專利名稱：自然環(huán)境中培養(yǎng)蛹蟲草的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在自然環(huán)境中培養(yǎng)蛹蟲草的方法。
背景技術(shù)：
據(jù)《本草綱目拾遺》中記載，冬蟲夏草性甘、溫平，具有較強(qiáng)的滋補(bǔ)功能，在中醫(yī)藥中常作重要引劑，對肺腎兩虛、腰酸膝痛、陽萎貧血等有較好的療效。野生冬蟲夏草的滋補(bǔ)功能主要是其內(nèi)含有蟲草素和蟲草多糖，以及蟲草酸等活性成份，而人工培植的蛹蟲草中也含有蟲草素和蟲草多糖及蟲草酸等活性成份，但這些活性成份含量的高低主要取決于人工培植的蛹蟲草的方法，如果采用適宜的人工培植的蛹蟲草的方法，其內(nèi)所含活性成份的量要比野生冬蟲夏草高出許多倍。要想提高蛹蟲草中活性成份的含量，主要取決于菌種和子實(shí)體的培育方式，如果菌種變異或感染雜菌，即便能培植出的子實(shí)體，但子實(shí)體中的活性成份也不會(huì)有較高的含量；另外，在培植子實(shí)體的過程中，如果采用無菌接種，即便能夠生長出子實(shí)體，但蛹蟲草中活性成份的含量也不易達(dá)到非常理想的程度，且還容易產(chǎn)生菌種退化的現(xiàn)象。在現(xiàn)有技術(shù)中，培育蛹蟲草菌種還存在一些問題，如中國專利1309823C號授權(quán)公告的名稱為“提高蛹蟲草優(yōu)良菌種篩選效率和繁殖穩(wěn)定性的生產(chǎn)方法”給出一種培育北蟲草菌種的方式。該專利對子實(shí)體不先采用消毒，只是先選擇子實(shí)體上部體積較大的部位，然后切除該子實(shí)體上部的外層，再取子實(shí)體內(nèi)部組織放入培養(yǎng)基中，選擇菌株作為菌種。雖然該種方式可以培養(yǎng)出北蟲草菌種，但由于北蟲草子實(shí)體并不是怕感染細(xì)菌的物料，通常不將其放置在無菌的環(huán)境中，如果子實(shí)體表面有可感染菌種的細(xì)菌，在切除其外層時(shí)很容易使子實(shí)體的內(nèi)部組織受到細(xì)菌感染，不僅會(huì)大大降低生產(chǎn)菌種的效率，而且還會(huì)使培養(yǎng)出的菌種因受到細(xì)菌感染而退化；同時(shí)，從選擇子實(shí)體內(nèi)部組織的部位來看，經(jīng)實(shí)踐證明，子實(shí)體中白色的內(nèi)部組織能夠培養(yǎng)出更加優(yōu)良的菌種，如果采用子實(shí)體上部膨大部位，因膨大部位是子嚢果，用此部位培養(yǎng)菌種易變異。現(xiàn)有技術(shù)中也有對子實(shí)體先消毒，再取子實(shí)體內(nèi)部組織的技術(shù)，對子實(shí)體消毒主要采用汞進(jìn)行消毒，雖然采用汞可以殺菌，其殺菌效果也相對較好，但由于汞對人體有害， 同時(shí)對生態(tài)環(huán)境也會(huì)帶來多方面危害，所以，該種消毒方式不適合于被廣泛地應(yīng)。另外，人們普遍認(rèn)為只有在無菌的環(huán)境中接種，才能避免菌種營養(yǎng)生長和催蕾轉(zhuǎn)化及子實(shí)體培養(yǎng)過程中被雜菌污染，同時(shí)還認(rèn)為若在開放環(huán)境中進(jìn)行接種則會(huì)感染大量雜菌，導(dǎo)致產(chǎn)量下降，所以，現(xiàn)有技術(shù)中對蛹蟲草子實(shí)體的培養(yǎng)，通常選擇在無菌的接種箱內(nèi)或無菌環(huán)境中進(jìn)行接種和培植子實(shí)體，即便利用活體蠶蛹作為培養(yǎng)基，也采用該種方式進(jìn)行接種和培植。雖然該種方法可以培植出蛹蟲草，但由于制造無菌環(huán)境和無菌箱本身就具有很高的成本，故而會(huì)增加蛹蟲草培植成本，且操作過程也相對困難；另外，由于活體蠶蛹在無菌環(huán)境中感染蛹蟲草菌種也會(huì)短期生存，而在此非常好的環(huán)境下雖然能更好地生存， 但對蛹蟲草菌種而言，因其在好的環(huán)境下生存，自身不會(huì)產(chǎn)生抵抗細(xì)菌侵蝕的能力，從而可降低自身免疫力，而菌種免疫力降低會(huì)造成退化，所以，采用在無菌環(huán)境中培養(yǎng)出來的蛹蟲草很難達(dá)到理想的藥用價(jià)值與滋補(bǔ)功效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的任務(wù)是提供一種利用選擇優(yōu)良菌種和敞開式培植蛹蟲草的方式解決蛹蟲草質(zhì)量低和菌種易退化等問題的自然環(huán)境中培養(yǎng)蛹蟲草的方法。