本發(fā)明涉及生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種可防治根腫病的海藻酸鈉包衣生物菌劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
近年來根腫病危害逐年加重，我國西南、華中、東北和華東各大種植區(qū)都出現(xiàn)過較大規(guī)模的流行。根腫病已成為十字花科作物主要病害，危害面積約6000萬畝，平均產(chǎn)量損失達(dá)20-30%，嚴(yán)重田塊產(chǎn)量損失達(dá)60%以上，甚至絕收。每年導(dǎo)致油菜經(jīng)濟(jì)損失約10億元、蔬菜經(jīng)濟(jì)損失約200億，極大地制約了油料和蔬菜產(chǎn)業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展及農(nóng)民增收。但對于根腫病的防治，尚缺乏高效、低毒、低殘留的化學(xué)藥劑；在農(nóng)業(yè)防治方面，研究不夠全面系統(tǒng)，存在不少弊端。
球毛殼菌發(fā)酵液中的活性物質(zhì)鞘氨醇可以抑制根腫病菌休眠孢子的萌發(fā)，對根腫菌具有較強(qiáng)的抑制作用。另外經(jīng)球毛殼菌誘導(dǎo)處理后，可提高作物體內(nèi)的苯丙氨酸解氨酶、過氧化物酶和多酚氧化酶等防御酶活性，能誘導(dǎo)作物產(chǎn)生抗性，防治根腫病。
張廣洋、楊謙等人在其《大豆根腐病復(fù)合型生物種衣劑的研究》一文中，使用球毛殼菌代謝物、綠色木霉厚垣孢子、球毛殼菌子囊果為活性物質(zhì)，進(jìn)行復(fù)合型生物種衣劑的研制。球毛殼菌及其代謝物的防治作用可作為生物種衣劑的防線，提早抵御病原菌的入侵，可以解決現(xiàn)存部分生物種衣劑在田間防效降低和部分種衣劑缺少防治持久性的問題。
水楊酸(salicylicacid，sa)是廣泛存在于植物界的一種小分子酚類物質(zhì)，可以調(diào)節(jié)植物的開花、側(cè)芽萌發(fā)、性別分化等生長發(fā)育過程，還能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗逆性，抵抗不良因素造成的傷害。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)不足，本發(fā)明提供一種可防治根腫病的海藻酸鈉包衣生物菌劑及其制備方法，可以對作物根腫病進(jìn)行防治。
一種可防治根腫病的海藻酸鈉包衣生物菌劑，由以下重量份原料組成：球毛殼菌菌液34-47份，土豆18-26份，紅糖2-6份，坡縷石38-51份，蒸餾水適量，海藻酸鈉19-26份，氯化鈣13-21份，水楊酸4-12份，無水乙醇適量。
具體步驟如下：
（1）將土豆去皮、切塊，加入蒸餾水置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130℃、0.5-1小時(shí)，并用四層紗布過濾煮沸的土豆，冷卻后再加入紅糖、補(bǔ)足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100℃蒸汽滅菌0.5-1小時(shí)，制得液體培養(yǎng)基；
（2）球毛殼菌菌液的制備：
將球毛殼菌菌種活化，無菌接入上述液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40℃搖床培養(yǎng)10-15日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長，得球毛殼菌菌液；
（3）載體球毛殼菌孢子粉的制備：
將上述球毛殼菌菌液與坡縷石按照配方比例混合攪拌2-4小時(shí)，在3500-4500rmp/min離心5-8分鐘，并在30-40℃溫度下進(jìn)行烘干，得載體球毛殼菌孢子粉；
（4）載藥海藻酸鈉包衣生物菌劑的制備：
①、將氯化鈣、水楊酸置于無水乙醇中，超聲分散使其溶解，配制得2-4%氯化鈣-水楊酸乙醇溶液，備用；
②、稱取海藻酸鈉加入蒸餾水中，在50-70℃條件下于三口燒瓶中攪拌45-65分鐘，直至全部溶解，配制成濃度為3-8%的海藻酸鈉溶液，待溫度降至30-40℃時(shí)，加入步驟（3）載體球毛殼菌孢子粉，超聲30-50分鐘，待溫度降至常溫時(shí)，將該混合溶液滴加至上述氯化鈣-水楊酸乙醇溶液中，迅速交聯(lián)形成顆粒，過濾，干燥，得到載藥海藻酸鈉包衣生物菌劑。
其中，所述球毛殼菌菌液中球毛殼菌的濃度為≥107cfu/ml，優(yōu)選為107-109cfu/ml。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
（1）本發(fā)明對球毛殼菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，使用坡縷石作為載體，對發(fā)酵菌液中球毛殼菌孢子進(jìn)行吸附固定，可提高后期包衣效果，使用具有較好粘結(jié)性的海藻酸鈉對球毛殼菌孢子進(jìn)行包衣處理，增加顆粒微生物菌劑的抗壓強(qiáng)度，在產(chǎn)品運(yùn)輸和施用過程中不易破碎，有利于產(chǎn)品的使用，可以實(shí)現(xiàn)高效防治作物根腫病的效果，同時(shí)防治時(shí)間大為延長。
（2）本發(fā)明中在海藻酸鈉微球中包裹水楊酸，在使用時(shí)可有效促進(jìn)作物種子的萌發(fā)、幼苗生長，顯著提高種子的發(fā)芽勢，另外在低溫脅迫下水楊酸的添加有助于作物幼苗抵御一定的低溫冷害，能提高幼苗的抗冷性，有利于種子在低溫脅迫下較快速出苗和保持出苗整齊一致。
具體實(shí)施方式
一種可防治根腫病的海藻酸鈉包衣生物菌劑，由以下重量份原料組成：球毛殼菌菌液43份，土豆23份，紅糖4份，坡縷石46份，蒸餾水適量，海藻酸鈉24份，氯化鈣19份，水楊酸7份，無水乙醇適量。
具體步驟如下：
（1）將土豆去皮、切塊，加入蒸餾水置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持120℃、0.7小時(shí)，并用四層紗布過濾煮沸的土豆，冷卻后再加入紅糖、補(bǔ)足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100℃蒸汽滅菌0.8小時(shí)，制得液體培養(yǎng)基；
（2）球毛殼菌菌液的制備：
將球毛殼菌菌種活化，無菌接入上述液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速200r/min、30℃搖床培養(yǎng)13日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長，得球毛殼菌菌液；
（3）載體球毛殼菌孢子粉的制備：
將上述球毛殼菌菌液與坡縷石按照配方比例混合攪拌3小時(shí)，在4000rmp/min離心6分鐘，并在35℃溫度下進(jìn)行烘干，得載體球毛殼菌孢子粉；
（4）載藥海藻酸鈉包衣生物菌劑的制備：
①、將氯化鈣、水楊酸置于無水乙醇中，超聲分散使其溶解，配制得3%氯化鈣-水楊酸乙醇溶液，備用；
②、稱取海藻酸鈉加入蒸餾水中，在60℃條件下于三口燒瓶中攪拌55分鐘，直至全部溶解，配制成濃度為6%的海藻酸鈉溶液，待溫度降至35℃時(shí)，加入步驟（3）載體球毛殼菌孢子粉，超聲40分鐘，待溫度降至常溫時(shí)，將該混合溶液滴加至上述氯化鈣-水楊酸乙醇溶液中，迅速交聯(lián)形成顆粒，過濾，干燥，得到載藥海藻酸鈉包衣生物菌劑。
其中，所述球毛殼菌菌液中球毛殼菌的濃度為≥107cfu/ml，優(yōu)選為107-109cfu/ml。