專利名稱：油棕花粉超低溫保存法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種花粉保存方法，具體是一種油棕花粉超低溫保存法。
背景技術(shù)：
油棕屬多年生單子葉植物，是熱帶木本油料作物，其果肉、果仁含油豐富，有“世界 油王”之稱，棕油主要用來制造肥皂、潤滑油、化妝品等，也是紡織業(yè)、制革業(yè)、鐵皮鍍錫的輔 助劑等，棕油精煉后是營養(yǎng)價值極高的食用油脂，可制造人造奶油，具有較高的經(jīng)濟(jì)價值。 油棕是異花授粉植物，雌雄花序交替開放，通常靠風(fēng)媒和蟲媒授粉。授粉是影響油棕產(chǎn)量的 重要因素之一，主要表現(xiàn)在(1)授粉不足導(dǎo)致產(chǎn)量降低，特別是在幼齡油棕園；(2)油棕園 雄花數(shù)量以及雌雄花比例也影響油棕的授粉結(jié)實，特別是在雨季，風(fēng)媒和蟲媒授粉能力降 低，導(dǎo)致產(chǎn)量下降；(3)油棕園中其他昆蟲如蜜蜂等的采集，導(dǎo)致花粉量大幅度減少，授粉 不足。因此，人工控制授粉是必要的，而采用保存的花粉用于人工控制授粉是克服油棕授粉 不足的主要措施之一，因為保存的花粉用于人工授粉不但可以保持產(chǎn)量而且在油棕雜交育 種工作中也是很重要的。花粉的長期保存技術(shù)不但是保存單倍體植物資源的有效方法，而且能夠克服在育 種工作中存在的時空障礙。目前油棕花粉的長期保存方法主要有以下兩種(一)是把真空干燥后的花粉(剩余含水量為3-4%)在低溫下貯存(-10°C、-15°C 和-20°C )，貯存時間不超過1年。其主要缺點是貯存時間短；保存后的花粉萌發(fā)力低，結(jié)實 率差，正常胚的百分比低；干燥花粉在制備時其剩余含水量很難達(dá)到3-4%，且制備程序繁 瑣；(二)是把干燥的花粉(剩余含水量為23. 3%)裝入冷凍管中直接貯存在液氮中， 然后再將冷凍管放至冷凍庫中(汽化液氮，-170°C -180°C)，貯存時間可達(dá)8年。其主要 缺點是花粉保存的成本太高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種油棕花粉超低溫保存法，利用超低溫條件下所有植物組 織的代謝活動停止的特性，在超低溫下對油棕花粉進(jìn)行保存，有效地使花粉的活性保持下 來，具有工藝簡單、成本低、花粉萌發(fā)率高等特點。超低溫保存已經(jīng)成為一種花粉長期保存的有效方法，其關(guān)鍵在于降溫過程中避免 花粉細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰，化凍過程中防止細(xì)胞內(nèi)再次結(jié)冰。因此，花粉的剩余含水量是決定油棕花 粉超低溫保存成敗的關(guān)鍵。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案一種油棕花粉超低溫保存法，是將采集的新鮮油棕花粉用80 100目篩子過篩， 以去除其中雜質(zhì)，然后用電熱恒溫鼓風(fēng)干烘箱在37 40°C條件下連續(xù)干燥12小時以上， 使油棕花粉的剩余含水量為8 9% ；將干燥后的油棕花粉裝入冷凍管中直接投入到液氮 (-170 -196°C)中預(yù)凍處理1 2小時，然后再移入到-70°C以下的超低溫冰箱中保存，化凍時將超低溫保存的油棕花粉用常溫自來水沖洗0. 5 1分鐘即可化凍。為了保持油棕花粉的新鮮度，新鮮花粉在短途運輸(24小時以內(nèi))過程中采用塑 料封口袋攜帶，在長途運輸(120小時以內(nèi))過程中采用冰盒(冰盒內(nèi)裝冰塊，冷凍管裝入 花粉后放入冰盒中)攜帶。本發(fā)明工藝簡單，成本低，在控制花粉剩余含水量的前提下于超低溫下對油棕花 粉進(jìn)行保存，有效地實現(xiàn)油棕花粉的長期保存，具有保存成本低、貯存時間長、花粉萌發(fā)率
