專利名稱：一種復合微生物添加劑及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種復合微生物添加劑808及其制備方法與應用，屬于植物生物調節 劑在農作物種植中應用的生物材料技術領域。
背景技術：
飼料添加劑最初的定義是飼料補充物，以添加維生素和無機鹽等成分填補飼料中 營養成分的不足，平衡飼料的營養，并獲得良好的飼養效果。隨著畜禽集約化死樣的進一步發展和畜禽飼養密度的增加，各種畜禽疾病的發生 越來越頻繁，多數養殖的畜禽都處于亞健康狀態。曾經廣泛使用的治療藥物不僅使病原微 生物產生了嚴重的抗藥性，還引起畜產品藥物殘留的嚴重問題，發展下去勢必影響人類的 健康。微生態制劑在這種歷史背景下應運而生，為畜牧業的持續發展提供了一條有效、 可靠的途徑。采用生物工程技術復合發酵，利用多種微生物相互作用，形成一個生態平衡的 系統。

發明內容
本發明所要解決的問題是采用多種菌種制備復合微生物菌劑，利用該復合微生物 菌劑制成飼料級復合微生物添加劑應用在畜禽養殖業。進入畜禽動物體內，形成優勢種群， 參與腸道微生物的平衡，提高動物的飼料利用率和生長速度，提高動物機體非特異性免疫 功能，防病抗病。本發明的技術解決方案如下一種復合微生物添加劑808采用啤酒酵母 {Saccharomyces cerevisiae) ATCC No. 9763，產朊假絲酵母utilis) ATCC No. 22023，沼澤紅假單胞菌 iHhodopseudom onas /^^Asiris) ATCCNo. 33872，植物乳桿菌 {Lactobacillus plantarum)ATCC No. 8014, BfSIILff^ {Leatobacillus acidophilus) ATCC No. 11073，枯草芽孢桿菌(feci/^As subtil is) KKL No. 6633制備菌種；所述菌種的 質量百分比如下啤酒酵母30飛0%，產朊假絲酵母5 30%，沼澤紅假單胞菌5 30%，植物乳桿 菌5 30%，嗜酸乳桿菌5 40%，枯草芽孢桿菌5 25%。所述的一種復合微生物添加劑808的制備步驟如下
1.接種將所述各菌種接于斜面培養基上。啤酒酵母培養溫度為30°C，培養時間為6 48h ；產朊假絲酵母培養溫度25 30°C，培養時間為6 48h ；沼澤紅假單胞菌培養溫度為 25 30°C，培養時間為6 48h ；植物乳桿菌培養溫度25 30°C，培養時間為6 48h ；嗜酸 乳桿菌培養溫度為27 37°C，培養時間為6 48h ；枯草芽孢桿菌培養溫度為27 37°C， 培養時間為6 48h ；
2.一級菌種培養將所述菌種分別接種于盛有液體培養基的50mL錐形瓶中，培養基pH 為6. 0 8. 0，錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩24 48h ；采用血球計數板計數，菌 液中菌種數量分別達到IO8個/mL ；3.二級發酵將所述菌種分別接種于盛有液體培養基的IOOOmL錐形瓶中，培養基 pH3飛，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48 72h ；使菌種數量分別達到IO8個/mL以上， 將各菌種按所述菌種的質量百分比混合；
4.三級發酵將混合后的菌液接種于盛有復合菌劑培養基的發酵罐中，復合菌劑培養 基pH3飛，接種量為1 5%，30°C下培養4 7天，使發酵液中菌數達到8 10 X IO8個/mL， 即得到所述微生物復合菌劑。所述液體培養基配方為
1.啤酒酵母采用的液體培養基配方為酪蛋白胨15g/L，酵母25g/L，葡萄糖30g/L， KH2PO4 2. 4g/L, K2HPO4 · 3H20 16. 34 g/L ；
2.產阮假絲酵母采用的液體培養基配方為稀釋去除啤酒花的麥芽汁至濃度為 12Brix,瓊脂15 g，高壓滅菌30分鐘；
3.沼澤紅假單胞菌采用的液體培養基配方為氯化銨1.5g，磷酸二氫鉀1. 5g，七水硫 酸鎂0. 8g，氯化鈉4. Og,碳酸氫鈉1. 8g，氯化鈣0. Olg, VBO. Ig,酵母粉1. 0 g，乙酸鈉4. Og, 微量元素1. OmL/L包括(六水氯化鐵5. Og,七水硫酸鋅1. Og,五水硫酸銅0. 05g,六水氯化
鈷0. 5g，硼酸1. Og,四水氯化錳0. 5g)，添加乙酸調節pH，水適量； 4.植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌采用的液體培養基配方為乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、 酵母膏5g、葡萄糖5g、吐溫80 lg、K2HP042g、醋酸鈉5g、檸檬酸二胺2g、MgS04 · 7H20 0. 2g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸餾水 1000ml ；
