專利名稱：一種馬尾松抗逆保健菌根菌劑及其應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)馬尾松樹生根、生長(zhǎng)，改善水分、養(yǎng)分代謝，改良土壤和抗逆保健提高生產(chǎn)力的馬尾松抗逆保健菌根菌劑及其應(yīng)用方法，特別是對(duì)馬尾松病害如落葉病，根部病害如立枯病、猝倒病等具有較好的抑制作用。
背景技術(shù)：
馬尾松分布極廣，遍布于華中華南各地，是中國(guó)南部主要材用樹種，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高。目前，主要采用化學(xué)方法殺滅松樹病蟲害，這種方法會(huì)污染大氣、水環(huán)境，造成土壤板結(jié)，增強(qiáng)病菌、害蟲對(duì)農(nóng)藥的抗藥性，殺傷有益生物，同時(shí)對(duì)人體的健康產(chǎn)生危害。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人們認(rèn)識(shí)程度的提高，提出了生物保健劑的理論。它不僅對(duì)防治對(duì)象的選擇性強(qiáng)，可以專一性作用于靶標(biāo)有害生物，而且對(duì)人畜等生物比較安全，與環(huán)境的相容性好，對(duì)天敵比較安全，不易產(chǎn)生抗性。大部分馬尾松病害與寄主松樹的生長(zhǎng)勢(shì)、健康狀況有著非常密切的關(guān)系，寄主起著主導(dǎo)性作用。目前解決松樹生長(zhǎng)勢(shì)、健康狀況的技術(shù)已有很多，如施肥、灌溉、使用植物生長(zhǎng)劑等，但都是單一的措施而且不能長(zhǎng)期有效且持續(xù)性差。研究表明，外生菌根菌可與樹木根系形成菌根提高樹木抗性。外生菌根菌不僅能殺死病原菌的營(yíng)養(yǎng)體，而且能以病原菌為營(yíng)養(yǎng)，生長(zhǎng)十分茂盛，能抑制病原菌繁殖體及休眠體的形成；外生菌根菌能分泌非揮發(fā)性的殺菌活性物質(zhì)，使病原菌的細(xì)胞質(zhì)消解。外生菌根還可以幫助宿主適應(yīng)鹽堿環(huán)境，通過(guò)增加植株對(duì)磷等礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)元素的吸收，改善鹽脅迫引起的營(yíng)養(yǎng)虧缺；改變植物體內(nèi)離子平衡，降低其生理毒害；增加植株對(duì)水分的吸收和利用能力，緩解生理性干旱；還有些菌根真菌能寄生在致病菌上形成重寄生，將致病菌溶解或殺死。此外，外生菌根能改善樹木水分、養(yǎng)分代謝。菌根有密集的菌絲網(wǎng)，增強(qiáng)吸收各種礦物營(yíng)養(yǎng)的能力，特別是對(duì)磷的吸收更為顯著。有許多菌根類型，尤其是擔(dān)子菌的菌絲在土壤中能延伸很長(zhǎng)。大量菌根和菌絲使更多的營(yíng)養(yǎng)元素吸收到菌根中，供給寄主樹木。土壤中，幾乎有95% 99%的磷是以不可給態(tài)存在，菌根菌產(chǎn)生磷酸酶，使不可給態(tài)磷轉(zhuǎn)化為可給態(tài)磷。菌根菌還能增加對(duì)銅、鋅等微量元素的吸收。有些樹種如松樹和橡樹，種植在缺少外生菌根的土壤上就不能成活或生長(zhǎng)不良，必須接種菌根真菌后才能成活和正常生長(zhǎng)。菌根真菌能分解土壤中的有機(jī)質(zhì)，加速土壤養(yǎng)分循環(huán)，改善土壤結(jié)構(gòu)，提高土壤中養(yǎng)分的有效性。有的菌根菌能直接固定空氣中的游離氯素，促進(jìn)植物對(duì)碳水化合物的合成，對(duì)防止地力衰退、促進(jìn)林木生長(zhǎng)起到重要作用。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決松樹病害化學(xué)防治存在的缺點(diǎn)和不足，結(jié)合松樹病害防治措施和長(zhǎng)效提高林木生產(chǎn)力措施，提出了強(qiáng)化松樹生根、生長(zhǎng)，增強(qiáng)樹勢(shì)來(lái)預(yù)防松樹病害的解決方案，即一種馬尾松樹的抗逆保健菌根菌劑及其應(yīng)用方法。該發(fā)明不僅能促進(jìn)松樹的生根、生長(zhǎng)，而且能夠改善水分、養(yǎng)分代謝，改良土壤，提高生產(chǎn)力，增強(qiáng)馬尾松的抗病能力。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是
