專利名稱：一種山胡椒的組織培養方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養技術領域，涉及一種山胡椒的組織培養和快速繁苗方法。通過這種方法，可以進行優良種苗規模生產。
背景技術：
山胡椒(Lindera glauca)屬于樟科植物,落葉灌木或小喬木,又名 畢澄爺、野胡椒、山雞椒、山香椒、木姜子等。主要分布于山東、安徽、浙江、江西、福建、臺灣、河南、湖南、廣東、廣西、四川、云南等地。山胡椒不但可用作園林點綴樹種，配植于草坪、花壇和假山隙縫，而且山胡椒果實芳香，果及葉可提取芳香油，用作食品及化妝品香精，其種子含脂肪油，可制肥皂及機械潤滑油。更重要的是山胡椒的根、枝、葉、果實可供藥用，有祛風濕、消腫、解毒、止痛的功效，是我國衛生部公布的藥食兼用植物材料。近幾年研究又發現，山胡椒果實揮發油中還含有大量的具有多種生物活性的單萜和倍半萜類芳香油，例如羅勒烯、a-及3菔烯、樟烯、壬醛、癸醛和檸檬醛等。這些揮發油對常見的多種革蘭氏陽性細菌、陰性細菌、新型隱球菌和白色念珠真菌均有抑菌作用。新的研究還發現山胡椒具有防癌、抗腫瘤等功效。因此，山胡椒除了作為新型的香料、食品保健品和食品保鮮劑以外，還被開發為新型的抑菌抗癌藥物，受到越來越廣泛的關注。目前山胡椒的繁殖主要采用常規的種子繁殖和分株繁殖，繁殖時間長，繁殖系數低，無法滿足日益高漲的生產和市場需求，許多山胡椒的優良品種資源得不到利用。生物技術的快速發展，特別是植物組織和細胞培養技術，為山胡椒的快速繁殖育種研究提供了重要基礎。因此，發明一種快速高效的山胡椒繁殖方法是必然的需要。

發明內容
本發明目的是提供一種山胡椒的組織培養和離體快速繁殖的方法，使得在短期內可以獲得大量的優質山胡椒種苗，滿足市場的需要。本發明采用的技術方案是—種山胡椒組織培養方法，所述方法按如下步驟進行(I)無菌材料的獲得及誘導培養切取長勢良好、無病蟲害的山胡椒幼嫩的腋芽，用自來水沖洗0. 5 2h,然后在體積濃度為1%洗潔精的水溶液中振搖2 5mins,用無菌水沖凈；在超凈工作臺上用體積濃度70 75%乙醇水溶液浸泡30 60s,然后用混合消毒液浸泡20 30mins，再用無菌水沖洗3 5遍；將腋芽分切成0. 5 2cm的節段，然后將節段接種到裝叢生芽誘導培養基的培養瓶中，蓋上瓶蓋并用封口膜封住瓶口，置于培養箱中，在24 26°C，光照1500 25001x條件下培養15 25天；所述混合消毒液為體積比I :200的吐溫20和84消毒液的混合液；所述叢生芽誘導培養基為添加6-BA I. 0 4. Omg/L和NAA 0. I 0. 5mg/L的MS基本培養基；(2)芽的分化和增殖觀察步驟(I)所述24 26°C，光照1500 25001x條件下培養15 25天后的節段，切口部位開始膨大，出現綠色突起，20 40天后出現不定芽，再培養10 20天，當不定芽長到2 4cm時，將不定芽切下轉接到芽增殖培養基中，在24 26°C，光照1500 25001x條件下進行增殖培養，獲得叢生苗；所述芽增殖培養基為添加6-BA0. 5 2. Omg/L、NAA 0. 05 0. 2mg/L和谷氨酰胺80 120mg/L的MS基本培養基；(3)壯苗培養將步驟(2)獲得的叢生苗切割成單個，并轉接到壯苗培養基中，在24 26°C，光照1500 25001x條件下培養15 25天，發育成3 5cm的分化苗；所述壯苗培養基為添加6-BA 0. 5 2mg/L和NAA0. I 0. 3mg/L的MS基本培養基；(4)分化苗的生根將經壯苗培養的分化苗從基部切下，將芽苗基部切口在30 50mg/L的NAA水溶液中浸泡20 40mins，然后直接扦插入已消毒的移栽基質中，再在移栽基質中施以1/4MS無機鹽含量的培養基作為養分，扦插苗蓋上薄膜，保持濕度90%以上，置通風陰涼處，在24 26°C、光照1500 25001x條件下培養10 20天后長出3 6條細根，形成完整植株，最終的生根率為90 95% ;所述移栽基質為細沙、腐殖土與谷糠灰按照 質量比5 :2 :2的比例配置而成，所述移栽基質的消毒方法為采用體積濃度0. 