本發(fā)明所提出的自然環(huán)境中培養(yǎng)蛹蟲草的方法包括以下步驟培育菌種取鮮北蟲草子實(shí)體放入含量為72 - 78%的酒精中浸泡3 5分鐘進(jìn)行殺菌，然后用無菌水清洗干凈后切除子實(shí)體外層，再將去除外層的子實(shí)體中白色組織放入培養(yǎng)基中培養(yǎng)8 — 15天，子實(shí)體中長出絨毛狀菌絲作為菌種；敞開式培養(yǎng)子實(shí)體將活蛹體放自然環(huán)境中，然后將上述菌種加入到該活蛹體的表面，當(dāng)活蛹體表面的菌絲萌發(fā)并寄生于活蛹體內(nèi)后所生長出的子實(shí)體即為蛹蟲草。酒精含量如果小于72%，其殺菌效果不理想，酒精含量如果大于78% ；易使子實(shí)體的內(nèi)部組織受到損害；由于活體蛹如蠶蛹本身具有免疫力，可避免雜菌污染，當(dāng)蛹蟲草菌種接種到活體蛹上時(shí)，活體蛹能與蛹蟲草菌種相互作用，從而可使菌種復(fù)壯，即便在敞開式培植蛹蟲草時(shí)有細(xì)菌侵蝕，也不易使其受到感染。所述培養(yǎng)基是由以下質(zhì)量百分比的物料構(gòu)成馬鈴薯70 - 85%，葡萄糖5 — 12%， 磷酸二氫鉀1一洲，硫酸鎂0.5 — 1%，瓊脂5 — 12%，蛋白胨3 — 6%。由于培養(yǎng)基中的馬鈴薯和葡萄糖是為菌絲生長提供能量的物料，且主要是為其提供碳原，所以，馬鈴薯的含量不低于70%，葡萄糖不能低于5%，最佳選擇是馬鈴薯的質(zhì)量含量為78 - 79%,葡萄糖為8 一 9. 5% ； 磷酸二氫鉀是用于調(diào)節(jié)PH值的物料，可以將培養(yǎng)基往中性調(diào)整，最佳選擇是1. 1 - 2% ；硫酸鎂是一種無機(jī)鹽，可以平衡細(xì)胞膜內(nèi)外壓力，如果細(xì)胞外離子濃度大，細(xì)胞易失水導(dǎo)致細(xì)胞死亡，培養(yǎng)失敗，如果細(xì)胞外離子濃度小，細(xì)胞吸水膨脹，會(huì)導(dǎo)致因細(xì)胞膜破裂而死亡，所以，硫酸鎂最佳質(zhì)量含量不應(yīng)該超過1%，但也不應(yīng)小于0. 5%，最佳含量為0. 6 — 0. 8% ；瓊脂可以起到讓培養(yǎng)基定型的作用，其最佳質(zhì)量含量應(yīng)該在7 - 8% ；蛋白胨可為培養(yǎng)基提供氮原，為菌種提供生長所必須的成份，其最佳質(zhì)量含量應(yīng)該在4 一 5% ；由上述物料構(gòu)成的培養(yǎng)基，在培養(yǎng)菌種時(shí)，向構(gòu)成培養(yǎng)基物料中加入是質(zhì)量培養(yǎng)基5 - 7倍的水作為液體培養(yǎng)基。所述敞開式培養(yǎng)子實(shí)體步驟中，還包括對活蛹體表面滅菌的步驟。本發(fā)明所提出的自然環(huán)境培養(yǎng)蛹蟲草的方法中采用合適的酒精含量對子實(shí)體殺菌，選擇子實(shí)體中白色組織作為培養(yǎng)菌種基料(該白色組織是長在子實(shí)體的中部區(qū)域)，使菌種不易產(chǎn)生變異，且菌種成活率在97 - 98% ；同時(shí)在往活體蛹上接種菌種時(shí)，不采用在無菌環(huán)境中操作，只是在敞開式的自然環(huán)境中往活體蛹上接種，依靠活體蛹與蛹蟲草菌種之間的相互作用來避免雜菌污染，此法模擬蛹蟲草自然生長的方法可大規(guī)模生產(chǎn)蛹蟲草，且可使蛹蟲草的菌種和已經(jīng)退化菌種復(fù)壯，不僅對生態(tài)環(huán)境保護(hù)具有積極作用，還可節(jié)省能源和人力物力。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
培育蛹蟲草菌種取鮮北蟲草子實(shí)體放入酒精中浸泡5分鐘進(jìn)行殺菌，該酒精的含量為72%，將酒精浸泡后的子實(shí)體取出用無菌水清洗干凈后切除子實(shí)體外層，然后將外層內(nèi)的子實(shí)體中白色組織成塊取出，將每一塊白色組織放入培養(yǎng)基中培養(yǎng)11天，當(dāng)白色組織中長出白色絨毛狀菌絲作為菌種，白色組織長出白色絨毛狀菌絲見光后有淺黃色色素產(chǎn)生為最佳菌種；
