專利名稱：松乳菇菌絲體固體發酵方法及其固體發酵提取物的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及固體發酵技術領域，具體涉及一種野生真菌菌絲體的固體發酵及其固體發酵提取物在動物和人保健上的應用，特別是松乳菇菌絲體固體培養及其培養物提取制備多糖多肽添加劑在動物與人保健上的應用。
背景技術：
據報道，許多藥用與食(藥)用真菌的多糖具有提高免疫力、抗氧化、抗菌、抗病毒和抗腫瘤的功能，是當今開發動物和人保健品的重要方向，現有靈芝多糖、香菇多糖等一批產品上市。其原料來源，一是野外采取或人工栽培的子實體，二是人工發酵的菌絲體。液體深層發酵是生產真菌菌絲體的重要方法，但設備要求高，投資大，生產成本高，作為動物保健品一飼料添加劑開發成本太高，難以推廣。固體發酵是我國特有的一種微生物發酵工藝， 食(藥)用真菌固體發酵始于20世紀60年代，應用科技的手段在人工嚴格控制條件下，研究以富含碳、氮及礦物質等各種營養成分的農副產品作為發酵基質，用特定的純種食(藥) 用真菌作為發酵菌種，雙方構成發酵組合，在特定的條件下進行發酵。在固體培養中，菌絲細胞能在培養室內處于最適的溫度、氧氣、二氧化碳等環境中生長，因此菌絲生長快速，能在短時間內產生大量的菌絲體。松乳菇又名美味松乳菇、雁鵝菌、松杉菌、松菌、茶花菌、寒菌；系紅乳菇科 (Russnlaceae)，乳菇屬(Lactarius)真菌；其肉質細嫩，味道鮮美獨特，營養豐富，是稀有的食用菌，在湖南等地被視為山中珍品，市場上十分走俏；同時松乳菇也可藥用，研究報道從松乳菇子實體、菌絲體或發酵液中提取出來的胞內或胞外多糖，具有抑制腫瘤、抗菌、提高機體免疫力等多種生理活性。松乳菇與松口磨、美味牛肝菌等菌一樣，都屬于菌根菌，與松、杉、柏等樹種形成菌根菌。這類菌與植物共生，有特殊的生態條件、營養方式和子實體分化發育條件，對它馴化培養有很大的難度。因此，目前尚不能人工栽培，市場供應全依賴于野生采集。目前國內對松乳菇的培養研究主要采用菌絲體液體深層發酵法，以制備菌絲多糖。多數研究表明，松乳菇菌絲體液體發酵，在以葡萄糖、蔗糖、糊精、甘露醇等為碳源，以玉米漿、牛肉膏、硝酸銨等為氮源的培養基上生長良好，礦物質七水硫酸鎂、氯化鈉能使菌絲體啟動加快，磷酸氫二甲使菌絲體產量提高，VB1、VB6、煙酸對菌絲體生長有促進作用，適宜培養溫度為25-271，？!1值6-7.5。液體深層發酵具有發酵周期短、產量大等優點，是一種大量獲取松乳菇多糖的有效途徑；但存在著設備投資大，耗能高等問題。根據相關的研究， 菌絲體固體發酵可以克服以上問題，但對松乳菇菌絲體的固體發酵研究鮮為報道；另外，關于真菌活性成分的研究多限于多糖，而多肽研究未見報道。因此，研究松乳菇菌絲體的固體發酵及其活性成分對該菌產品的開發均具有重要的意義。

發明內容
