出花粉，倒入2ml容量的離心管，密封后放置_86°C以下超低溫冰箱保存即可完成保存。
[0009]關于貯藏溫度，其它植物的花粉有報道在液氮中貯藏效果較好，但貯存液氮中存在貯存前預冷及使用前解凍的問題，在這些過程中對荔枝花粉發芽率影響較大，本發明采用-86°C以下超低溫冰箱貯存避免了以上的問題，取得了良好的保存效果。
[0010]經上述調研發現得出，本發明的目的可以通過如下技術方案達到:
[0011]荔枝花粉的收集保存方法，其采集保存方法步驟是:
[0012]1、采集發育階段成熟未開裂的荔枝花藥，將采集到的花藥裝入玻璃培養皿中；
[0013]2、將上述裝有花藥的玻璃培養皿放入干燥箱中，利用干燥箱進行對玻璃培養皿內的花藥進行干燥處理；
[0014]3、將干燥結束的花藥和散出來的花粉倒入不銹鋼篩，過篩后裝入離心管；
[0015]4、將上述裝入離心管的花粉密封，放入_86°C以下超低溫冰箱保存。
[0016]本發明的目的還可以通過如下技術方案達到:
[0017]本發明的一種實施方案是:所述的花藥采摘的標準:采摘成熟未開裂的花藥，該花藥指雄花發育第二階段至第三階段的花藥，即花絲伸長一半或充分伸長但花藥沒有開裂的。
[0018]本發明的一種實施方案是:所述的花藥裝在玻璃培養皿的厚度以花藥2層以內為且。
[0019]本發明的一種實施方案是:晴好天氣時，利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理時，首先設定溫度39-41°C干燥1.5-2.5小時，然后設定溫度34-36°C，干燥
0.5-1.5小時，最后設定溫度27°C~28°C，干燥I~2小時。
[0020]本發明的一種實施方案是:利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理時，首先設定溫度40°C干燥2小時，然后設定溫度35°C，干燥I小時，最后設定溫度27°C，干燥1.5小時。
[0021]本發明的一種實施方案是:陰雨天氣時，所述采摘回的花藥先放置在吸水紙上吸水，然后再及時干燥，利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理時，首先設定溫度39-41°C干燥1.5-2.5小時，然后設定溫度34-36°C，干燥0.5-1.5小時，最后設定溫度27°C~28°C，干燥4~6小時。[0022]本發明的一種實施方案是:利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理時，首先設定溫度40°C干燥2小時，然后設定溫度35°C，干燥2小時，最后設定溫度27°C，干燥5小時。
[0023]本發明的一種實施方案是:所述的不銹鋼篩為150目鋼篩。
[0024]本發明的一種實施方案是:所述的離心管為2ml容量的離心管。
[0025]本發明的有益效果
[0026]1、本發明通過試驗得出荔枝花藥采集的最佳發育階段，比以前的收集方法更高效，獲得的花粉發芽率更高，保存時間最長，可以第二年使用。
[0027]2、本方法收集的荔枝花粉采用離心管低溫貯藏，可保存一年發芽率不變，保存的時間長，不僅滿足當年授粉需求而且可實現第二年人工授粉，特別是解決了荔枝早熟品種的授粉問題，提高經濟效益。
[0028]3、本發明根據不同氣候采摘回來不同的花粉，利用平鋪在玻璃培養皿內，使用不同的干燥時間，提高干燥花藥的干燥度和保存時間。
[0029]4、本發明為荔枝雜交育種研究，新組合的創制提供了可能，對荔枝新品種的選育具有重要應用價值。如早熟品種授晚熟品種的花粉實現自然雜交不可能出現的組合；可以進行荔枝和龍眼或者紅毛丹的遠緣雜交；花期不遇的荔枝親本間雜交；本發明的應用可以極大的豐富荔枝雜交育種的組合范圍，豐富荔枝資源的遺傳多樣性。
[0030]5、本方法簡便易行，不同天氣條件下均可進行收集，可實現荔枝花粉的大量收集貯藏。
【具體實施方式】
[0031]本發明下面將結合實施例作進一步詳述
[0032]實施例1:晴天的收集保存方法
[0033](I)花藥的采集
[0034]花藥采摘的標準:只采摘成熟未開裂的花藥，就是雄花發育第二階段至第三階段的花藥，即花絲伸長一半或充分伸長但花藥沒有開裂的。采摘過程中手或者鑷子的使用要輕巧，盡量減少對花藥的機械傷。
[0035](2)花藥的干燥
[0036]將采摘的花藥裝入玻璃培養皿中放入干燥箱，首先，設定溫度40°C干燥2小時，然后設定溫度35°C，干燥I小時，最后設定溫度27°C~28°C，干燥I~2小時。花藥裝在玻璃培養皿的厚度以2層以內為宜。
[0037](3)花粉的保存
