專利名稱：一種誘導三倍體三角帆蚌培育珍珠的方法
技術領域：
本發明屬于珍珠養殖技術領域，特別是涉及到一種誘導培育三倍體三角帆蛘，并 利用培育出的三倍體三角帆蛘培育淡水珍珠的方法。
背景技術：
淡水珍珠養殖在我國已有多年的歷史和養殖經驗并形成規模，在淡水養殖中有重 要的地位。但是，隨著珍珠養殖業的發展，人工繁殖技術的不斷成熟，長期的多代近親繁殖 所造成的育珠蛘種質資源退化和病害時有發生給養殖業帶來了一定的危害，蛘種的退化集 中表現在性成熟過早，以及由此所造成的生長緩慢、抗病能力低等方面。在養殖過程中所表 現出來的育珠周期長、病害嚴重、珍珠品質低下，經濟效益不高是目前珍珠養殖面臨的主要 問題，廣種薄收仍是育珠生產的主要方式，嚴重影響了該產業可持續的發展。優質育珠蛘是生產優質珍珠的基礎，培育出優質的種苗是解決上述問題的前提。 由于三角帆蛘在繁殖季節(每年的4 9月份)，需要消耗大量的營養用于繁殖，蛘的生長緩 慢，抗病能力弱，容易感染病害，因此培育出的珍珠質量也不高。利用三倍體三角帆蛘培育 珍珠是解決上述問題經濟且有效的途徑，三倍體三角帆蛘是在正常二倍體三角帆蛘的基礎 上，通過改變染色體的倍性，誘導產生的具有不育性的育珠蛘種。由于三倍體對蛘的性成熟 能夠起到抑制的作用。因此，三倍體三角帆蛘在繁殖季節避免了用于繁殖所消耗的營養，具 有生長速度快、代謝旺盛、抗病性強等特點。這對于加速珍珠的育成，提高珍珠的品質、縮短 育珠周期、減少病害的威脅，將起到很好的作用，是提高珍珠養殖經濟效益的直接有效的途 徑。借于三倍體的不育性和生長優勢，為淡水珍珠的養殖提供優良的蛘種，提高珍珠的品 質和養殖的經濟效益，不僅具有重要的理論意義和實際應用的前景，同時還會帶來高的經 濟效益，為促進我國淡水珍珠養殖業的健康、穩定和可持續發展做出貢獻。利用細胞染色體組工程技術培育水產養殖新品種，是近年來的研究熱點，尤其是 通過染色體的操作技術培育多倍體的研究，是最活躍和最具應用潛力的研究領域。多倍體 倍育具有投入相對少、目的性強、見效快、效益高等特點，多倍體的研究主要是為生產不育 的三倍體。由于三倍體的不育性，能夠有效的抑制低等水生生物的性成熟，從而提高其生長 速度和抗病能力，達到促進養殖業的發展，提高養殖的經濟效益的目的。目前國內外海洋貝類的三倍體誘導方面已有較多的應用，例如三倍體鮑魚、牡蠣 和珠母貝等。但是，我國的特有蛘種，也是目前用于淡水珍珠養殖的主要蛘種三角帆蛘三倍 體的誘導，相關報道很少見，只有CN1957686A，其采用的是體外受精與胚胎發育的類型，而 且其體外受精采用的是三倍體三角帆蛘產生的卵子和二倍體三角帆蛘的精子，本身就需要 三倍體三角帆蛘作為親本。雖然，三角帆蛘與其它海洋貝類在生物分類和進化上是處于同一水平，有很多相 似之處，但是三角帆蛘與海洋貝類在生殖生物學上特別是受精與胚胎發育方面存在有很大 的差異。目前成功誘導培育出三倍體的海洋貝類均屬于體外受精和胚胎發育的類型，然而 三角帆蛘的受精與胚胎發育是在外鰓腔中完成的，屬于不完全的體內受精與胚胎發育的類型，這種特殊的繁殖方式決定了三角帆蛘三倍體誘導技術路線的特殊性和技術難度。

發明內容
為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是
一種誘導三倍體三角帆蛘培育珍珠的方法，所述的方法包括誘導培育三倍體三角帆蛘 和利用培育出的三倍體三角帆蛘培育珍珠的方法，其特征在于所述誘導培育三倍體三角帆 蛘的方法為選取年齡為3齡 6齡，殼長15cm以上，殼厚5cm以上，生長正常的二倍體三 角帆蛘作為親蛘，待雌蛘的鰓發育豐滿厚實，所述的親蛘中雄蛘和雌蛘的數量比為1 廣3， 將所選的親蛘隔離，分別進行培育，跟蹤觀察雌蛘卵子的發育情況，待雌蛘的卵子發育成熟 后，將雌蛘移入培育雄蛘的池塘里，使雌蛘自然受精，跟蹤觀察雌蛘受精卵的發育情況，待 80 %以上的受精卵出現第一極體后，將雌蛘放入300 450 μ mol/ L的6-二甲基氨基嘌呤 水溶液中，進行誘導處理10 30分鐘，取出誘導后的雌蛘；誘導后的雌蛘經培育后孵化育 苗，得到三倍體仔蛘，三倍體仔蛘培育至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三 角帆蛘。本發明所述的選取年齡為3齡 6齡，殼長15cm以上，殼厚5cm以上，生長正常的 二倍體三角帆蛘作為親蛘，包括殼長為15cm，殼厚5cm的生長正常的3齡 6齡的二倍體三 角帆蛘。因為二倍體三角帆蛘的生長的大小會受自身和自然條件限制，不可能無限長大，所 以對生長正常的二倍體三角帆蛘的大小的上限沒必要做特別的限定，凡是殼長15cm以上， 殼厚5cm以上，生長正常的3齡 6齡的二倍體三角帆蛘都可選做親蛘。更具體的，所述誘導培育三倍體三角帆蛘的方法包括以下步驟