針對現有技術的不足，本發明的提供了一種松乳菇菌絲體的固體發酵方法，以及通過該固體發酵方法得到的產物粉碎和提取物的應用。該固體發酵方法所用的培養基是本發明篩選出來的一種用于松乳菇菌絲體的固體發酵培養基，使得多糖多肽含量均顯著提高，另外可以在該培養基中添加植物類中草藥，提高提取物中多糖多肽的含量，使得其在可以應用于食品或者飼料添加劑中，增加人畜免疫力。本發明的技術方案之一是一種用于松乳菇菌絲體固體培養的培養基，包括碳源、氮源、微量元素和水， 水占培養基總質量的百分含量為40% -70%，微量元素占培養基總質量的百分含量為 0. 08% -0. 1%，其余為碳源和氮源，其中氮元素與碳元素之比(N C)為1 5-18 ；其中，碳源選自麩皮、面粉、米糠、秸稈粉、大米粉、玉米粉和膨化玉米等中的一種或幾種；氮源選自玉米酒渣蛋白、玉米皮、植物蛋白、豆粕、棉粕和菜粕等中的一種或幾種； 微量元素選自硫酸鎂或磷酸氫二鉀等。本發明的一種用于松乳菇菌絲體固體培養的培養基的優先配方如下培養基中水占培養基總質量的百分含量為55% -65% ；微量元素占培養基總質量的百分含量為0.09%，其余為碳源和氮源，其中氮元素與碳元素之比為1 8-15;所述碳源為麩皮和膨化玉米，其中麩皮與膨化玉米的質量比例為4 1 ；所述氮源為豆粕和玉米皮， 其中豆粕和玉米皮的質量比例為1 3。本發明的一種用于松乳菇菌絲體固體培養的培養基還包括在培養基中添加植物類中草藥提高和改善發酵產物，植物類中草藥添加量為培養基總質量的5% -30%。所述植物類中草藥添加劑選自牛膝、淮山、大棗、甘草、首烏、百合、當歸、麥冬、白術、黨參、粉葛、黃精、枸杞、天花粉、玉竹、薏米、黃芪和絞股藍等中的一種或幾種。所述植物類中草藥添加劑優選選自牛膝、淮山、麥冬和絞股藍等中的一種或幾種。本發明的技術方案之二是一種松乳菇菌絲體的固體發酵方法，使用上述培養基，在一定的培養條件下對松乳菇菌絲體進行固體發酵，所述一定的培養條件為溫度18°C -37 PH值5-8、菌種日齡 M-120h、接種量10-30%、發酵周期2-7d。所述一定的培養條件優選為溫度-32PH值6. 0-6. 8、菌種日齡接種量20%、發酵周期3-4d。本發明的技術方案之三是
一種松乳菇菌絲體的固體發酵加工物，用上述固體發酵方法進行固體發酵后得到的產物，經超微粉碎直接應用，或加酶處理，微波或超聲波提取，得到含有多糖多肽的提取物。從松乳菇菌絲體中提取多糖和多肽的方法是現有技術中已知的。本發明的松乳菇菌絲體的固體發酵提取物作為食用添加劑方面的應用。本發明的松乳菇菌絲體的固體發酵粉碎物和提取物作為飼料添加劑方面的應用。下面對本發明的方法做進一步的解釋和說明本發明對松乳菇菌絲體進行固體發酵，生產多糖多肽活性保健產品，用于動物保健。即根據藥食真菌的營養特點和固體發酵的要求，選用適合的價廉的農副產品作碳氮源進行篩選與配比優化培養基，同時優化培養的溫度、PH值、種齡、接種量、發酵周期等培養條件，提高松乳菇菌絲體的生長速度和多糖多肽的生物產量。經試驗挑選出麩皮、膨化玉米作為碳源，豆粕、玉米皮作為氮源制作培養基效果好，經重復實驗證明其菌絲生長量、生長速度和多糖多肽含量均顯著高于其他物料配種培養基的產量。本發明提供的松乳菇菌培養基是選育來源廣、產量豐富、價格低廉的農副產品為氮源和碳源，經適當的配比，篩選出適宜的基礎培養基。本發明添加植物類中草藥改善松乳菌菌絲體發酵的多糖多肽成分，增強藥理活性經對發酵物組份分析發現添加植物類中草藥的發酵培養基菌絲多肽組份明顯改變，經動物試驗(實施例4)證明藥理作用增強。本發明培養基的固體料粗細與含水量適中，物料不要太細也不要太粗，含水量不能過多或過少(料含水量最好是拌好后用手抓緊能從指縫間看見有水分滲出但不流走)， 約60%左右(55%-65%)為最優。