5.枯草芽孢桿菌采用的液體培養基配方為牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl3g、pH 7.0。所述復合菌劑培養基配方為蜂蜜1 5g/100mL、蔗糖2 10g/100mL、蛋白胨 0. 1 0. 5g/100mL,KH2PO4 0. 1 0. 5g/100mL,K2HPO4 0. 5 2g/100mL、MgS04 ·7Η20 0· 5 2g/100mL、Nacl 0. 5 2g/100mL 其余為蒸餾水。所述復合微生物添加劑808在畜禽動物養殖中作為飼料添加劑。本發明的有益效果是復合微生物菌劑采用啤酒酵母、產朊假絲酵母、沼澤紅假 單胞菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌制備菌種。以上菌種分別經過一級菌種培 養，二、三級發酵，使發酵液中菌數達到8 10 X IO8個/mL，即得復合微生物添加劑808。本 產品經長期實地驗證，配方合理，功效穩定，能夠促進動物生長，提高動物產品產量，提高成 活率，防病抗病，提高飼料轉化率，改善產品品質。
具體實施例方式本發明采用啤酒酵母、Saccharomycescerevisiae) ATCC No. 9763，產朊假絲酵 母(Candida utilis) ATCC No. 22023，沼澤紅假單胞菌onas Palustris) ATCCNo. 33872，植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum)ATCC No. 8014，嗜酸乳桿菌 {Leatobacillus acidophilus) ATCC No. 11073，枯草芽孢桿菌 Uaci/A/s subtil is) KKL No. 6633制備菌種，生產復合微生物添加劑808。菌種的質量百分比為啤酒酵母30飛0%，產朊假絲酵母5 30%，沼澤紅假單胞菌 5 30%，植物乳桿菌5 30%，嗜酸乳桿菌5 40%，枯草芽孢桿菌5 25%。
常用配方表
5
按照上述配方表和制備方法得到的復合微生物添加劑808，菌數含量達到9 X IO8個/
mLo實施例1
采用本發明制備的復合微生物添加劑808 (以下簡稱808)在仔豬養殖中應用效果試
驗
1.供試材料復合微生物添加劑808
2.試驗對象保山農校豬場選擇45日齡的斷奶長約2元雜仔豬16頭。3.試驗分組按照強弱大小搭配均勻分組，每組8頭，試驗組頭均體重12. 79kg，對 照組頭均體重13. 31kg。試驗要求試驗組和對照組的基礎飼料配制相同。試驗組飼糧添加復合微生物添 加劑808發酵4-6天才進行飼喂。4.試驗方法
試驗組每0. 1噸飼料使用復合微生物添加劑808 IOOmLJn 30kg清水。對照組基礎飼料添加“豬博士”預混料，進行飼喂。先進行5天的飼喂，然后進入正式試驗期32天。表1基礎飼料組成及營養成分
試驗組飼喂發酵飼料，對照組飼喂濕拌料，每天飼喂4頓，兩組均采用限制飼喂方式 (八成飽)，自由飲水。5.試驗結果與分析
試驗組日增重348g，對照組日增重333g。試驗組的仔豬采食量少，嗜睡，糞便量少且 臭味小；對照組仔豬喜好運動，少數出現呼吸系統疾病。由此可見，使用復合微生物添加劑 808發酵飼料飼喂仔豬，提高飼料的利用率，相對降低生產成本，有效預防了仔豬的胃腸及 呼吸系統疾病。實施例2
采用本發明制備的復合微生物添加劑808 (以下簡稱808)在奶牛養殖中應用效果試
驗1.試驗材料
供試奶牛健康無疾病的泌乳荷斯坦奶牛
2.試驗方法
試驗設兩個試驗點，每個試驗點10頭奶牛分為兩組，試驗組飼喂復合微生物添加劑 808，另一組對照。第一個試驗點，每日一次飼料添加。第二個試驗點，每日分早、午、晚三次飼料添加。3.試驗時間為30天。5天預試期，正式試驗期為25天。4.試驗結果
試驗前10天試驗組比對照組產奶量提高8%。后15天平均比對照組提高13. 4%。奶牛 增奶效果顯著。日糧利用率提高，生產成本降低。
權利要求
一種復合微生物添加劑，其特征在于采用 啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) ATCC No.9763，產朊假絲酵母(Candida utilis)ATCC No.22023，沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)ATCC No.8014，嗜酸乳桿菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ATCC No.6633制備菌種；所述菌種的質量百分比如下啤酒酵母30~60%，產朊假絲酵母5~30%，沼澤紅假單胞菌5~30%，植物乳桿菌5~30%，嗜酸乳桿菌5~40%，枯草芽孢桿菌5~25%。
