專利名稱：亞油酸在防治南方根結線蟲方面的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬農業技術領域。涉及一種脂肪酸化合物-亞油酸在防治南方根結線蟲方面的應用。
背景技術：
根結線蟲是世界范圍內的重要病原生物之一，它給世界農業生產帶來了嚴重損失，每年全世界因此而造成的農業經濟損失高達1570億(Abad，P，Gouzy, J, Aury，J. Μ.，et al. Genome sequence of the metazoan plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita. Nat. Biotechnol. 2008,26,909-915)。目前世界上已經報道的根結線蟲有90余種，而南方根結線蟲(Meloidogyne incognita)、爪哇根結線蟲(M. javanica)，花生根結線蟲(M. arenaria) 和北方根結線蟲(M.hapla)占整個根結線蟲的95% (武揚，鄭經武，商晗武.根結線蟲分類和鑒定途徑及進展.浙江農業學報.2005，17:106-110)。南方根結線蟲造成設施生產的一系列問題并使其大量經濟作物減產。而在我國北方，以南方根結線蟲為主，根結線蟲的寄主植物范圍廣泛，超過3000中植物，包括單子葉植物、雙子葉植物、草本植物、木本植物，特別是蔬菜中的茄科、葫蘆科等經濟價值高的作物，尤其是番茄和黃瓜，受害后，一般可造成減產30% 40%，甚至絕收(彭德良.蔬菜線蟲病害的發生和防治.中國蔬菜.1998，4:57-58)。當前， 根結線蟲的防治主要以化學藥品防治為主，但是，由于其對環境、人畜安全的危害，逐漸被立法部門取消。所以，安全有效、低毒的藥品及防治方法迫在眉睫。根結線蟲主要包括六個生育期，而在線蟲的二齡期，利用發達的受神經支配的頭感器，通過頭部的嗅覺神經元(AWA，AffC)來感知根系散發出的信號物質，向寄主植物進行趨向性遷移，侵染植物，從而完成其生命周期(Cortese M R. The expression of the homologue of the Caenorhabditis elegans lin-45 raf is regulated in the motile stages of the plant parasitic nematode Meloidogyne artiellia. Molecular and Biochemical Parasitology，2006，149 :38 47)。因此，在根結線蟲的二齡期，可以通過干擾根結線蟲的趨向性遷移，起到線蟲防治的目的。而且，我們前期工作發現，Ε-value ^ 1 時，秀麗線蟲與南方根結線蟲同源基因接近6000個，其中mpk-1基因是Ras途徑中的主要功能基因之一，與線蟲的趨向性遷移相關，并且mpk-1，在秀麗線蟲的南方根結線蟲中同源性較高(黃利，王宇，董林林，等.南方根結線蟲與秀麗線蟲同源基因的鑒定及其分析.中國農業大學學報，2010，15:45-50)，所以mpk-1基因的表達情況可以支持并反映南方根結線蟲的趨向性遷移。《植物保護》2011年第37卷第2期99-102頁公開了名為“有機酸類化合物對南方根結線蟲的生物活性”的文章。該文章中采用室內離體測定方法，測試了 15種有機酸對南方根結線蟲(Meloidogyne incognita) 2齡幼蟲致死率和卵孵化抑制率。結果表明，甲酸和丙酸對2齡幼蟲和卵的生物活性最高，明顯優于其他供試有機酸，但是活性低于對照藥劑阿維菌素。對生物活性結果及有機酸化學結構進行比對發現，小分子量化合物對南方根結線蟲具有較高生物活性。然而，小分子的化合物雖然對南方根結線蟲具有較高的生物活性，但是小分子的化合物及其不穩定，易揮發，對作物的生長造成極大的危害，而且加速土壤環境的酸化。而大分子的脂肪酸，例如，亞油酸相對穩定，存在多種植物體，而且對人畜、環境相對安全，在南方根結線蟲防治方面表現出更多的潛力。亞油酸是人體必需脂肪酸，花生油、核桃油含有大量的亞油酸，并且對高血壓、心絞痛、動脈粥樣硬化、老年性肥胖癥等的防治極為有利，因此，亞油酸作為防治線蟲的材料，對環境、人畜安全友好。

發明內容
為克服上述缺陷，本發明的目的在于提供一種亞油酸在防治南方根結線蟲方面的應用。所述應用為將亞油酸溶于甲醇中，亞油酸濃度范圍為0. 5mM至4. OOmM。所述亞油酸濃度在1. OOmM至4. OOmM時，作為驅避劑。亞油酸是人體必需脂肪酸，對高血壓、心絞痛、動脈粥樣硬化、老年性肥胖癥等的防治極為有利，因此，亞油酸作為防治線蟲的材料，對環境、人畜安全友好。除此之外，亞油酸資源豐富，廣泛分布在植物的油脂中，為哺乳動物所必需。而且亞油酸的合成方法方便， 簡單，材料豐富。亞油酸作為南方根結線蟲的驅避劑。本發明，在實驗室的條件下，驗證亞油酸通過調控南方根結線蟲的趨向性遷移來防治線蟲，并為南方根結線蟲防治效果提供強有力的數據支持和新材料。