(1)選取年齡為3齡 6齡，殼長15cm以上，殼厚5cm以上，貝殼完整無殘缺，蛘體健壯， 腹部鼓圓，閉殼肌強勁有力，無病無傷的三角帆蛘作為親蛘，所述的親蛘中雄蛘和雌蛘的數 量比為1 廣3，于11月 次年2月將雄蛘和雌蛘隔離，分別置于池塘中吊養，3月初將雄蛘 和雌蛘按每一只分開培育。(2)從雄蛘和雌蛘按每一只分開培育開始觀察雌蛘卵子的發育情況，待雌蛘的卵 子發育成熟后，將雌蛘轉移至步驟(1)的培育雄蛘的池塘中，雌蛘與雄蛘一一配對培育， 使雌蛘自然受精，繼續跟蹤觀察雌蛘的懷卵情況，雌蛘懷卵后，用探針深入孕育鰓瓣中，取 少量的卵于顯微鏡下觀察，待80 %以上的受精卵出現第一極體后，取出雌蛘，將雌蛘放入 300 450 μ mol/ L的6- 二甲基氨基嘌呤水溶液中，進行誘導處理10 30分鐘，取出誘導 后的雌蛘；在誘導處理時雌蛘不要求要一個個分開培育，可與其它雌蛘一起進行誘導處理。(3)誘導后的雌蛘進行培育，待雌蛘中80%以上胚胎發育至成熟鉤介幼蟲后，用寄 主魚靜水采苗并輔助孵化育苗，得到三倍體仔蛘，流水培育三倍體仔蛘至殼長0. 8^1. 2cm, 移入露天大池培育至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角帆蛘。本發明所述步驟(1)中，雌蛘和雄蛘的鑒別方法為雌蛘的外鰓鰓絲細密，有 100 120條左右，且外鰓瓣肥厚，成熟雌蛘的外鰓呈淡黃色或桔紅色，在繁殖季節，雌蛘腮 內有卵。雄蛘的鰓絲稀疏，一般只有60條左右，外鰓瓣也較瘦薄，在繁殖季節腮內沒有卵， 經過外形鑒別后仍不能保證它是雄蛘，需進一步鏡檢，確定雌雄。這是本領域技術人員公 知的鑒別方法。所述親蛘置于池塘中吊養，宜吊在微流水中，水深約為1.5m左右，要求水質清新，無污染，肥瘦適宜，透明度30cm左右，每畝吊養600只左右，在繁殖季節(通常為3月初)將 雌蛘和雄蛘分池培育，每一個嚴格單獨隔離。本發明所述步驟(3)的誘導后的雌蛘的培育、采苗及輔助孵化育苗技術，為本領域 人員公知技術，可按浙江省地方標準DB33/T402. 1—2003，河蛘育珠技術規范第1部分三 角帆蛘苗種繁育技術規范進行操作。更具體的，所述步驟(3)可按照以下方法操作誘導后的雌蛘培育6 10天后， 選取80%以上胚胎發育至成熟鉤介幼蟲的成熟雌蛘，在裝水的容器中采集鉤介幼蟲，然后 按每個成熟雌蛘加入0. 5^2公斤的寄主魚進行采苗，使鉤介幼蟲寄生在寄主魚上，得到附 蟲寄主魚，通常采苗時間為1(Γ15分鐘，然后將附蟲寄主魚倒進育苗池中，投注充足飼料 進行孵化，所述育苗池為流水培育，所述寄主魚為鳙魚、鯰魚或黃顙魚，在預計脫苗日前兩 天，將附蟲寄主魚按每平方米5 10尾投入蛘苗池，并停止喂餌，使蛘苗池中保持水流 暢通，脫苗完畢后撈出寄主魚，蛘苗池中得到三倍體仔蛘，流水培育至三倍體仔蛘的殼長 0. 8 1. 2cm，移入露天大池培育至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角帆 蛘，再以三倍體三角帆蛘培育珍珠。所述寄主魚通常要求體質健壯、無病無傷、大小為100 150g/尾。三角帆蛘對水流和底質要求比較嚴格，為使溶氧充足，餌料生物豐富，育苗池要采 用流水培育。為充分利用水源和節約能源，最好使進水池高于育苗池，育苗池高于出水囤積 池，形成自然落差。為保證仔蛘的成活率，進水水源一定要采用天然地表水，無污染，無敵害 生物，水質不能太肥。預計脫苗日通常按照以下之一的方法預計18 19°C寄生時間1Γ16天；2(T21°C 寄生時間12 13天；22 24°C寄生時間10 12天；26 28°C寄生時間6 7天；30 35°C寄生 時間5飛天；根據預計不同溫度下的寄生時間即可預計脫苗日。(浙江省地方標準DB33/ T402. 1一2003，河蛘育珠技術規范第1部分三角帆蛘苗種繁育技術規范)
脫苗時要定時檢查魚鰓和鰭條上的白點是否消失.如果還有白點，應放回原池繼續脫 苗，若白點已消失.說明苗已脫盡，即可把部分寄主魚轉池飼養，以備明年再用。所述脫 苗期間，由于水體小，魚多，為防止缺氧浮頭，必須保持水流通暢，對前期體弱死亡的魚，應 及時撈出，以防污染水質。對跳出育苗池的魚，應及時發現放人池中。所述采集鉤介幼蟲的方法可采用自然靜水采集方法或人工輔助靜水采集方法，所 述自然靜水采集方法為將選出80%以上胚胎發育至成熟鉤介幼蟲的成熟雌蛘洗凈，在陽 光下曬10 20min，然后移進孵化室內平放20 40min，再放入容器中，加水剛好淹沒所述 的成熟雌蛘，3 5min后，可見雌蛘在水中排出棉絮狀物(鉤介幼蟲)，30 40min后，容器 內的水中有大量棉絮狀物，將成熟雌蛘移出，攪動水體使棉絮狀物分布均勻，即得到鉤介幼 蟲。所述人工輔助靜水采集方法為將選出80%以上胚胎發育至成熟鉤介幼蟲的成熟 雌蛘用開殼器撐開，加塞固定，用探針深入孕育鰓瓣中，當挑出的鉤介幼蟲能互相粘結連成 一條絲時，放入加水的容器中，成熟雌蛘排出棉絮狀物，然后將成熟雌蛘移出，攪動水體使 棉絮狀物分布均勻，即得到鉤介幼蟲。所述三倍體仔蛘的流水培育的初期，由于仔蛘個體小，水流不宜過大，可前期慢后 期快，保持水質清新，溶氧充足。在流水培育的中、后期，要進行抄池，以排除仔蛘在生長發育過程中排泄的污物，防止水質變壞發臭。抄池器也可用一根長Im的木棍，一端釘一塊直 徑為0. 15cm圓形木片組成。抄池時，先將噴水管暫時停水，然后用抄池器將育苗池水面輕 輕拍動一遍，污物泛起，隨水流出。