5%福爾馬林水溶液均勻噴灑基質，塑料薄膜覆蓋3 5天后揭開薄膜再曝曬基質I 3天，完成對移栽基質的消毒，或者采用體積濃度0. 5%福爾馬林水溶液均勻噴灑基質，塑料薄膜覆蓋3 5天后揭開薄膜再在烘箱中60°C下烘2天，完成對移栽基質的消毒。進一步，步驟(I)所述叢生芽誘導培養基優選為添加6-BA 2. Omg/L和NAA 0. 3mg/L的MS基本培養基。進一步，步驟(2)所述的芽增殖培養基優選為添加6-BA1. 5mg/L、NAA 0. lmg/L和谷氨酰胺100mg/L的MS基本培養基。進一步，步驟(3)所述壯苗培養基優選為添加6-BA I. Omg/L和NAA0. 2mg/L的MS
培養基。進一步，所述的MS基本培養基終濃度組成為=NH4NO3L 65克/升、KNO3L 9克/升、CaCl2 *2H20 0. 44 克 / 升、MgSO4 *7H20 0. 37 克 / 升、KH2PO4O. 17 克 / 升、KI 0. 83 毫克 / 升、H3B035. 2 毫克 / 升、MgSO4 7H20 22. 3 毫克 / 升、ZnSO4 7H20 3. 6 毫克 / 升、Na2MoO4 2H200. 25 毫克 / 升、CuSO4 5H200. 025 毫克 / 升、CoCl2 6H20 0. 025 毫克 / 升、Na2EDTA 37. 3暈克/升、FeSO4 *7H20 27. 8暈克/升、肌醇100暈克/升、甘氨酸2暈克/升、鹽酸硫胺素0. I毫克/升、鹽酸吡哆醇0. 5毫克/升、煙酸0. 5毫克/升、蔗糖20 40克/升、瓊脂粉3 12克/升，溶劑為水，pH為5. 6^6. O。更進一步，本發明所述一種山胡椒組織培養方法推薦按照以下步驟進行(I)野外選種，選擇浙江臨安山胡椒基地中長勢良好、無病蟲害的山胡椒。(2)無菌材料的獲得切取上述山胡椒幼嫩的腋芽，用自來水沖洗lh，在體積濃度1%洗潔精的水溶液中振搖3mins，無菌水沖凈。在超凈工作臺上用體積濃度75%乙醇水溶液浸泡40s進行表面滅菌，然后用IOOml的混合消毒液消毒25mins，所述混合消毒液為99. 5ml的84消毒液與0. 5ml的吐溫20的混合液，無菌水沖洗4遍后，將嫩芽分切成Icm的節段，然后將節段接種到裝有叢生芽誘導培養基的培養瓶中，封口膜封住瓶口后，置于培養箱中，在25°C，光照20001x條件下培養20天；所述叢生芽誘導培養基為MS基本培養基添加6-BA 2. 0mg/L和NAA0. 3mg/L，MS基本培養基中蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L、溶劑為水，pH5. 8。(3)芽的分化和增殖觀察步驟(2)所述25°C，光照20001X條件下培養20天后的節段，切口部位開始膨大，出現綠色突起，30天后出現芽分生組織(即不定芽)，再培養15天，當不定芽長到3cm時，將不定芽切下轉接到芽增殖培養基中在25°C，光照20001x條件下進行增殖培養，建立叢芽增殖體系，獲得叢生苗；所述的芽增殖培養基為添加6-BA1. 5mg/L、NAAO. lmg/L、谷氨酰胺100mg/L的MS基本培養基，MS基本培養基中蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L、溶劑為水，pH5.8。(4)壯苗培養將叢生苗切割成單個，轉入壯苗培養基中，分化苗基本不發生分化，而以較快速度加粗伸長生長，在25°C，光照20001x條件下培養20天，發育成4cm的健壯無根苗，獲得分化芽；所述壯苗培養基為添加6-BA1. Omg/L,NAAO. 2mg/L的MS基本培養基，MS基本培養基中蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L、溶劑為水，pH5. 