圖1示出了亞油酸對南方根結線蟲趨向性的影響。 圖2示出了亞油酸對mpk-1基因的相對表達量的影響。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步詳細描述本發明。應理解，這些實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的范圍。實施例中使用的亞油酸(CAS =60-33-3)購買自sigma公司，采用的甲醇為色譜純甲醇。下列實施例采用不同濃度的亞油酸溶液處理南方根結線蟲的二齡幼蟲，利用趨向性指數，從生理數據來說明亞油酸作為南方根結線蟲驅避劑的效果。實施例1將色譜純甲醇配成濃度為4. OOmM的儲存液，并用色譜純甲醇稀釋為亞油酸濃度為0. 50mM的溶液，并保存于-20°C冰箱。實驗室的模擬試驗，按照Ward (Ward Samuel. Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans !identification of attractants and analysis of the response by use of mutants. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1973,70,817-821)禾口 Bargmann 等(Bargmann C. I. , Hartweig Ε. , Horvitz H. R. Odorant selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Cell，1993，74，515-527)所提供的方法，采用直徑為 6cm的培養皿，于對角線位置，分別在距離邊緣Icm標記直徑為Icm的圓。每個培養皿中加入IOml 0.8%的瓊脂。在標記雙圈的培養皿中，一側圈內加入IOml的色譜純甲醇，另一側加入IOml的配好的0. 5mM的亞油酸溶液。加入化合物后的培養皿，放入25°C培養箱中避光孵化池，在每個培養皿的中間部位，與兩側的圓等距的位置，加入50條剛孵化出的南方根結線蟲的二齡幼蟲，25°C培養箱避光孵化3h，按照Bargmann和Horvitz (Bargmann C. I.， Horvitz H. R. Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans. Neuron, 1991,7,729-742)的方法統計趨向性指數 (Chemotaxis Index)，其計算方法為添加亞油酸溶液圓中線蟲的數量與添加甲醇溶劑圓中線蟲數量的比值；趨向性指數> 0. 2時，為吸引；O彡趨向性指數< 0. 2時，為微弱吸引， 趨向性指數<-0. 02時，為排斥。并且，統計二齡幼蟲的死亡率，死亡率的計算方法為運動到添加不同濃度亞油酸溶液圓中線蟲死亡數與圓中線蟲總數的比值。實施例2除了配制的亞油酸溶液的濃度為ImM外，其余同實施例1。實施例3除了配制的亞油酸溶液的濃度為2mM外，其余同實施例1。實施例4除了使用的亞油酸溶液的濃度為4. OOmM外，其余同實施例1。實施例5同時按照Ward和Bargmarm等的方法，收集2. 000條不同處理的二齡幼蟲，用于 Mi-mpk-1基因表達的分析。基因信息及熒光定量PCR采用的引物，如表1所示。表1. Actin、mpk-1基因及引物信息
權利要求
1.亞油酸在防治南方根結線蟲方面的應用。
2.根據權利要求1所述的亞油酸在防治南方根結線蟲方面的應用，其特征在于，亞油酸溶于甲醇中，亞油酸濃度范圍為0. 5mM至4. OOmM。
3.根據權利要求1所述的亞油酸在防治南方根結線蟲方面的應用，其特征在于，亞油酸濃度在1. OOmM至4. OOmM時，作為趨避劑。
全文摘要
本發明提供一種亞油酸在防治南方根結線蟲方面的應用，其是將亞油酸溶于甲醇中，亞油酸濃度范圍為0.50mM至4.00mM，亞油酸濃度在1.00mM至4.00mM時對南方根結線蟲具有驅避效應。本發明中使用的亞油酸來源豐富，低毒，對人畜、環境安全，并且，防治效果顯著提高。
文檔編號A01P17/00GK102524255SQ201110444910
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月27日 優先權日2011年12月27日
發明者左元梅, 李曉林, 董林林, 陳清 申請人:中國農業大學