一般每7 IOd進行1次。三倍體仔蛘的流水培育的中后期，食量逐步增加，這時需補充食物，滿足其三倍體 仔蛘生長需要。在每次抄池后，可用細紗布過濾的泥漿均勻潑灑在育苗池中，每池用泥漿 1 2小碗，有條件的還可在泥漿中添加一些微量元素，如鐵、鋅等，潑灑后約10 20 min, 可開啟噴水管。三倍體仔蛘在育苗池的時間長達1 2月，可準備一個放大鏡和載玻片，經常觀察 仔蛘生長情況，發現問題及時處理。特別是近幾年，育苗池仔蛘常常受到水生紅蟲的侵襲， 一經發現，應及時采取措施，以防大面積流行，造成損失。三倍體仔蛘至殼長0. 8^1. 2cm，選晴好天氣，用一種特制的三角形抄網將仔蛘 從育苗池撈出，移入露天大池培育至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角 帆蛘。本發明所述利用培育出的三倍體三角帆蛘培育珍珠的方法，是本領域技術人員公 知的技術，可按照浙江省地方標準DB33/T402. 2—2003，河蛘育珠技術規范第2部分珍珠 接種技術規范以及DB33/T402. 3—2003，河蛘育珠技術規范第3部分育珠蛘養殖與采珠技 術規范進行操作。更具體的，所述利用培育出的三倍體三角帆蛘培育珍珠的方法可按照以下步驟進 行
1、每年的3月飛月或9月 11月，選取蛘體厚實，外殼色澤鮮艷、光亮，呈深綠至青藍 色或黃褐色，蛘體完整無損傷，腹緣整齊，外套膜肥厚細嫩，呈白色，斧足肥碩，體質健壯，受 驚后兩殼迅速閉合，噴水有力的三角帆蛘為手術蛘。2、制片選取制片蛘一剖蛘一洗污一開膜一取下外表皮一洗去粘液污物一切去色 線一修邊一切片
3、插片用送片針挑在細胞小片的正中，快速插入插片蛘的內外表皮之間的結締組織， 然后退出送片針，同時用創口針將小片整圓，挑片、創口、插片、整圓應一次成功，達到橫插、 豎鉤、縱包、同位一致。4、插好片立即在創口滴加消毒液消毒，盡快吊養于育珠水域。以蛘為主的池塘吊 養珠蛘15000只/公頃 18000只/公頃，先期密，后期逐步減少，吊養深度30cnT40Cm。5、手術后7天 15天，要求水質較淡，然后逐漸培肥水質，春、夏季以有機肥和無 機肥混合施用，夏季無機肥與有機肥酌情施放，冬季酌施有機肥，有機肥料以發酵腐熟過的 雞糞、鴨糞為主，化肥主要用尿素和過磷酸鈣，使水質呈現黃綠色或褐綠色，透明度保持為 30cnT40cm，每月換水在30cnT50cm，保持水體溶氧5mg/L以上，保持水體PH7 8之間，同時做 好蛘病防治。6、養殖周期一般為3至5年，每年的12月至翌年2月份為珍珠的采收季節。7、將已育成珍珠的蛘，用剖蛘刀切斷前后閉殼肌，打開雙殼，取出珍珠，取出后的 珍珠放入清水盆中洗去污物，進一步洗滌干凈。本專利根據三角帆蛘繁殖發育生物學的特點，制定出了適合三角帆蛘三倍體誘導 的技術路線，三角帆蛘雌雄異體，在繁殖季節當性腺發育成熟后，雌雄個體分別排出精子和
6卵子，卵子排入到雌性的外鰓腔中，雄性排出的精子順水流進入雌性的外鰓腔中與卵子受 精并發育成鉤介幼蟲，屬于不完全的體外受精的類型，這種受精與胚胎發育的類型決定了 三角帆蛘三倍體誘導應采取的技術路線的特點。雖然三角帆蛘雌雄個體在受精的過程中 不發生性交行為即可分別排出卵子和精子，但發明人發現三角帆蛘的雌雄之間存在有性行 為，主要表現在單獨飼養的雌雄個體，即使性腺發育成熟也不能夠排出精子和卵子，只有當 雌雄個體混養在一起時才有精子和卵子的排出，說明三角帆蛘在繁殖時期雌雄個體之間存 在有物質信號的傳導和交流，這種現象對確定三倍體誘導的技術路線具有十分重要的作 用，在自然條件下三角帆蛘的卵子是分批排放的即成熟一批排放一批，難以獲得同步受精 發育的卵子，這種情況下要獲得較高的三倍體誘導率是十分困難的，由于三角帆蛘具有性 行為，通過這一特點，我們就可以人為地控制三角帆蛘卵子的同步受精，獲得同步的發育， 極大地提高了三倍體的誘導率。在此基礎上確定了三角帆蛘三倍體誘導的技術路線，通過 6 - DMAP的誘導成功的獲得了三倍體的三角帆蛘，誘導率達到70%以上。與CN1957686A相比，本發明的有益效果體現在
UCN1957686A中是采取完全人工培育，分別取出精子和卵子，然后受精，由于雌蛘的卵 子要在雄蛘的刺激下發育成熟，分別取出不利于控制精子、卵子的成熟度，如成熟度不高會 直接導致受精卵形成率不高，而本發明的精子和卵子為雄蛘和雌蛘分別自然排出，在雌蛘 體內自然受精，精子、卵子的成熟度都較高，受精卵形成率高。2、CN1957686A的卵子取自三倍體三角帆蛘，需要三倍體三角帆蛘為親本，而本發 明雄蛘和雌蛘都使用的正常的二倍體三角帆蛘，來源容易，更方便取材，適宜推廣。3、本發明的誘導成功率大幅提高，達70%以上。而且經初步試驗的結果表明利用本方法培育的三倍體三角帆蛘養殖育珠，在同 一養殖周期中，三倍體比正常二倍體三角帆蛘的生長速度快，能夠縮短養殖育珠的周期，育 珠的質量有明顯的提高。
具體實施例方式下面以具體實施例來對本發明做進一步說明，但本發明的保護范圍不限于此。實施例1
1親蛘的選擇與性別鑒定