這樣可以使培養基之間有一定的空隙，通氣容氧好，松乳菇菌絲體生長旺盛，松乳菇菌絲生長情況與多糖多肽的含量成正比。培養基料太細和含水分過大容易使培養基成團，直接影響通氣量，從而影響菌絲體的生長；培養基料過粗糙則松乳菇菌絲的接觸面減小，使菌絲體的生長速度減慢；培養基水分含量過少則不能滿足松乳菇菌絲體大量生長繁殖的水分要求，從而降低發酵料中菌絲體的量及生長速度，這也直接減少了松乳菇多糖的含量及多糖成分。與現有技術相比，本發明的優勢和積極效果如下1、本發明改變一般松乳菇菌絲體液體發酵為固體發酵，提高了一種簡單的松乳菇菌絲體固體發酵方法，培養效果好，功能物質不易流失。2、本發明優化了松乳菇菌絲體固體發酵的培養基和培養條件，能大幅度提高產品產量和質量，篩選出的培養基其中的原料為農副產品，來源廣、數量大、價格低、生產效益好。3、本發明研究了松乳菇菌絲體固體發酵多糖多肽蛋白的生產情況及其生物活性， 可以作為飼料添加劑和動物保健食品，開發簡單，易于推廣。4、本發明篩選出松乳菇菌絲體固體發酵的植物類中草藥添加劑能提高菌絲體及其多糖多肽的產量，提高功能物的活性，為植物類中草藥的生物發酵開發新的菌種和新的方法。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明做進一步的解釋和說明，實施例中所述百分含量均指質量百分含量，所述比例為質量比例。實施例1 培養基不同配比對松乳菇菌絲體胞內多糖多肽產量的影響1.材料松乳菇菌種由湖南民康生物技術研究所保存。關于松乳菇菌種的獲得有多種方法，現有技術中有介紹。本發明與松乳菇菌種本身無關。松乳菇一般選用的固體培養基基質有油糠粉、麩皮、米糠、秸稈粉、DDGS、大米粉、 玉米皮、玉米粉、膨化玉米、豆粕、菜粕、棉粕等，按照不同比例配制。PDA營養液玉米漿1%、硝酸銨0. 15%、七水硫酸鎂0.01%、羧甲基纖維素鈉 0. 4%、葡萄糖1. 5%，蒸餾水定容到100ml, ρΗ6· 5。2.方法
將斜面培養基上的菌種接種于PDA固體培養基的平板上活化一次，然后挑選 2cm大小長勢好的菌絲體接入裝有PDA液體培養基的三角瓶中，于恒溫搖床上(轉速 150rpm)26°C培養24h得到菌懸液，再將菌懸液按15%的接種量接種到不同配比的固體培養基中(每一個配比接三瓶)，于恒溫培養箱中28°C培養3d，每隔IOh搖動三角瓶一次，每天觀察菌絲體生長情。3d后將培養基質倒出于65°C烘箱中烘干，粉碎過60目篩，水提取后測多糖多肽含量，比較不同培養基配方配比對松乳菇產多糖多肽的影響。松乳菇多糖多肽提取松乳菇發酵基質干燥粉碎過60目，料液比1 50，90°C水浴4h，取提取液2000rpm離心lOmin，取離心液稀釋一定倍數后測多糖多肽含量。3.結果表1比較不同培養基配方對松乳菇產多糖多肽的影響
權利要求
1.一種用于松乳菇菌絲體固體培養的培養基，包括碳源、氮源、微量元素和水，其特征在于，水占培養基總質量的百分含量為40% _70%，微量元素占培養基總質量的百分含量為0.08%-0. 1%，其余為碳源和氮源，其中氮元素與碳元素之比為1 5-18;其中，碳源選自麩皮、面粉、米糠、秸稈粉、大米粉、玉米粉和膨化玉米中的一種或幾種； 氮源選自玉米酒渣蛋白、玉米皮、植物蛋白、豆粕、棉粕和菜粕中的一種或幾種；微量元素選自硫酸鎂或磷酸氫二鉀。