一種馬尾松樹的抗逆保健菌根菌劑，由菌根菌劑和萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液按照重量比=800-1000 : I配制而成；所述的菌根菌劑為橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)和紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)分別采用固體發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵而成的培養(yǎng)物中的一種或兩種；所述的萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液濃度為IOOOppm ；在固體發(fā)酵培養(yǎng)之前先將橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)或紅汁乳恭(Lactarius hatsudake)經(jīng)過(guò)斜面固體培養(yǎng)基和液體搖床培養(yǎng)基培養(yǎng)得到菌液,然后接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)；所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為草炭米糠豆餅粉蔗糖按質(zhì)量比= 80-100 50-80 10-20 I ;菌液接種量為固體發(fā)酵培養(yǎng)基體積的4_6%，發(fā)酵溫度為25°C _28°C，發(fā)酵時(shí)間8-12天；所述的液體搖床培養(yǎng)條件液體培養(yǎng)基采用不加瓊脂的H)培養(yǎng)基；用直徑6mm的無(wú)菌打孔器，切取斜面固體平板上培養(yǎng)的橙黃乳菇(Lactarius akahatsu)或紅汁乳菇(Lactarius hatsudake)菌片,接種于盛有250ml液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，每瓶接種3-5片；置25°C -28°C、轉(zhuǎn)速200_220r · mirT1搖床上恒溫水浴培養(yǎng)7_10d，得到菌液；所述的澄黃乳燕(Lactariusakahatsu)和紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)均 采自馬尾松樹林。所述抗逆保健菌根菌劑在配制時(shí)，需將菌根菌劑粉碎至2-3_大小后再與萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液混合均勻。所述的斜面固體培養(yǎng)條件采用PDA培養(yǎng)基20被％馬鈴薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氫鉀3. 08、硫酸鎂1.28、瓊脂2(^、維生素810.018 ;培養(yǎng)溫度范圍是25°C _28°C;pH范圍是5-6 ;制成培養(yǎng)基用于一級(jí)斜面培養(yǎng)7-10天。上述的抗逆保健菌根菌劑的應(yīng)用方法，其特征在于，施用于馬尾松樹樹根或者種植馬尾松樹的土壤中，促進(jìn)馬尾松樹的生長(zhǎng)，提高馬尾松樹抗逆性，從而增強(qiáng)松樹抗馬尾松落葉病、立枯病和猝倒病的能力；提高馬尾松樹的成活率和生長(zhǎng)速度。具體是在馬尾松造林時(shí)，將所述的抗逆保健菌根菌劑與林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，再按照I千克抗逆保健菌根菌劑40千克水的比例加入水制成泥漿，將馬尾松樹幼苗根系蘸漿，然后種植；或者是在馬尾松人工成林時(shí)，每225g所述的抗逆保健菌根菌劑中加入25g的聚丙烯酰胺型保水劑，充分混合后，在距離樹體I米的土壤中挖坑埋入即可。優(yōu)選在距離樹體I米的土壤中四個(gè)不同的方向挖坑，坑的深度為25cm，每個(gè)坑放入的量為250克。本發(fā)明的有益效果是，既促進(jìn)馬尾松樹的生根、生長(zhǎng)，改善水分、養(yǎng)分代謝，改良土壤，提高生產(chǎn)力又增加松樹抗御馬尾松落葉病、立枯病、猝倒病的能力，具有持續(xù)控制松樹病害的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例旨在進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。