專利名稱：果實(shí)角質(zhì)層的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及果實(shí)角質(zhì)層的分離方法。
背景技術(shù)：
陸生高等植物器官的表面通常覆蓋著一層脂肪性的、非細(xì)胞結(jié)構(gòu)的薄膜，這層薄膜即角質(zhì)層。角質(zhì)層作為植物與外界環(huán)境之間的一道屏障，在植物生長(zhǎng)發(fā)育和適應(yīng)外界環(huán)境方面起重要作用。這層角質(zhì)層不僅可以抵御細(xì)菌、病毒等微生物的侵襲以及其它的外界產(chǎn)生的不良影響，同時(shí)也對(duì)植物體本身的各種生理活動(dòng)起調(diào)節(jié)作用。果實(shí)表皮外層也有角質(zhì)層，它可以防止果實(shí)內(nèi)水分喪失、營(yíng)養(yǎng)滲漏、機(jī)械損傷，還可避免病原菌侵染、病蟲(chóng)害侵入以及外界環(huán)境因素如風(fēng)力、干旱、紫外輻射等的脅迫。對(duì)于采摘后的果實(shí)而言，在光合作用和外界物質(zhì)供給停止的前提下，果皮角質(zhì)層對(duì)氣體和水分的透性直接關(guān)系著果實(shí)采摘后各種生理生化變化和質(zhì)量品質(zhì)。此外，大量研究結(jié)果表明果實(shí)角質(zhì)層生物學(xué)特性與果實(shí)的裂果關(guān)系密切，最初的角質(zhì)層龜裂導(dǎo)致了最終的裂果。同時(shí)， 研究者還認(rèn)為果皮角質(zhì)層在果實(shí)抵抗環(huán)境逆境方面可能起著重要作用。鑒于上述原因，深入系統(tǒng)地研究果實(shí)角質(zhì)層的結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成、生物合成、生理特性對(duì)提高果實(shí)采前的抵抗能力以及采后的貯藏保鮮具有重要意義，其研究成果有望直接引向?qū)麑?shí)角質(zhì)層抵抗環(huán)境逆境功能的遺傳改良。而開(kāi)展這些研究工作的前提需要有形態(tài)結(jié)構(gòu)完整并且組成成分和理化特性不受分離方法影響的離體角質(zhì)層。然而，過(guò)去對(duì)于角質(zhì)層的研究大多集中在植物葉片上，專門針對(duì)果實(shí)角質(zhì)層的分離技術(shù)鮮有報(bào)道。由于葉片與果實(shí)表皮在結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成上存在很大差異，對(duì)葉片的分離技術(shù)并不適合于果實(shí)角質(zhì)層的分離。如通常的植物葉片角質(zhì)層的分離方法直接用來(lái)分離蘋果角質(zhì)層，會(huì)發(fā)現(xiàn)在光學(xué)顯微鏡下觀察有明顯的表皮細(xì)胞粘附，致使角質(zhì)層的形態(tài)結(jié)構(gòu)不清晰。因此需要針對(duì)果實(shí)研究一種新的分離角質(zhì)層的方法，使其能快速且完整的分離出角質(zhì)層，使分離出的角質(zhì)層形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，減少表皮細(xì)胞的粘附。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，該方法不僅能快速的將果實(shí)的角質(zhì)層分離出來(lái)，而且還能很大限度的保留角質(zhì)層的完整結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的一種果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，包括取果皮、酶解分離角質(zhì)層、清洗角質(zhì)層、保存角質(zhì)層，以上所說(shuō)的酶解分離角質(zhì)層為雙步酶解法酶解，然后再加入酸性試劑處理；
其中所述的雙步酶解方法中，酶解液中含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 H的果膠酶、1 H的纖維素酶，余量為PH為3. 8 4. 2、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含 ImM 的 NaN3 ；
第一步酶解條件是將果皮置于盛有酶解液的燒杯中于35 40°C下酶解，酶解時(shí)間為12 72h，酶解時(shí)，將盛有果皮和酶解液的燒杯置于振蕩器中振蕩，振蕩的轉(zhuǎn)速為80 120rmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗角質(zhì)層；
第二步酶解條件是將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后得到的角質(zhì)層置于盛有酶解液的燒杯中，于35 40°C下酶解，酶解時(shí)間為12 Mh ；酶解時(shí)，將盛有角質(zhì)層和酶解液的燒杯置于振蕩器中振蕩，振蕩的轉(zhuǎn)速為80 120rmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗角質(zhì)層；
采用酸性試劑處理的具體步驟為將經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗的角質(zhì)層取出，加入酸性試劑；以上所述的酸性試劑為草酸與草酸銨的混合溶液或者是飽和氯酸鉀的硝酸溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋?duì)杀逗?，加入固體καο3溶解至飽和。優(yōu)選的，一種果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，包括下述的步驟
a.準(zhǔn)備原材料取果實(shí)的果皮，將果皮切削成直徑為1.5 2. 5cm的圓形；
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液中含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 21的果膠酶、1 21的纖維素酶，余量為pH為3. 8 4. 2、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM的NaK3 ；