2.根據權利要求1所述的一種復合微生物添加劑的制備方法，其特征在于所述復合 微生物添加劑的制備步驟如下、1.接種將所述各菌種接于斜面培養基上。啤酒酵母培養溫度為30°C，培養時間為6 48h ；產朊假絲酵母培養溫度25 30°C，培養時間為6 48h ；沼澤紅假單胞菌培養溫度為 25 30°C，培養時間為6 48h ；植物乳桿菌培養溫度25 30°C，培養時間為6 48h ；嗜酸 乳桿菌培養溫度為27 37°C，培養時間為6 48h ；枯草芽孢桿菌培養溫度為27 37°C， 培養時間為6 48h ；、2.一級菌種培養將所述菌種分別接種于盛有液體培養基的50mL錐形瓶中，培養基pH 為6. 0 8. 0，錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩24 48h ；采用血球計數板計數，菌 液中菌種數量分別達到IO8個/mL ；
3.二級發酵將所述菌種分別接種于盛有液體培養基的IOOOmL錐形瓶中，培養基 pH3飛，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48 72h ；使菌種數量分別達到IO8個/mL以上， 將各菌種按所述菌種的質量百分比混合；
4.三級發酵將混合后的菌液接種于盛有復合菌劑培養基的發酵罐中，復合菌劑培養 基pH3飛，接種量為1 5%，30°C下培養4 7天，使發酵液中菌數達到8 10 X IO8個/mL， 即得到所述微生物復合菌劑。、3.根據權利要求2所述的一種復合微生物添加劑的制備方法，其特征在于所述液體 培養基配方為1.啤酒酵母采用的液體培養基配方為酪蛋白胨15g/L，酵母25g/L，葡萄糖30g/L， KH2PO4 2. 4g/L, K2HPO4 · 3H20 16. 34 g/L ；2.產阮假絲酵母采用的液體培養基配方為稀釋去除啤酒花的麥芽汁至濃度為 12Brix,瓊脂15 g，高壓滅菌30分鐘；3.沼澤紅假單胞菌采用的液體培養基配方為氯化銨1.5g，磷酸二氫鉀1. 5g，七水硫 酸鎂0. 8g，氯化鈉4. Og,碳酸氫鈉1. 8g，氯化鈣0. 01g, VB0. Ig,酵母粉1. 0 g，乙酸鈉4. Og, 微量元素1. 0mL/L包括(六水氯化鐵5. Og,七水硫酸鋅1. Og,五水硫酸銅0. 05g,六水氯化鈷 0. 5g，硼酸1. Og,四水氯化錳0. 5g)，添加乙酸調節pH，水適量；、4.植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌采用的液體培養基配方為乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、 酵母膏5g、葡萄糖5g、吐溫80 lg、K2HP042g、醋酸鈉5g、檸檬酸二胺2g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸餾水 1000ml ；
5.枯草芽孢桿菌采用的液體培養基配方為牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl3g、pH 7.0。、4.根據權利要求2所述的一種復合微生物添加劑的制備方法，其特征在于所述復合菌劑培養基配方為蜂蜜1 5g/100mL、蔗糖2 10g/100mL、蛋白胨0. 1 0. 5g/100mL、KH2PO4 0. 1 0. 5g/100mL、K2HPO4 0. 5 2g/100mL、MgSO4 · 7Η20 0· 5 2g/100mL、Nacl 0. 5 2g/100mL其余為蒸餾水。5.根據權利要求1所述的復合微生物添加劑的應用，其特征在于所述復合微生物添 加劑在畜禽動物養殖中作為飼料添加劑。
全文摘要
一種復合微生物添加劑及其制備方法與應用，屬于微生態調節劑在畜禽動物養殖中應用的生物材料技術領域。采用啤酒酵母30~60%，產朊假絲酵母5~30%，沼澤紅假單胞菌5~30%，植物乳桿菌5~30%，嗜酸乳桿菌5~40%，枯草芽孢桿菌5~25%。以上菌種分別經過一級菌種培養，二、三級發酵，使發酵液中菌數達到8～10×108個/mL，即得復合微生物添加劑808。本產品經長期實地驗證，配方合理，功效穩定，能夠促進動物生長，提高動物產品產量，提高成活率，防病抗病，提高飼料轉化率，改善產品品質。
文檔編號A23K1/16GK101919494SQ201010296819
公開日2010年12月22日 申請日期2010年9月30日 優先權日2010年9月30日
發明者劉美娜, 崔國臣 申請人:大連三科生物工程有限公司