挑選3齡三角帆蛘，要求殼長15cm以上，殼厚5cm以上，貝殼完整無殘缺，蛘體健壯，腹 部鼓圓，閉殼肌強勁有力，無病無傷，然后確定雌雄。親蛘按雌雄=1 :1進行選留。 2親蛘的培育
于11月 次年2月將親蛘中的雄蛘和雌蛘隔離，分別吊養在池塘的微流水中，水深 約為1.5m左右，要求水質清新，無污染，肥瘦適宜，透明度30cm左右，每畝吊養600只左右， 在繁殖季節(3月初)將雌蛘和雄蛘按每一只分開單獨培育，嚴格隔離。3三倍體誘導
從雌蛘和雄蛘按每一只分開單獨培育開始，觀察選留的雌蛘，若發現雌蛘的鰓發育飽 滿，卵子成熟，此時雄蛘也成熟了，將其轉移到雄蛘池，使雌蛘自然受精，并觀察雌蛘的懷卵 情況，發現懷卵后，用細竹片深入孕育鰓瓣中，取少量的卵于顯微鏡下觀察受精卵的發育情 況，發現80 %以上的受精卵出現第一極體后，將雌蛘取出放入450μπκ)1/ L的6-二甲基氨基嘌呤(6-Dimethylaminopuine，6-DMAP)水溶液中，處理持續時間10分鐘，處理后放入池
塘進行飼養。4親蛘成熟度的檢查
一個星期后，觀察雌蛘勾介幼蟲的成熟情況，如果胚胎發育基本完成，成熟度在 80%以上，可作為繁殖用蛘，否則，則需加緊培育。5寄主魚的培育及準備
挑選體質健壯、無病無傷、大小為120g左右/尾的黃顙魚，每個育苗池準備黃顙魚
約 5kg。6人工繁殖
6. 1鉤介幼蟲的采集
自然靜水采苗將選出成熟雌蛘洗凈，在陽光下曬15min左右，然后移進孵化室內平放 30min,然后將雌蛘放入塑料盆中(直徑0. 6m左右)，每盆放12只，加水剛好淹沒雌蛘即可， 待盆內水中有大量棉絮狀物時，將親蛘移去，然后用玻璃棒攪動水體，使棉絮狀物分布均 勻，將準備好的黃顙魚按每個成熟雌蛘加入1公斤的寄主魚倒進盆中，5min后，檢查魚鰓 和鰭條，若發現有許多小白點，即說明鉤介幼蟲已寄生在魚體上，估計每尾寄生1000個苗 時，即可將魚和水一同倒進育苗池中孵化。6. 2寄主魚的暫養
鉤介幼蟲寄生在魚體上，吸收魚體的營養生長發育，在水溫23 28°C下生長7d，將附 蟲魚按每平方米8尾再次分散到各個蛘苗池去，并停止喂餌進行脫苗，并定時檢查魚鰓和 鰭條上的白點是否消失.如果還有白點，應放回原池繼續脫苗，若白點已消失.說明苗已脫 盡，即可把部分寄主魚轉池飼養，以備明年再用.
在這期間，由于水體小，魚多，為防止缺氧浮頭，必須保持水流通暢，對前期體弱死亡的 魚，應及時撈出，以防污染水質。對跳出育苗池的魚，應及時發現放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保證進水水源為天然地表水，無污染，無敵害生物，水質不能太肥。7. 1仔蛘的管理
鉤介幼蟲寄生生活結束后，發育變成仔蛘，從魚體上脫落，掉入水底，營底棲生活。 等鉤介幼蟲脫落完畢后，及時撈出寄主魚，開始漫長的流水培育。在培育初期，由于仔蛘個 體小，水流不宜過大，可前期慢后期快，保持水質清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要進行抄池，以排除仔蛘在生長發育過程中排泄的污物， 防止水質變壞發臭。抄池器也可用一根長Im的木棍，一端釘一塊直徑為0. 15cm圓形木片 組成。抄池時，先將噴水管暫時停水，然后用抄池器將育苗池水面輕輕拍動一遍，污物泛起， 隨水流出。每8d進行1次。7. 3加營養泥
仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，這時需補充食物，滿足其生長需要。在每次抄 池后，可用細紗布過濾的泥漿均勻潑灑在育苗池中，每池用泥漿2小碗，潑灑后約15 min, 可開啟噴水管。7. 4勤觀察，發現問題及時處理仔蛘在育苗池的時間長達1 2月，可準備一個放大鏡和載玻片，經常觀察仔蛘生 長情況，發現問題及時處理。特別是近幾年，育苗池仔蛘常常受到水生紅蟲的侵襲，一經發 現，應及時采取措施，以防大面積流行，造成損失。7. 5仔蛘出池、培育
當仔蛘長到Icm左右時，選晴好天氣，用一種特制的三角形抄網將仔蛘從育苗池撈 出，移入露天大池培育2個月左右，至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角 帆蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
制片選取制片蛘一剖蛘一洗污一開膜一取下外表皮一洗去粘液污物一切去色線一修 邊一切片
然后用送片針挑在細胞小片的正中，快速插入插片蛘的內外表皮之間的結締組織，然 后退出送片針，同時用創口針將小片整圓，挑片、創口、插片、整圓應一次成功，達到橫插、豎 鉤、縱包、同位一致，。插好片立即在創口滴加消毒液消毒，盡快吊養于育珠水域。以蛘為主的池塘吊養 珠蛘15000只/公頃，先期密，后期逐步減少，吊養深度35cm。手術后的前10天培育，要求水質較淡，然后逐漸培肥水質，春、夏季以有機肥和無 機肥混合施用，夏季無機肥與有機肥酌情施放，冬季酌施有機肥，有機肥料以發酵腐熟過的 雞糞、鴨糞為主，化肥主要用尿素和過磷酸鈣，使水質呈現黃綠色或褐綠色，透明度保持為 30cnT40cm，每月換水在30cnT50cm，保持水體溶氧5mg/L以上，保持水體PH7 8之間，同時做 好蛘病防治。插片手術1年后，隨機抽取三角帆蛘400個，分別測量殼長、殼高及育珠生長情況， 結果見表1。 比較例1