第一步酶解取步驟a中的圓形果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 25 ml于燒杯中，在35 40°C下酶解12 72h，酶解時(shí)，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為80 120rmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 25 ml于燒杯中，35 40°C下酶解，酶解時(shí)間為12 Mh ；酶解時(shí)，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為80 120rmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20 50ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為草酸與草酸銨混合溶液或者是飽和氯酸鉀的硝酸溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1.6%;所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋?duì)杀逗?，加入固體καο3溶解至飽和；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層用水沖洗，加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液清洗，直至緩沖液澄清為止；
d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于1 4°C的冰箱中備用。以上所述的果皮為圓形，取圓形的果皮有利于分離出平整無(wú)卷曲的角質(zhì)層。酶解過(guò)程中最常見(jiàn)的問(wèn)題之一是出現(xiàn)角質(zhì)層卷曲或破裂現(xiàn)象，其原因是角質(zhì)層受到外界逆向的或者劇烈的攪拌，采用IOOrmp的溫和轉(zhuǎn)速不僅能避免這個(gè)問(wèn)題，還能加快酶解過(guò)程，優(yōu)選的，振蕩器的轉(zhuǎn)速為lOOrmp。優(yōu)選的，酸性試劑為草酸與草酸銨混合溶液，其中，草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6%。更優(yōu)選的，一種果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，包括下述的步驟
a.準(zhǔn)備原材料取果實(shí)的果皮，將果皮切削成直徑為2.5cm的圓形；
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解將步驟a中的圓形果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液15 ml 于燒杯中，在40°C下酶解12h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，40°C下酶解，酶解時(shí)間為12h ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液或者是硝酸與飽和的氯酸鉀溶液， 所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層用水沖洗，加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為100W，清洗直至緩沖液澄清為止；
d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。以上所述的果實(shí)為番茄、蘋果、梨、葡萄、李子、芒果中的任一種。本發(fā)明采用酶解法分離果實(shí)角質(zhì)層依據(jù)是果實(shí)角質(zhì)層外面是一層蠟質(zhì)，里側(cè)通過(guò)果膠層同表皮細(xì)胞壁分開(kāi)，而細(xì)胞壁主要由果膠、纖維素、半纖維素組成，三者分別占細(xì)胞壁多糖類的35%、20 30%和25%。采用纖維素酶和果膠酶的混合酶液對(duì)果皮進(jìn)行兩次酶解來(lái)分離角質(zhì)層，其作用條件溫和，分離效率高，分離的角質(zhì)層清晰完全，少有表皮細(xì)胞的粘附，能夠滿足科學(xué)研究試驗(yàn)對(duì)離體角質(zhì)層的需求。本發(fā)明的有益效果是
(1)采用酶對(duì)果實(shí)角質(zhì)層分離，其作用條件溫和，不會(huì)對(duì)角質(zhì)層產(chǎn)生損傷；
(2)采用本發(fā)明的兩步酶解法和酸性試劑結(jié)合的方法，其分離效率高，分離的角質(zhì)層清晰完全，鮮有表皮細(xì)胞的粘附，能夠滿足科學(xué)研究試驗(yàn)對(duì)離體角質(zhì)層的需求；
(3)酶解以后再采用酸性試劑對(duì)角質(zhì)層進(jìn)行處理，更進(jìn)一步的使角質(zhì)層上粘附的表皮細(xì)胞脫落下來(lái)，從而使角質(zhì)層分離得更徹底更完全；
(4)采用本發(fā)明的方法分離出來(lái)的角質(zhì)層外觀平整的、形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，從而為進(jìn)一步開(kāi)展果實(shí)角質(zhì)層的科學(xué)研究提供可靠的材料來(lái)源。


圖1為實(shí)施例1番茄離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖2為對(duì)照例1番茄離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片；
圖3為對(duì)照例2番茄離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖4為實(shí)施例1番茄離體角質(zhì)層表面立體結(jié)構(gòu)圖； 圖5為對(duì)照例1番茄離體角質(zhì)層表面立體結(jié)構(gòu)圖； 圖6為對(duì)照例2番茄離體角質(zhì)層表面立體結(jié)構(gòu)圖； 圖7為實(shí)施例2蘋果離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖8為實(shí)施例3梨離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片；圖9為實(shí)施例4葡萄離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖10為實(shí)施例5李子離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖11為實(shí)施例6芒果離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片； 圖12為實(shí)施例7芒果離體角質(zhì)層在顯微鏡下觀察的圖片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明作更進(jìn)一步的說(shuō)明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解本發(fā)明，但并不以此限制本發(fā)明。