高等優(yōu)點。
具體實施例方式以下對本發(fā)明的操作過程做進(jìn)一步描述，并介紹本發(fā)明的相關(guān)研究結(jié)果。1、操作過程于晴天上午9-11時采集新鮮花粉，根據(jù)運輸距離或時間長短，采用 冰盒或塑料封口袋裝入花粉并帶回試驗室，新鮮花粉用80-100目篩子過篩去雜后，用量勺 量取過篩后的花粉倒入上述規(guī)格的篩子中，將花粉均勻地抖落在硫酸紙或墊有硫酸紙的培 養(yǎng)皿上，然后放入37-40°C的恒溫干燥箱中干燥12小時以上，使花粉剩余含水量為8-9%， 將上述烘干干燥花粉(約0. 5克)裝入2ml內(nèi)螺紋冷凍管中，扭緊管蓋后直接投入到液氮 中(-196°C)預(yù)凍處理1-2小時，然后將裝有花粉的冷凍管移入超低溫冰箱(-70°C以下) 中保存，保存3、6、12個月后，從超低溫冰箱中取出并立即用常溫自來水沖洗化凍0. 5-1分 鐘。將化凍后的油棕花粉與滑石粉按1 10的比例混勻后直接用于油棕樹的授粉，油棕果 實成熟后采果觀測其果實性狀和產(chǎn)量水平。2、結(jié)果分析1)、不同攜帶方式與花粉萌發(fā)率關(guān)系對需要長途或長時間進(jìn)行花粉運輸?shù)模刹捎帽羞M(jìn)行攜帶，攜帶時間不宜超過 120小時；對短途或長時間運輸?shù)模刹捎盟芰戏饪诖鼣y帶，并在24小時內(nèi)帶回試驗室進(jìn)行 保存。所得結(jié)果列表如表1。表1不同攜帶方式與花粉萌發(fā)率關(guān)系 說明新鮮或烘干干燥花粉在花粉萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)1-2小時后，在電子顯微鏡 (目鏡為8倍)下觀測其萌發(fā)粒數(shù)，并計算萌發(fā)率，每個處理(培養(yǎng)基)觀測3個顯微鏡視 野，每個視野200-350粒花粉。下同。2)、油棕花粉剩余含水量與其萌發(fā)率關(guān)系 新鮮花粉在37-40 °C條件下烘干干燥12小時，使其剩余含水量達(dá)8-9 %，即可用于 超低溫保存，可大幅度提高花粉萌發(fā)率(見表2)，而未經(jīng)干燥的新鮮花粉在預(yù)凍(液氮)處 理結(jié)束后其萌發(fā)率就已經(jīng)大幅度下降。表2油棕花粉剩余含水量與其萌發(fā)率關(guān)系 說明(1)花粉干燥時間為12h ； (3)花粉含水量測定新鮮花粉在125°C連續(xù)干燥 至恒重含水量。3)、預(yù)凍處理(液氮)與花粉萌發(fā)率關(guān)系將干燥花粉裝入2ml的內(nèi)螺紋冷凍管中，扭緊管蓋后直接投入到液氮中(_196°C ) 預(yù)凍處理1-2小時。液氮預(yù)凍處理1、2、24小時后，花粉仍保持較高的萌發(fā)率(結(jié)果見表 3)，其中以預(yù)處理2小時的最高。但不同液氮預(yù)處理之間無顯著差異。表3預(yù)凍處理(液氮)與花粉萌發(fā)率關(guān)系 說明花粉烘干干燥溫度為37°C，干燥時間為12h，花粉剩余含水量為8. 35%。4)、冷凍保存(-70°C )與花粉萌發(fā)率關(guān)系將預(yù)凍處理后的花粉移入到超低溫冰箱(-70°C)中冷凍保存3、6、12個月，然后取 出并立即用常溫自來水沖洗化凍0.5-1.0分鐘(表5)。由表4可見，花粉萌發(fā)率隨冷凍保 存時間的延長而略有下降，但仍然保持較高的萌發(fā)活力。