2.根據權利要求1所述一種用于松乳菇菌絲體固體培養的培養基，其特征在于，所述水占培養基總質量的百分含量為"65% ；微量元素占培養基總質量的百分含量為 0.09%，其余為碳源和氮源，其中氮元素與碳元素之比為1 8-15 ；所述碳源為麩皮和膨化玉米，其中麩皮與膨化玉米的質量比例為4 1 ；所述氮源為豆粕和玉米皮，其中豆粕和玉米皮的質量比例為1 3。
3.根據權利要求1或2所述一種用于松乳菇菌絲體固體培養的培養基，其特征在于，在培養基中添加植物類中草藥，植物類中草藥添加量為培養基總質量的5% -30%。
4.根據權利要求3所述一種用于松乳菇菌絲體固體培養的培養基，其特征在于，所述植物類中草藥添加劑選自牛膝、淮山、大棗、甘草、首烏、百合、當歸、麥冬、黨參、粉葛、黃精、 枸杞、天花粉、薏米、黃芪和絞股藍等中的一種或幾種。
5.根據權利要求4所述一種用于松乳菇菌絲體固體培養的培養基，其特征在于，所述植物類中草藥添加劑選自牛膝、淮山、麥冬和絞股藍中的一種或幾種。
6.一種松乳菇菌絲體的固體發酵方法，其特征在于，使用權利要求1-5之一所述的培養基，在一定的培養條件下對松乳菇菌絲體進行固體發酵，所述一定的培養條件為溫度 180C -37°C、PH 值 5. 0-8. 0、菌種日齡 12h_120h、接種量 10% -30%、發酵周期 2d_7d。
7.根據權利要求6所述的一種松乳菇菌絲體的固體發酵方法，其特征在于，所述一定的培養條件為溫度26°C -32°C、PH值6. 0-6. 8、菌種日齡24h_48h、接種量20%、發酵周期 3d-4d。
8.一種松乳菇菌絲體的固體發酵提取物，其特征在于，用權利要求6-7之一所述固體發酵方法進行固體發酵后得到的產物，經超微粉碎直接應用；或加酶處理，微波或超聲波提取，得到含有多糖多肽的提取物。
9.權利要求8所述松乳菇菌絲體的固體發酵提取物作為食用添加劑在保健品方面的應用。
10.權利要求8所述松乳菇菌絲體的固體發酵粉碎物和提取物作為飼料添加劑在動物飼料方面的應用。
全文摘要
本發明涉及固體發酵技術領域，具體提供了松乳菇菌絲體固體發酵方法及其固體發酵提取物的應用。松乳菇菌絲體固體發酵方法為用本發明的培養基，在一定的培養條件下對松乳菇菌絲體進行固體發酵，所述一定的培養條件為培養基氮碳比為1∶5-18，溫度18℃-37℃、PH值5-8、菌種日齡24h-120h、接種量10％-30％、發酵周期2d-7d。該固體發酵方法進行固體發酵后得到的產物，經超微粉碎，加酶處理，微波或超聲波等方法提取，得到含有多糖多肽的提取物。該提取物可以作為食用添加劑應用于保健品領域，也可以作為飼料添加劑應用于動物飼料領域。本發明還可以在培養基中添加適當的植物類中草藥添加劑以提高菌絲體及其胞內胞外多糖多肽的產量，增強提取物的藥理活性。
文檔編號C05G1/00GK102503647SQ20111034951
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月8日 優先權日2011年11月8日
發明者肖兵南 申請人:肖兵南