本發(fā)明中，對(duì)分離后的果實(shí)角質(zhì)層的形態(tài)結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)按照下述方法進(jìn)行測(cè)定和iff介。角質(zhì)層的形態(tài)結(jié)構(gòu)采用光學(xué)顯微鏡觀察。按常規(guī)方法直接將角質(zhì)層置于載玻片上，用帶有C⑶數(shù)碼攝像的光學(xué)顯微鏡(BA80 Digital，Motic，China)進(jìn)行觀察和拍照。顯微鏡采用IOX物鏡進(jìn)行觀察，分辨率設(shè)置為800X600，通過(guò)“計(jì)算白平衡”和“讀取背景” 功能得到最接近實(shí)際角質(zhì)層圖像的照片。角質(zhì)層的超微結(jié)構(gòu)采用透射電子顯微鏡觀察。樣品先后經(jīng)磷酸緩沖液配制的戊二醛固定液及鋨酸(四氧化鋨)作前、后固定，乙醇梯度脫水，Epon 812包埋，超薄切片機(jī)切片， 在經(jīng)醋酸雙氧鉬及檸檬酸鉛染色，透射電鏡觀察拍片。實(shí)施例1番茄角質(zhì)層的分離
a.準(zhǔn)備原材料將原料番茄用清水沖洗干凈后，在果實(shí)果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM的NaN3 ；
第一步酶解取步驟a中的蕃茄果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液15 ml 于燒杯中，在40°C下酶解12h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時(shí)間為12h ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為100W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質(zhì)層中的酸性物質(zhì)如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水■量為5%以下，C存于21的々搏苜中備用。對(duì)照例1
對(duì)照例1的acd步驟同實(shí)施例1，不同之處在于，步驟b為
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的·3 ；酶解取步驟a中的蕃茄果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，在35°C下酶解36h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為lOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑； 以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ； 對(duì)照例2
對(duì)照例2的acd步驟同實(shí)施例1，不同之處在于，步驟b為
酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶， 余量為PH為4. O、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM的NaN3 ； 第一步酶解取步驟a中的蕃茄果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解12h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時(shí)間為12h ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗； 表1角質(zhì)層分離效率及效果對(duì)照表
實(shí)施例1對(duì)照例1對(duì)照例2酶解時(shí)間/h243624光鏡下角質(zhì)層清晰度形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰完全形態(tài)結(jié)構(gòu)不清晰形態(tài)結(jié)構(gòu)不清晰表皮細(xì)胞粘附幾乎無(wú)約占角質(zhì)層部面積的80%以上的表皮細(xì)胞粘附約占角質(zhì)層部面積的10%的表皮細(xì)胞粘附電鏡下角質(zhì)層表面三維立體結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)清晰三維結(jié)構(gòu)不清晰三維結(jié)構(gòu)不清晰
結(jié)果分析與實(shí)施例1相比，對(duì)照例1采用一步酶解與酸性試劑處理結(jié)合的方法，其酶解時(shí)間為36 h，要長(zhǎng)于雙步酶解法；對(duì)照例2采用雙步酶解法，不加入酸性試劑，酶解后的角質(zhì)層在外觀狀態(tài)上要次于實(shí)施例1。因此，無(wú)論是從處理時(shí)間上來(lái)看，還是從分離后的角質(zhì)層形態(tài)來(lái)看，采用雙步酶解法與酸性試劑結(jié)合處理果皮分離角質(zhì)層的方法是最佳的。
實(shí)施例2蘋果角質(zhì)層的分離
a.準(zhǔn)備原材料將原料蘋果用清水沖洗干凈后，在果實(shí)果頰處取直徑為2cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的蘋果果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解48h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時(shí)間為Mh ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質(zhì)層中的酸性物質(zhì)如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。實(shí)施例3白梨角質(zhì)層的分離