表4冷凍保存(_70°C )與花粉萌發(fā)率關(guān)系 說明(1)液氮預(yù)處理時間為2小時；⑵對照為新鮮花粉。5)、不同化凍方法與花粉萌發(fā)率關(guān)系新鮮花粉液氮預(yù)處理2小時后，取出并立即用常溫自來水自來水沖洗化凍，由表5 可見，在4種化凍方式中(常溫自來水、溫水、冰水和室溫放置(自然解凍))，以常溫自來水 沖洗化凍0. 5-1分鐘的花粉萌發(fā)率較高，其中化凍1分鐘的最高。同時，試驗也再次證明， 新鮮花粉由于含水量高(38.8% )，預(yù)凍處理后其萌發(fā)率大幅度下降。表5不同化凍方法與花粉萌發(fā)率關(guān)系 6)、超低溫保存花粉大田應(yīng)用效果評價將經(jīng)超低溫保存花粉與滑石粉按1 10的比例混勻后直接用于油棕樹的授粉。由 表6可見，超低溫保存花粉授粉后，與自然授粉相比，其授粉稔實率均達(dá)到100 %，但由于采 用人工授粉，果穗重、果穗粒數(shù)以及果實正常胚比例均要好于自然授粉結(jié)實。
表6超低溫保存花粉大田應(yīng)用效果評價 說明(1)花粉在37°C條件下連續(xù)烘干干燥12小時，液氮預(yù)凍2小時，常溫自來水 化凍1分鐘；(2)授粉處理均為單株單穗，對照為自然授粉。
權(quán)利要求
一種油棕花粉超低溫保存法，其特征是將采集的新鮮油棕花粉用80～100目篩子過篩，以去除其中雜質(zhì)，然后用電熱恒溫鼓風(fēng)干烘箱在37～40℃條件下連續(xù)干燥12小時以上，使油棕花粉的剩余含水量為8～9％；將干燥后的油棕花粉裝入冷凍管中直接投入到 170～ 196℃的液氮中預(yù)凍處理1～2小時，然后再移入到 70℃以下的超低溫冰箱中保存；化凍時將超低溫保存的油棕花粉用常溫自來水沖洗0.5～1分鐘即可化凍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油棕花粉超低溫保存法，其特征在于新鮮花粉在24小時以 內(nèi)的短途運輸過程中采用塑料封口袋攜帶，在120小時以內(nèi)的長途運輸過程中采用冰盒攜市ο
全文摘要
本發(fā)明涉及一種油棕花粉超低溫保存法，是將采集的新鮮油棕花粉經(jīng)除雜質(zhì)后進(jìn)行干燥，使油棕花粉的剩余含水量為8～9％；將干燥后的油棕花粉裝入冷凍管中直接投入到液氮中預(yù)凍處理，然后再移入到超低溫冰箱中保存，化凍時將超低溫保存的油棕花粉用常溫自來水沖洗即可化凍。本發(fā)明工藝簡單，成本低，在控制花粉剩余含水量的前提下于超低溫下對油棕花粉進(jìn)行保存，有效地實現(xiàn)油棕花粉的長期保存，具有保存成本低、貯存時間長、花粉萌發(fā)率高等優(yōu)點。
文檔編號A01N3/00GK101926323SQ20101024780
公開日2010年12月29日 申請日期2010年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月29日
發(fā)明者安鋒, 尤麗莉, 張希財, 曾憲海, 林位夫, 王軍, 謝貴水, 鄒積鑫, 陳俊明 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所;海南大學(xué)