實(shí)施例I :采用接菌試驗(yàn)，測(cè)試篩選馬尾松林采摘的橙黃乳燕Lactarius akahatsu、紅汁乳恭 Lactarius hatsudake、香乳 Lactarius camphorates、舌甘口未乳恭 Lactariusglyciosmus、香亞環(huán)乳 Lactarius subzonarius、尖頂乳 Lactarius subdulcis、波寧乳 Lactarius porninsis、稀裙鸞乳 Lactarius gerardii、粗質(zhì)乳 Lactariusdeterrimus、絨毛乳 Lactarius echinatus、稀裙乳 Lactarius hygrophoroides、絨白乳燕Lactarius vellereus、多汁乳燕Lactarius volemus等13種乳燕菌劑接種對(duì)2年生馬尾松苗木成活率的影響。接種3個(gè)月后,發(fā)現(xiàn)接橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)、紅汁乳菇(Lactarius hatsudake)的馬尾松苗木的成活率最高，苗木的成活率分別為81. 57%和77. 82%，比對(duì)照提高28. 15%和26. 26%，接種其它菌種的苗木的成活率較低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，接種橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)、紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)分別對(duì)馬尾松苗木的成活率都具有促進(jìn)作用，有利于提高馬尾松人工造林的有效性。
將篩選出來(lái)的橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)或紅汁乳恭(Lactariushatsudake)經(jīng)過(guò)斜面固體培養(yǎng)基和液體搖床培養(yǎng)基培養(yǎng)得到菌液。固體培養(yǎng)條件培養(yǎng)基為PDA (20 %馬鈴薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氫鉀3. 0g、硫酸鎂I. 2g、瓊脂20g、維生素BIO. Olg);培養(yǎng)溫度范圍是28°C ；pH范圍是5. 6 ;制成培養(yǎng)基用于一級(jí)斜面培養(yǎng)7天。液體培養(yǎng)條件液體培養(yǎng)基用F1D培養(yǎng)基；用直徑6_的無(wú)菌打孔器，切取固體平板上培養(yǎng)的橙黃乳菇或紅汁乳菇菌片，接種于盛有250ml液體培養(yǎng)基的三角瓶(500ml)中，每瓶接種3片。置28°C、轉(zhuǎn)速ΖΟΟι^π ιΓ1搖床上恒溫水浴培養(yǎng)7d，得到培養(yǎng)菌液。得到菌液后進(jìn)行菌根菌劑生產(chǎn)。菌根菌劑生產(chǎn)所用菌種為橙黃乳菇或紅汁乳菇液體菌種。菌劑固體發(fā)酵培養(yǎng)基為，草炭米糠豆餅粉蔗糖=80 : 50 : 10 : I，接種上述菌液，接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%，基質(zhì)的濕度以手抓捏感濕潤(rùn)而無(wú)積水流下為合適，生產(chǎn)所用溫度為28°C，8天為一個(gè)生產(chǎn)周期。將生產(chǎn)好的菌根菌劑粉碎，將萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶解為IOOOppm的液體，然后按菌根菌劑萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液= 900 I的比例充分混合均勻，即得到馬尾松抗逆保健菌根菌劑。產(chǎn)品在常溫下密封保存，保質(zhì)期一年以上。實(shí)施例2產(chǎn)品的使用方法(I)利用馬尾松造林時(shí)，將制備好的本發(fā)明抗逆保健菌根菌劑(橙黃乳菇固體發(fā)酵制備的保健菌根菌劑)與造林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，并加入適量水(I千克抗體保健菌根菌劑40千克水)，充分?jǐn)嚢柚瞥赡酀{，以泥漿能粘在根系上即可。