a.準(zhǔn)備原材料將白梨用清水沖洗干凈后，在果實(shí)果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的白梨果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解48h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時(shí)間為Mh ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質(zhì)層中的酸性物質(zhì)如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。實(shí)施例4葡萄角質(zhì)層的分離
a.準(zhǔn)備原材料將原料葡萄用清水沖洗干凈后，在果實(shí)果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的葡萄果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解60h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時(shí)間為Mh ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為 lOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質(zhì)層中的酸性物質(zhì)如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。實(shí)施例5李子角質(zhì)層的分離
a.準(zhǔn)備原材料將原料李子用清水沖洗干凈后，在果實(shí)果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的李子果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在40°C下酶解Mh，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，40°C下酶解，酶解時(shí)間為12h ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質(zhì)層中的酸性物質(zhì)如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。實(shí)施例6芒果角質(zhì)層的分離
a.準(zhǔn)備原材料將原料芒果用清水沖洗干凈后，在果實(shí)果頰處取直徑為2.5cm左右的圓形果皮，將果皮上的果肉刮掉，再用蒸餾水沖洗果皮；
b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的腳3 ；
第一步酶解取步驟a中的芒果果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml 于燒杯中，在35°C下酶解50h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時(shí)間為12h ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；
酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；
c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層先用水沖洗，再加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為80W，清洗直至緩沖液澄清為止，以去除粘附在角質(zhì)層中的酸性物質(zhì)如酚類、脂肪酸等；
d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。 實(shí)施例7芒果角質(zhì)層的分離
與實(shí)施例6的不同之處在于，實(shí)施例7中加入酸性試劑處理的步驟為取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；該酸性試劑是硝酸與飽和的氯酸鉀溶液，所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋?duì)杀逗螅尤牍腆wκαο3溶解至飽和，飽和氯酸鉀的硝酸溶液，即用即配。
權(quán)利要求
1.果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，包括取果皮、酶解分離角質(zhì)層、清洗角質(zhì)層、保存角質(zhì)層，其特征在于所述的酶解分離角質(zhì)層為雙步酶解法酶解，然后再加入酸性試劑處理；其中所述的雙步酶解方法中，酶解液中含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 21的果膠酶、1 21的纖維素酶，余量為pH為3. 8 4. 2、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含 ImM 的 NaN3 ；第一步酶解條件是將果皮置于盛有酶解液的燒杯中于35 40°C下酶解，酶解時(shí)間為12 72h，酶解時(shí)，將盛有果皮和酶解液的燒杯置于振蕩器中振蕩，振蕩的轉(zhuǎn)速為80 120rmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗角質(zhì)層；第二步酶解條件是將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后得到的角質(zhì)層置于盛有酶解液的燒杯中，于35 40°C下酶解，酶解時(shí)間為12 Mh ；酶解時(shí)，將盛有角質(zhì)層和酶解液的燒杯置于振蕩器中振蕩，振蕩的轉(zhuǎn)速為80 120rmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗角質(zhì)層；采用酸性試劑處理的具體步驟為將經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗的角質(zhì)層取出，加入酸性試劑；以上所述的酸性試劑為草酸與草酸銨的混合溶液或者是飽和氯酸鉀的硝酸溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋1倍后，加入固體KC103溶解至飽和。