1親蛘的選擇與性別鑒定
挑選3齡的二倍體三角帆蛘，要求殼長15cm以上，殼厚5cm以上，貝殼完整無殘缺，蛘 體健壯，腹部鼓圓，閉殼肌強勁有力，無病無傷，然后確定雌雄。親蛘按雌雄=1 :1進行選
&3 甶ο2親蛘的培育
于11月 次年2月將親蛘中的雄蛘和雌蛘隔離，分別吊養在池塘的微流水中，水深 約為1.5m左右，要求水質清新，無污染，肥瘦適宜，透明度30cm左右，每畝吊養600只左右， 在繁殖季節(3月初)將雌蛘和雄蛘按每一只分開單獨培育，嚴格隔離。3、挑選性腺成熟飽滿的個體，剖取精卵分別存放于盛有過濾水的容器中，經篩絹 過濾。除去雜質和組織碎片，迅速將卵加入盛有0. 005%氨水的容器中，停留5分鐘，調節卵 的數量為0. 1萬粒/ml，水溫20°C，然后加入適量的精子，并混合讓其受精。4、誘導處理當有80%左右的受精卵出現第一極體時，加入濃度為50ppm的 6-DMAP抑制劑進行誘導處理30分鐘，然后用水洗受精卵數次，除去殘留抑制劑藥物及精 子。5、受精卵的收集及培育把受精卵置于較大的容器中，加滿水讓其發育，待孵化出的鉤介幼蟲并大量上浮后，將上浮的鉤介幼蟲收集，轉移至另一裝水的塑料盆中，將準備好 的黃顙魚倒進盆中，5min后，檢查魚鰓和鰭條，若發現有許多小白點，即說明鉤介幼蟲已寄 生在魚體上，估計每尾寄生1000個苗時，即可將魚和水一同倒進育苗池中孵化。6、寄主魚的暫養
鉤介幼蟲寄生在魚體上，吸收魚體的營養生長發育，在水溫23 28°C下生長7d，將附 蟲魚按每平方米8尾再次分散到各個蛘苗池去，并停止喂餌進行脫苗，并定時檢查魚鰓和 鰭條上的白點是否消失.如果還有白點，應放回原池繼續脫苗，若白點已消失.說明苗已脫 盡，即可把部分寄主魚轉池飼養，以備明年再用.
在這期間，由于水體小，魚多，為防止缺氧浮頭，必須保持水流通暢，對前期體弱死亡的 魚，應及時撈出，以防污染水質。對跳出育苗池的魚，應及時發現放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保證進水水源為天然地表水，無污染，無敵害生物，水質不能太肥。7. 1仔蛘的管理
鉤介幼蟲寄生生活結束后，發育變成仔蛘，從魚體上脫落，掉入水底，營底棲生活。 等鉤介幼蟲脫落完畢后，及時撈出寄主魚，開始漫長的流水培育。在培育初期，由于仔蛘個 體小，水流不宜過大，可前期慢后期快，保持水質清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要進行抄池，以排除仔蛘在生長發育過程中排泄的污物， 防止水質變壞發臭。抄池器也可用一根長Im的木棍，一端釘一塊直徑為0. 15cm圓形木片 組成。抄池時，先將噴水管暫時停水，然后用抄池器將育苗池水面輕輕拍動一遍，污物泛起， 隨水流出。每8d進行1次。7. 3加營養泥
仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，這時需補充食物，滿足其生長需要。在每次抄 池后，可用細紗布過濾的泥漿均勻潑灑在育苗池中，每池用泥漿2小碗，潑灑后約15 min, 可開啟噴水管。7. 4勤觀察，發現問題及時處理
仔蛘在育苗池的時間長達1 2月，可準備一個放大鏡和載玻片，經常觀察仔蛘生 長情況，發現問題及時處理。特別是近幾年，育苗池仔蛘常常受到水生紅蟲的侵襲，一經發 現，應及時采取措施，以防大面積流行，造成損失。7. 5仔蛘出池、培育
當仔蛘長到Icm左右時，選晴好天氣，用一種特制的三角形抄網將仔蛘從育苗池撈 出，移入露天大池培育兩個月左右，至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角 帆蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
操作條件同實施例1，插片手術1年后，隨機抽取三角帆蛘400個，分別測量殼長、殼 高及育珠生長情況，結果見表1。比較例2
1親蛘的選擇與性別鑒定
挑選3齡的二倍體三角帆蛘，要求殼長15cm以上，殼厚5cm以上，貝殼完整無殘缺，蛘體健壯，腹部鼓圓，閉殼肌強勁有力，無病無傷，然后確定雌雄。親蛘按雌雄=1 :1進行選
&3 甶ο2親蛘的培育
將親蛘每2對一籠吊養在微流水中，水深約為1. 5m左右，吊養深度30cm，要求水質 清新，無污染，肥瘦適宜，透明度30cm左右，每畝吊養600只左右。3親蛘成熟度的檢查
挑選外鰓豐滿厚實，顏色呈褐黃色、紫黑色或灰黃色的雌蛘，觀察鉤介幼蟲的成熟情 況，如果鉤介幼蟲大部分破膜，且兩殼已能微微扇動，足絲粘連，則表明鉤介幼蟲大多成熟， 可作為繁殖用蛘，否則，則需加緊培育。4寄主魚的培育及準備
挑選體質健壯、無病無傷、大小為120g左右/尾的黃顙魚，每個育苗池準備黃顙魚
約 5kg。5人工繁殖
5. 1鉤介幼蟲的采集