敞開式培養(yǎng)子實(shí)體將活蛹體放自然環(huán)境中，然后將上述菌種加入到該活蛹體的表面， 當(dāng)活蛹體表面的菌絲萌發(fā)并寄生于活蛹體內(nèi)后所生長出的子實(shí)體即為蛹蟲草，再將菌種加入到該活蛹體的表面之間，可先對活蛹體表面滅菌。制取培育蛹蟲草菌種的培養(yǎng)基取馬鈴薯70Kg，葡萄糖UKg，磷酸二氫鉀^(g，硫酸鎂lKg，瓊脂Hg，蛋白胨Ig，將所有物料放入容器中后，再向容器內(nèi)加入500Kg水，將其攪拌均勻后即為北蟲草培養(yǎng)基。實(shí)施例2
按照實(shí)施例1的方法制作菌種和培養(yǎng)基，以及敞開式培養(yǎng)子實(shí)體，與實(shí)施例1所不同的是將子實(shí)體放入酒精中浸泡3分鐘，該酒精的含量為78%，白色組織放入培養(yǎng)基中培養(yǎng)15 天。培養(yǎng)基中馬鈴薯85Kg，葡萄糖^(g，磷酸二氫鉀lKg，硫酸鎂0. 5Kg,瓊脂^(g，蛋白胨 3. 5Kg,再向容器內(nèi)加入700Kg水。實(shí)施例3
按照實(shí)施例1的方法培養(yǎng)菌種和制作培養(yǎng)基，以及敞開式培養(yǎng)子實(shí)體，與實(shí)施例1所不同的是將子實(shí)體放入酒精中浸泡3. 5分鐘，該酒精的含量為75%，白色組織放入培養(yǎng)基中培養(yǎng)14天。培養(yǎng)基中馬鈴薯78. 3Kg,葡萄糖8Kg，磷酸二氫鉀1. IKg,硫酸鎂0. 6Kg，瓊脂8Kg， 蛋白胨4Kg，再向容器內(nèi)加入600Kg水。實(shí)施例4
按照實(shí)施例1的方法培養(yǎng)菌種和制作培養(yǎng)基，以及敞開式培養(yǎng)子實(shí)體，與實(shí)施例1所不同的是將子實(shí)體放入酒精中浸泡4分鐘，該酒精的含量為75%，白色組織放入培養(yǎng)基中培養(yǎng) 13天。培養(yǎng)基中馬鈴薯78Kg，葡萄糖8. ^(g，磷酸二氫鉀1.7秘，硫酸鎂0.8秘，瓊脂7秘，蛋白胨4Kg，再向容器內(nèi)加入650Kg水。
權(quán)利要求
1.自然環(huán)境中培養(yǎng)蛹蟲草的方法，其特征在于包括以下步驟培育菌種取鮮北蟲草子實(shí)體放入含量為72 - 78%的酒精中浸泡3 5分鐘進(jìn)行殺菌， 然后用無菌水清洗干凈后切除子實(shí)體外層，再將去除外層的子實(shí)體中白色組織放入培養(yǎng)基中培養(yǎng)8 — 15天，子實(shí)體中長出絨毛狀菌絲作為菌種；敞開式培養(yǎng)子實(shí)體將活蛹體放自然環(huán)境中，然后將上述菌種加入到該活蛹體的表面， 當(dāng)活蛹體表面的菌絲萌發(fā)并寄生于活蛹體內(nèi)后所生長出的子實(shí)體即為蛹蟲草。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于所述培養(yǎng)基是由以下質(zhì)量百分比的物料構(gòu)成馬鈴薯70 - 85%，葡萄糖5 - 12%，磷酸二氫鉀1 一 2%，硫酸鎂0. 5 一 1%，瓊脂 5 — 12%，蛋白胨 3 — 6%ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于所述敞開式培養(yǎng)子實(shí)體步驟中，還包括對活蛹體表面滅菌的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種自然環(huán)境中培養(yǎng)蛹蟲草的方法，包括培育菌種和敞開式培養(yǎng)子實(shí)體兩個(gè)步驟。該種培養(yǎng)蛹蟲草的方法中采用往活體蛹上接種菌種，且在敞開式的自然環(huán)境中往活體蛹上接種，依靠活體蛹與蛹蟲草菌種之間的相互作用來避免雜菌污染，此法模擬蛹蟲草自然生長的方法可大規(guī)模生產(chǎn)蛹蟲草，且可使蛹蟲草的菌種和已經(jīng)退化菌種復(fù)壯，不僅對生態(tài)環(huán)境保護(hù)具有積極作用，還可節(jié)省能源和人力物力。
文檔編號C05G3/00GK102523927SQ20121001364
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月17日
發(fā)明者劉明輝, 孫紅霞, 李洪波, 李福全 申請人:遼寧仙榆灣北冬蟲夏草(集團(tuán))有限公司