2.如權(quán)利要求1所述的果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，包括下述的步驟a.準(zhǔn)備原材料取果實(shí)的果皮，將果皮切削成直徑為1.5 2. 5cm的圓形；b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液中含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 21的果膠酶、1 21的纖維素酶，余量為pH為3. 8 4. 2、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM的NaR3 ；第一步酶解取步驟a中的圓形果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 25 ml于燒杯中，在35 40°C下酶解12 72h，酶解時(shí)，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為80 120rmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 25 ml于燒杯中，35 40°C下酶解，酶解時(shí)間為12 Mh ；酶解時(shí)，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為80 120rmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20 50ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為草酸與草酸銨混合溶液或者是飽和氯酸鉀的硝酸溶液，所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1.6%;所述的飽和氯酸鉀的硝酸溶液，是將濃硝酸稀釋?duì)杀逗?，加入固體καο3溶解至飽和；c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層用水沖洗，加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液清洗，直至緩沖液澄清為止；d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于1 4°C的冰箱中備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，其特征在于所述的振蕩器的轉(zhuǎn)速為IOOrmp。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，其特征在于所述的酸性試劑為草酸與草酸銨混合溶液，其中，草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為 16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.6%。
5.如權(quán)利要求1所述的果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，包括下述的步驟a.準(zhǔn)備原材料取果實(shí)的果皮，將果皮切削成直徑為2.5cm的圓形；b.酶解分離角質(zhì)層配制酶解液，酶解液為含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的果膠酶、1. 5%的纖維素酶，余量為PH為4. 0、濃度為0. 05M的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，在該緩沖液中還含ImM 的 NaK3 ；第一步酶解將步驟a中的圓形果皮置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液15 ml 于燒杯中，在40°C下酶解12h，啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；第二步酶解將經(jīng)過(guò)第一步酶解并沖洗后的角質(zhì)層取出置于50ml的燒杯中，取以上配制好的酶解液10 ml于燒杯中，35°C下酶解，酶解時(shí)間為12h ；啟動(dòng)振蕩器并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)速為 IOOrmp，振蕩直至酶解結(jié)束，酶解結(jié)束后取出角質(zhì)層，用蒸餾水沖洗；酸性試劑處理取經(jīng)過(guò)第二步酶解并沖洗后的角質(zhì)層于50ml的燒杯中，加入20ml酸性試劑；以上所述的酸性試劑為為草酸與草酸銨混合溶液或者是硝酸與飽和的氯酸鉀溶液， 所述的草酸濃度為4g/l，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 4%，草酸銨溶液濃度為16g/l，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1. 6% ；c.清洗取步驟b中酶解后的角質(zhì)層用水沖洗，加入pH9.0的硼酸-硼酸鈉緩沖液在超聲波下清洗，清洗的功率為100W，清洗直至緩沖液澄清為止；d.保存將分離的角質(zhì)層用水沖洗并晾干至其水份含量為5%以下，貯存于2°C的冰箱中備用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或5中任一項(xiàng)所述的果實(shí)的角質(zhì)層分離方法，其特征在于所述的果實(shí)為番茄、蘋果、梨、葡萄、李子、芒果中的任一種。
全文摘要
本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種果實(shí)角質(zhì)層的分離方法。該方法的特點(diǎn)是采用含有纖維素酶和果膠酶的復(fù)合酶解液對(duì)果皮進(jìn)行雙步酶解分離出角質(zhì)層，然后再加入酸性試劑處理角質(zhì)層，使角質(zhì)層表面粘附的表皮細(xì)胞脫落下來(lái)，從而使角質(zhì)層分離得更徹底和完全。本發(fā)明提供的果實(shí)角質(zhì)層分離方法，作用條件溫和，而且分離效率高，分離出來(lái)的角質(zhì)層清晰完全，鮮有表皮細(xì)胞的粘附，角質(zhì)層平整美觀、形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，從而為進(jìn)一步開(kāi)展果實(shí)角質(zhì)層的科學(xué)研究提供可靠的材料來(lái)源。
文檔編號(hào)A23N7/01GK102342570SQ201110297629
公開(kāi)日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2011年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月29日
發(fā)明者侯成杰, 張長(zhǎng)峰, 王國(guó)利, 魏雪琴 申請(qǐng)人:山東商業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院