(2)用于馬尾松人工成林時(shí)，每225g本發(fā)明抗逆保健菌根菌劑(紅汁乳菇固體發(fā)酵制備的保健菌根菌劑)中加入25g的聚丙烯酰胺型保水劑，充分混合后，在距離樹體I米左右的土壤中挖坑埋入即可。采用方式(I)的使用方法，將I年生馬尾松幼苗根系蘸漿后栽培，對(duì)照(CK)為不使用抗逆保健菌根菌劑處理的馬尾松幼苗。結(jié)果見表1，100天后，對(duì)馬尾松苗生長(zhǎng)指標(biāo)及其抗病性進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)蘸根，使育苗根系首先在植物激素的作用下快速生根，提高了根莖t匕，擴(kuò)大苗木對(duì)水分的吸收面積，促進(jìn)了整株的快速發(fā)育，然后在根際土中的菌根菌與根系形成菌根，進(jìn)一步擴(kuò)大根系的吸收面積，加速地上部分的生長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)既促進(jìn)了苗木的生長(zhǎng)、增強(qiáng)樹勢(shì)，又提高了其抗病性的作用。表I抗逆保健菌根菌劑對(duì)馬尾松苗生長(zhǎng)及抗病性的影響"μ苗高胸徑病害發(fā)生情況蹄‘·
況_
平均增長(zhǎng)平均增長(zhǎng)猝倒病立枯病衣任東
發(fā)生率發(fā)生率 0(cm) (cm) (cm) (cm) (%) (%) (/o)
接種20.15 3.42 0.38 0.12 5.61 6.83 90.46CK16.73 / 0.26 /23.16 30.24 74.92試驗(yàn)結(jié)果表明，接種抗逆保健菌根菌劑使苗高提高了 20.44%，胸徑提高了46. 15% ;猝倒病發(fā)生率減少了 17.55%，立枯病發(fā)生率減少了 23. 94%，存活率提高了15. 54%。說(shuō)明本抗逆保健菌根菌劑及其應(yīng)用方法可促進(jìn)馬尾松苗的生長(zhǎng)，減少苗木猝倒病和立枯病的發(fā)生率，提高存活率。采用方式(2)的使用方法，將抗逆保健菌根菌劑施用于15年生馬尾松人工林時(shí)，在距離樹體I米左右的土壤中四個(gè)不同的方向挖坑，坑的深度為25cm，每個(gè)坑放入的量為250克，然后覆土、澆水；對(duì)照(CK)為不施用抗逆保健菌根菌劑的15年生馬尾松人工林。12個(gè)月后，對(duì)馬尾松生長(zhǎng)指標(biāo)和抗病性進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。表2抗逆保健菌根菌劑對(duì)15年生馬尾松生長(zhǎng)及抗病性的影響
"μ 樹高增量胸徑增量 15胃n _____情況
平均(cm) 提高(cm) 平均(cm) 提高(cm)病f______生率(％)
接種66.1215.841.080.2910.17
CK50.28/0.79/42.39試驗(yàn)結(jié)果表明，接種抗逆保健菌根菌劑使15年生馬尾松樹高增量提高了31. 50%，胸徑增量提高了 36. 71 %;落葉病發(fā)生率減少了 32. 22%。說(shuō)明本抗逆保健菌根菌劑及其應(yīng)用方法可促進(jìn)馬尾松生長(zhǎng)，減少落葉病的發(fā)生。采用橙黃乳菇和紅汁乳菇兩種菌固體發(fā)酵的混合物制備的抗逆保健菌根菌劑及其應(yīng)用方法也能達(dá)到上述類似的優(yōu)異效果。
權(quán)利要求
1.一種馬尾松樹的抗逆保健菌根菌劑，其特征在于，由菌根菌劑和萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液按照重量比= 800-1000 I配制而成；所述的菌根菌劑為橙黃乳菇(Lactarius akahatsu)和紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)分別米用固體發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵而成的培養(yǎng)物中的一種或兩種；所述的萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液濃度為IOOOppm ； 在固體發(fā)酵培養(yǎng)之前先將橙黃乳燕(Lactarius akahatsu)或紅汁乳燕(Lactariushatsudake)經(jīng)過(guò)斜面固體培養(yǎng)基和液體搖床培養(yǎng)基培養(yǎng)得到菌液，然后接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)；所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為草炭米糠豆餅粉蔗糖按質(zhì)量比=80-100 