自然靜水采苗將選出的成熟雌蛘洗凈，在陽光下曬15min左右，然后移進孵化室內平 放30min，然后將雌蛘放入塑料盆中(直徑0. 6m左右)，每盆放12只，加水剛好淹沒雌蛘即 可，待盆內水中有大量棉絮狀物時，將親蛘移去，然后用玻璃棒攪動水體，使棉絮狀物分布 均勻，將準備好的黃顙魚按每個成熟雌蛘加入1公斤的寄主魚倒進盆中，5min后，檢查魚 鰓和鰭條，若發現有許多小白點，即說明鉤介幼蟲已寄生在魚體上，估計每尾寄生1000個 苗時，即可將魚和水一同倒進育苗池中孵化。5. 2寄主魚的暫養
鉤介幼蟲寄生在魚體上，吸收魚體的營養生長發育，在水溫23 28°C下生長7d，將附 蟲魚按每平方米8尾再次分散到各個蛘苗池去，并停止喂餌進行脫苗，并定時檢查魚鰓和 鰭條上的白點是否消失.如果還有白點，應放回原池繼續脫苗，若白點已消失.說明苗已脫 盡，即可把部分寄主魚轉池飼養，以備明年再用。在這期間，由于水體小，魚多，為防止缺氧浮頭，必須保持水流通暢，對前期體弱死 亡的魚，應及時撈出，以防污染水質。對跳出育苗池的魚，應及時發現放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保證進水水源為天然地表水，無污染，無敵害生物，水質不能太肥。7. 1仔蛘的管理
鉤介幼蟲寄生生活結束后，發育變成仔蛘，從魚體上脫落，掉入水底，營底棲生活。 等鉤介幼蟲脫落完畢后，及時撈出寄主魚，開始流水培育。在培育初期，由于仔蛘個體小，水 流不宜過大，可前期慢后期快，保持水質清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要進行抄池，以排除仔蛘在生長發育過程中排泄的污物， 防止水質變壞發臭。抄池器也可用一根長Im的木棍，一端釘一塊直徑為0. 15cm圓形木片 組成。抄池時，先將噴水管暫時停水，然后用抄池器將育苗池水面輕輕拍動一遍，污物泛起， 隨水流出。每8d進行1次。7. 3加營養泥
11仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，這時需補充食物，滿足其生長需要。在每次抄 池后，用細紗布過濾的泥漿均勻潑灑在育苗池中，每池用泥漿2小碗，潑灑后約15 min，可 開啟噴水管。7. 4勤觀察，發現問題及時處理
仔蛘在育苗池的時間長達廣2月，可準備一個放大鏡和載玻片，經常觀察仔蛘生長 情況，發現問題及時處理。7. 5仔蛘出池、培育
當仔蛘長到Icm左右時，選晴好天氣，用一種特制的三角形抄網將仔蛘從育苗池撈 出，移入露天大池培育兩個月左右，至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到二倍體三角 帆蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
操作條件同實施例1，插片手術1年后，隨機抽取三角帆蛘400個，分別測量殼長、殼 高及育珠生長情況，結果見表1。實施例2
1親蛘的選擇與性別鑒定
挑選4齡三角帆蛘，要求殼長15cm以上，殼厚5cm以上，貝殼完整無殘缺，蛘體健壯，腹 部鼓圓，閉殼肌強勁有力，無病無傷，然后確定雌雄。親蛘按雌雄=2 1進行選留。2親蛘的培育
于11月 次年2月將親蛘中的雄蛘和雌蛘隔離，分別吊養在池塘的微流水中，水深 約為1.5m左右，要求水質清新，無污染，肥瘦適宜，透明度30cm左右，每畝吊養600只左右， 在繁殖季節(3月初)將雌蛘和雄蛘按每一只分開單獨培育，嚴格隔離。3三倍體誘導
觀察選留的雌蛘，若發現雌蛘的鰓發育飽滿，卵子成熟，將其轉移到雄蛘池，使雌蛘自 然受精，觀察雌蛘的懷卵情況，發現懷卵后，用細竹片深入孕育鰓瓣中，取少量的卵于顯微 鏡下觀察受精卵的發育情況，發現80 %以上的受精卵出現第一極體后，將雌蛘取出放入 300ymol/ L的6-二甲基氨基嘌呤(6-Dimethylaminopuine, 6-DMAP)的水溶液中，處理持 續時間30分鐘，處理后放入池塘進行飼養。4親蛘成熟度的檢查
一個星期后，觀察雌蛘勾介幼蟲的成熟情況，如果胚胎發育基本完成，成熟度在 80%以上，可作為繁殖用蛘，否則，則需加緊培育。5寄主魚的培育及準備
挑選體質健壯、無病無傷、大小為120g左右/尾的黃顙魚，每個育苗池準備黃顙魚
約 5kg。6人工繁殖
6. 1鉤介幼蟲的采集
自然靜水采苗將選出成熟雌蛘洗凈，在陽光下曬15min左右，然后移進孵化室內平放 30min,然后將雌蛘放入塑料盆中(直徑0. 6m左右)，每盆放12只，加水剛好淹沒雌蛘即可， 待盆內水中有大量棉絮狀物時，將親蛘移去，然后用玻璃棒攪動水體，使棉絮狀物分布均 勻，將準備好的黃顙魚按每個成熟雌蛘加入0. 5公斤的寄主魚倒進盆中，5min后，檢查魚鰓和鰭條，若發現有許多小白點，即說明鉤介幼蟲已寄生在魚體上，估計每尾寄生1000個 苗時，即可將魚和水一同倒進育苗池中孵化。6. 2寄主魚的暫養
鉤介幼蟲寄生在魚體上，吸收魚體的營養生長發育，在水溫23 28°C下生長7d，將附 蟲魚按每平方米8尾再次分散到各個蛘苗池去，并停止喂餌進行脫苗，并定時檢查魚鰓和 鰭條上的白點是否消失.如果還有白點，應放回原池繼續脫苗，若白點已消失.說明苗已脫 盡，即可把部分寄主魚轉池飼養，以備明年再用.