[0038]把干燥結束的花藥和散出來的花粉從玻璃培養皿倒進150目不銹鋼篩，不銹鋼篩放置在相應的玻璃培養皿上面，承接過篩的花粉。把過篩后的花粉從玻璃培養皿倒在硫酸紙上，然后把硫酸紙卷成漏斗狀，把花粉倒進2ml容量的離心管。再把裝有花粉的離心管放入離心管盒，然后將離心管盒放進_86°C超低溫冰箱保存。
[0039]實施例2:陰雨天的收集保存方法
[0040](I)花藥的采集
[0041]花藥采摘的標準:只采摘成熟未開裂的花藥，就是雄花發育第二階段至第三階段的花藥，即花絲伸長一半或充分伸長但花藥沒有開裂的。
[0042]陰雨天采摘花藥，需要提前搖花，盡量抖落花穗的水滴。采摘過程中手或者鑷子的使用要輕巧，盡量減少對花藥的機械傷。采摘回的花藥先倒在吸水紙上面吸水，利用吸水紙將花藥表面的水吸掉，然后再放置干燥箱及時干燥。
[0043](2)花藥的干燥
[0044]將采摘的花藥裝入玻璃培養皿中放入干燥箱，首先，設定溫度40°C干燥2小時，然后設定溫度35°C，干燥2小時，最后設定溫度27°C~28°C干燥4~6小時。花藥裝在玻璃培養皿的厚度以2層以內為宜。
[0045](3)花粉的保存[0046]把干燥結束的花藥和散出來的花粉從玻璃培養皿倒進150目不銹鋼篩，不銹鋼篩放置在相應的玻璃培養皿上面，承接過篩的花粉。把過篩后的花粉從玻璃培養皿倒在硫酸紙上，然后把硫酸紙卷成漏斗狀，把花粉倒進2ml容量的離心管，把裝有花粉的離心管放入離心管盒，然后將離心管盒放進_86°C超低溫冰箱保存。
【權利要求】
1.荔枝花粉的收集保存方法，其特征在于:其采集保存方法步驟是: ①采集發育階段成熟未開裂的荔枝花藥，將采集到的花藥裝入玻璃培養皿中； ②將上述裝有花藥的玻璃培養皿放入干燥箱中，利用干燥箱進行對玻璃培養皿內的花藥進行干燥處理； ③將干燥結束的花藥和散出來的花粉倒入不銹鋼篩，過篩后裝入離心管； ④將上述裝入離心管的花粉密封，放入-86°C以下超低溫冰箱保存。
2.根據權利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:所述的花藥采摘的標準:采摘成熟未開裂的花藥，該花藥指雄花發育第二階段至第三階段的花藥，即花絲伸長一半或充分伸長但花藥沒有開裂的。
3.根據權利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:所述的花藥裝在玻璃培養皿的厚度以花藥2層以內為宜。
4.根據權利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:晴好天氣時，利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理時，首先設定溫度39-41°C干燥1.5-2.5小時，然后設定溫度34-36°C，干燥0.5-1.5小時，最后設定溫度27°C~28°C，干燥I~2小時。
5.根據權利要求4所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理時，首先設定溫度40°C干燥2小時，然后設定溫度35°C，干燥I小時，最后設定溫度27°C，干燥1.5小時。
6.根據權利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:陰雨天氣時，所述采摘回的花藥先放置在吸 水紙上吸水，然后再及時干燥，利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理時，首先設定溫度39-41 °C干燥1.5-2.5小時，然后設定溫度34_36°C，干燥0.5-1.5小時，最后設定溫度27°C~28°C，干燥4~6小時。
7.根據權利要求6所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:利用干燥箱進行對玻璃培養皿中的花藥進行干燥處理時，首先設定溫度40°C干燥2小時，然后設定溫度35°C，干燥2小時，最后設定溫度27°C，干燥5小時。
8.根據權利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:所述的不銹鋼篩為150目鋼篩。
9.根據權利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:所述的離心管為2ml容量的離心管。
【文檔編號】A01H1/02GK103719076SQ201310729121
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月25日 優先權日:2013年12月25日
【發明者】歐良喜, 王麗敏, 陳潔珍, 蔡長河, 付丹文, 張春陽, 王曉容 申請人:廣東省農業科學院果樹研究所