50-80 10-20 I ;菌液接種量為固體發(fā)酵培養(yǎng)基體積的4_6%，發(fā)酵溫度為250C _28°C，發(fā)酵時(shí)間8-12天; 所述的液體搖床培養(yǎng)條件液體培養(yǎng)基采用不加瓊脂的H)培養(yǎng)基；用直徑6mm的 無(wú)菌打孔器，切取斜面固體平板上培養(yǎng)的橙黃乳菇(Lactarius akahatsu)或紅汁乳菇(Lactarius hatsudake)菌片,接種于盛有250ml液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，每瓶接種3-5片；置25°C -28°C、轉(zhuǎn)速200_220r · mirT1搖床上恒溫水浴培養(yǎng)7_10d，得到菌液； 所述的澄黃乳燕(Lactarius akahatsu)和紅汁乳燕(Lactarius hatsudake)均米自馬尾松樹林。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗逆保健菌根菌劑，其特征在于，將菌根菌劑粉碎至2-3mm大小后再與萘乙酸或吲哚-3-乙酸溶液混合均勻，即得到抗逆保健菌根菌劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗逆保健菌根菌劑，其特征在于，所述的斜面固體培養(yǎng)條件采用PDA培養(yǎng)基20被％馬鈴薯汁lOOOmL、葡萄糖18g、磷酸二氫鉀3. 0g、硫酸鎂I. 2g、瓊脂20g、維生素BI O. Olg ;培養(yǎng)溫度范圍是25°C _28°C ;pH范圍是5_6 ;制成培養(yǎng)基用于一級(jí)斜面培養(yǎng)7-10天。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的抗逆保健菌根菌劑的應(yīng)用方法，其特征在于，施用于馬尾松樹樹根或者種植馬尾松樹的土壤中，促進(jìn)馬尾松樹的生長(zhǎng)，提高馬尾松樹抗逆性，從而增強(qiáng)松樹抗馬尾松落葉病、立枯病和猝倒病的能力；提高馬尾松樹的成活率和生長(zhǎng)速度。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用方法，其特征在于，具體是在馬尾松造林時(shí)，將所述的抗逆保健菌根菌劑與林地土壤按重量比I : I. 5的比例充分混合，再按照I千克抗逆保健菌根菌劑40千克水的比例加入水制成泥漿，將馬尾松樹幼苗根系蘸漿，然后種植。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用方法，其特征在于，具體是在馬尾松人工成林時(shí)，每225g所述的抗逆保健菌根菌劑中加入25g的聚丙烯酰胺型保水劑，充分混合后，在距離樹體I米的土壤中挖坑埋入即可。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用方法，其特征在于，在距離樹體I米的土壤中四個(gè)不同的方向挖坑，坑的深度為25cm，每個(gè)坑放入的量為250克。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種針對(duì)馬尾松(Pinus massoniana)的抗逆保健菌根菌劑及其應(yīng)用方法，由菌根菌劑和植物激素萘乙酸或吲哚-3-乙酸復(fù)合而成；所述的菌根菌劑為橙黃乳菇(Lactarius akahatsu)或紅汁乳菇(Lactarius hatsudake)采用固體發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵而成。通過(guò)造林時(shí)對(duì)苗木根系進(jìn)行蘸漿處理或埋于馬尾松林土壤中，不僅能促進(jìn)馬尾松的生根、生長(zhǎng)，還能增強(qiáng)樹勢(shì)，提高抗逆性，預(yù)防馬尾松落葉病以及松苗立枯病和猝倒病的發(fā)生。
文檔編號(hào)A01G1/00GK102630709SQ201210087510
公開日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月29日
發(fā)明者劉劍, 劉君昂, 吳瑤, 周國(guó)英, 李河, 李琳, 譚益民 申請(qǐng)人:中南林業(yè)科技大學(xué)