在這期間，由于水體小，魚多，為防止缺氧浮頭，必須保持水流通暢，對前期體弱死亡的 魚，應及時撈出，以防污染水質。對跳出育苗池的魚，應及時發現放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保證進水水源為天然地表水，無污染，無敵害生物，水質不能太肥。7. 1仔蛘的管理
鉤介幼蟲寄生生活結束后，發育變成仔蛘，從魚體上脫落，掉入水底，營底棲生活。 等鉤介幼蟲脫落完畢后，及時撈出寄主魚，開始漫長的流水培育。在培育初期，由于仔蛘個 體小，水流不宜過大，可前期慢后期快，保持水質清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要進行抄池，以排除仔蛘在生長發育過程中排泄的污物， 防止水質變壞發臭。抄池器也可用一根長Im的木棍，一端釘一塊直徑為0. 15cm圓形木片 組成。抄池時，先將噴水管暫時停水，然后用抄池器將育苗池水面輕輕拍動一遍，污物泛起， 隨水流出。每8d進行1次。7. 3加營養泥
仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，這時需補充食物，滿足其生長需要。在每次抄 池后，可用細紗布過濾的泥漿均勻潑灑在育苗池中，每池用泥漿2小碗，有條件的還可在泥 漿中添加一些微量元素，潑灑后約15 min，可開啟噴水管。7. 4勤觀察，發現問題及時處理
仔蛘在育苗池的時間長達1 2月，可準備一個放大鏡和載玻片，經常觀察仔蛘生 長情況，發現問題及時處理。特別是近幾年，育苗池仔蛘常常受到水生紅蟲的侵襲，一經發 現，應及時采取措施，以防大面積流行，造成損失。7. 5仔蛘出池、培育
當仔蛘長到Icm左右時，選晴好天氣，用一種特制的三角形抄網將仔蛘從育苗池撈 出，移入露天大池培育1年左右至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角帆 蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
操作條件同實施例1，插片手術1年后，隨機抽取三角帆蛘400個，分別測量殼長、殼 高及育珠生長情況，結果見表1。實施例3
1親蛘的選擇與性別鑒定
挑選6齡三角帆蛘，要求殼長15cm以上，殼厚5cm以上，貝殼完整無殘缺，蛘體健壯，腹 部鼓圓，閉殼肌強勁有力，無病無傷，然后確定雌雄。親蛘按雌雄=3 1進行選留。
2親蛘的培育
于11月 次年2月將親蛘中的雄蛘和雌蛘隔離，分別吊養在池塘的微流水中，水深 約為1.5m左右，要求水質清新，無污染，肥瘦適宜，透明度30cm左右，每畝吊養600只左右， 在繁殖季節(3月初)將雌蛘和雄蛘按每一只分開單獨培育，嚴格隔離。3三倍體誘導
觀察選留的雌蛘，若發現雌蛘的鰓發育飽滿，卵子成熟，將其轉移到雄蛘池，使雌蛘自 然受精，觀察雌蛘的懷卵情況，發現懷卵后，用細竹片深入孕育鰓瓣中，取少量的卵于顯微 鏡下觀察受精卵的發育情況，發現80 %以上的受精卵出現第一極體后，將雌蛘取出放入 400ymol/ L的6-二甲基氨基嘌呤(6-Dimethylaminopuine，6-DMAP)的水溶液中，處理持 續時間20分鐘，處理后放入池塘進行飼養。4親蛘成熟度的檢查
一個星期后，觀察雌蛘勾介幼蟲的成熟情況，如果胚胎發育基本完成，成熟度在 80%以上，可作為繁殖用蛘，否則，則需加緊培育。5寄主魚的培育及準備
挑選體質健壯、無病無傷、大小為120g左右/尾的黃顙魚，每個育苗池準備黃顙魚
約 5kg。6人工繁殖
6. 1鉤介幼蟲的采集
自然靜水采苗將選出成熟雌蛘洗凈，在陽光下曬15min左右，然后移進孵化室內平放 30min,然后將雌蛘放入塑料盆中(直徑0. 6m左右)，每盆放12只，加水剛好淹沒雌蛘即可， 待盆內水中有大量棉絮狀物時，將親蛘移去，然后用玻璃棒攪動水體，使棉絮狀物分布均 勻，將準備好的黃顙魚按每個成熟雌蛘加入1公斤的寄主魚倒進盆中，5min后，檢查魚鰓 和鰭條，若發現有許多小白點，即說明鉤介幼蟲已寄生在魚體上，估計每尾寄生1000個苗 時，即可將魚和水一同倒進育苗池中孵化。6. 2寄主魚的暫養
鉤介幼蟲寄生在魚體上，吸收魚體的營養生長發育，在水溫23 28°C下生長7d，將附 蟲魚按每平方米8尾再次分散到各個蛘苗池去，并停止喂餌進行脫苗，并定時檢查魚鰓和 鰭條上的白點是否消失.如果還有白點，應放回原池繼續脫苗，若白點已消失.說明苗已脫 盡，即可把部分寄主魚轉池飼養，以備明年再用.
在這期間，由于水體小，魚多，為防止缺氧浮頭，必須保持水流通暢，對前期體弱死亡的 魚，應及時撈出，以防污染水質。對跳出育苗池的魚，應及時發現放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保證進水水源為天然地表水，無污染，無敵害生物，水質不能太肥。7. 1仔蛘的管理
鉤介幼蟲寄生生活結束后，發育變成仔蛘，從魚體上脫落，掉入水底，營底棲生活。 等鉤介幼蟲脫落完畢后，及時撈出寄主魚，開始漫長的流水培育。在培育初期，由于仔蛘個 體小，水流不宜過大，可前期慢后期快，保持水質清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要進行抄池，以排除仔蛘在生長發育過程中排泄的污物，防止水質變壞發臭。抄池器也可用一根長Im的木棍，一端釘一塊直徑為0. 15cm圓形木片 組成。抄池時，先將噴水管暫時停水，然后用抄池器將育苗池水面輕輕拍動一遍，污物泛起， 隨水流出。每8d進行1次。7. 3加營養泥
仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，這時需補充食物，滿足其生長需要。在每次抄 池后，可用細紗布過濾的泥漿均勻潑灑在育苗池中，每池用泥漿2小碗，潑灑后約15 min, 可開啟噴水管。7. 4勤觀察，發現問題及時處理
仔蛘在育苗池的時間長達1 2月，可準備一個放大鏡和載玻片，經常觀察仔蛘生 長情況，發現問題及時處理。特別是近幾年，育苗池仔蛘常常受到水生紅蟲的侵襲，一經發 現，應及時采取措施，以防大面積流行，造成損失。7. 5仔蛘出池、培育
當仔蛘長到Icm左右時，選晴好天氣，用一種特制的三角形抄網將仔蛘從育苗池撈 出，移入露天大池培育2個月左右，至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角 帆蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
操作條件同實施例1，插片手術1年后，隨機抽取三角帆蛘400個，分別測量殼長、殼 高及育珠生長情況，結果見表1。隨機抽取了經實施例1、比較例1、比較例2、實施例2、實施例3方法培育的2齡三 角帆蛘各400個，分別測量了相應的殼長、殼高及育珠生長情況，其結果如下表1。
表權利要求
一種誘導三倍體三角帆蚌培育珍珠的方法，所述的方法包括誘導培育三倍體三角帆蚌和利用培育出的三倍體三角帆蚌培育珍珠的方法，其特征在于所述誘導培育三倍體三角帆蚌的方法為選取年齡為3齡～6齡，殼長15cm以上，殼厚5cm以上，生長正常的二倍體三角帆蚌作為親蚌，所述的親蚌中雄蚌和雌蚌的數量比為11~3，將所選雄蚌和雌蚌隔離，分別進行培育，跟蹤觀察雌蚌卵子的發育情況，待雌蚌的卵子發育成熟后，將雌蚌移入培育雄蚌的池塘里，使雌蚌自然受精，跟蹤觀察雌蚌受精卵的發育情況，待80 %以上的受精卵出現第一極體后，將雌蚌放入300～450μmol/Ｌ的6 二甲基氨基嘌呤水溶液中，進行誘導處理10～30分鐘，取出誘導后的雌蚌；誘導后的雌蚌經培育后孵化育苗，得到三倍體仔蚌，三倍體仔蚌培育至蚌殼長7cm～9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角帆蚌。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述誘導培育三倍體三角帆蛘的方法包括以 下步驟(1)選取年齡為3齡 6齡，殼長15cm以上，殼厚5cm以上，貝殼完整無殘缺，蛘體健壯， 腹部鼓圓，閉殼肌強勁有力，無病無傷的三角帆蛘作為親蛘，所述的親蛘中雄蛘和雌蛘的數 量比為1 廣3，于11月 次年2月將雄蛘和雌蛘隔離，分別置于池塘中吊養，3月初將雄蛘 和雌蛘按每一只分開培育；(2)從雄蛘和雌蛘按每一只分開培育開始觀察雌蛘卵子的發育情況，待雌蛘的卵子發 育成熟后，將雌蛘移入培育雄蛘的池塘里，雌蛘與雄蛘一一配對培育，使雌蛘自然受精，繼 續跟蹤觀察雌蛘的懷卵情況，雌蛘懷卵后，用探針深入孕育鰓瓣中，取少量的卵于顯微鏡下 觀察，待80 %以上的受精卵出現第一極體后，取出雌蛘，將雌蛘放入300 450 μ mol/ L的 6_ 二甲基氨基嘌呤水溶液中，進行誘導處理10 30分鐘，取出誘導后的雌蛘；(3)誘導后的雌蛘進行培育，待雌蛘中80%以上胚胎發育至成熟鉤介幼蟲后，用寄主魚 靜水采苗并輔助孵化育苗，得到三倍體仔蛘，流水培育三倍體仔蛘至殼長0. 8^1. 2cm，移入 露天大池培育至蛘殼長7cm 9cm，個體重20克以上，得到三倍體三角帆蛘。
全文摘要
本發明公開了一種誘導三倍體三角帆蚌培育珍珠的方法，包括誘導培育三倍體三角帆蚌的方法選取年齡為3齡～6齡，殼長15cm以上，殼厚5cm以上，生長正常的二倍體三角帆蚌作為親蚌，將所選的親蚌的雄蚌和雌蚌隔離，分別培育，跟蹤觀察雌蚌卵子的發育情況，待卵子發育成熟后，將雌蚌移入培育雄蚌的池塘里，使雌蚌自然受精，觀察受精卵的發育情況，待80%以上的受精卵出現第一極體后，將雌蚌放入300～450μmol/Ｌ的6-二甲基氨基嘌呤的水溶液中，進行誘導處理10～30分鐘，得到誘導后的雌蚌，經培育后孵化育苗，得到三倍體仔蚌，再經培育得到三倍體三角帆蚌。本發明以正常的二倍體三角帆蚌為親本，自然受精，誘導成功率提高，達70%以上。
文檔編號A01K61/00GK101940183SQ20101029201
公開日2011年1月12日 申請日期2010年9月26日 優先權日2010年9月26日
發明者劉小鋒, 劉文東, 弭忠祥, 楊受保, 陳海軍, 韓繼衛 申請人:浙江山下湖珍珠集團股份有限公司;紹興文理學院