8。(5)分化苗的生根將經壯苗培養的分化苗從基部切下，將芽苗基部切口在40mg/L的NAA水溶液中浸泡30mins，然后直接扦插入已消毒的移栽基質中，再在移栽基質中施以1/4MS無機鹽(包含MS大量元素、微量元素和鐵鹽)的培養基作為養分，扦插苗蓋上薄膜，保持濕度90%以上，置通風陰涼處，在25°C、光照20001x條件下培養15天后長出5條細根，形成完整植株，最終的生根率為92%。所述移栽基質為細沙、腐殖土與谷糠灰按照質量比5 :2 2的比例配置而成，所述移栽基質的消毒方法為采用體積濃度0. 5%福爾馬林水溶液均勻噴灑基質，塑料薄膜覆蓋4天后揭開薄膜再曝曬基質2天，完成對移栽基質的消毒。本發明所述MS基本培養基包含大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物、蔗糖和瓊脂粉。所述大量元素組成是在配置I升(1000毫升)培養基時，加硝酸銨(NH4NO3) I. 65克、硝酸鉀(KNO3) I. 9 克、氯化鈣(CaCl2 2H20) 0. 44 克、硫酸鎂(MgSO4 7H20) 0. 37 克、磷酸二氫鉀(KH2PO4)O. 17克。所述微量元素組成是在配置I升(1000毫升)培養基時，加碘化鉀(KI >0. 83毫克、硼酸(H3B03)5. 2毫克、硫酸鎂(MgSO4 *7H20)22. 3毫克、硫酸鋅(ZnSO4 *7H20)3. 6毫克、鑰酸鈉(Na2MoO4 2H20) 0. 25 毫克、硫酸銅(CuSO4 5H20) 0. 025 毫克、氯化鈷(CoCl2 6H20)
0.025毫克。所述鐵鹽元素組成是在配置I升(1000毫升)培養基時，加乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA) 37. 3毫克，硫酸亞鐵(FeSO4 7H20) 27. 8毫克。所述有機物組成是在配置I升(1000毫升)培養基時，加肌醇100毫克、甘氨酸2毫克、鹽酸硫胺素(VB1)O. I毫克，鹽酸吡哆醇(VB6) 0. 5毫克，煙酸(VB5) 0. 5毫克。蔗糖濃度是20 40克/升，瓊脂粉濃度是3 12克/升。本發明所述山胡椒幼嫩腋芽選自浙江臨安山胡椒基地中長勢良好、無病蟲害的山胡椒。本發明所述1/4MS無機鹽含量的培養基是指將MS基本培養基中大量元素、微量元素和鐵鹽的含量降低為1/4的含量，有機物、蔗糖和瓊脂粉均不添加，即終濃度組成為NH4NO3O. 4125 克 / 升、KNO3O. 475 克 / 升、CaCl2 2H20 0. 11 克 / 升、MgSO4 7H20 0. 0924 克/ 升、KH2PO4O. 0425 克 / 升、KI 0. 2075 毫克 / 升、H3BO3L 3 毫克 / 升、MgSO4 7H20 5. 575 毫克 / 升、ZnSO4 7H20 0. 9 毫克 / 升、Na2MoO4 2H20 0. 0625 毫克 / 升、CuSO4 5H20 0. 00625毫克 / 升、CoCl2 6H20 0. 00625 毫克 / 升、Na2EDTA9. 325 毫克 / 升、FeSO4 7H20 6. 95 毫克/升，溶劑為水，PH為5. 6 6. O。本發明所述洗潔精是市售的各種洗潔精，作為清洗劑使用時通常以體積比I :100添加水。與現有技術相比，本發明的有益效果主要體現在(I)以嫩芽為外植體，應用組織培養的方法進行快速繁殖，克服了山胡椒常規育種周期長、繁殖系數低等缺點；該方法還具有生產出的種苗病毒少，遺傳性穩定等特點；(2)改進外植體消毒方法用毒性小并且易降解的84消毒液代替傳統的不可降解的氯化汞消毒劑，氯化汞屬于重金屬有相當大的腐蝕性，并含有劇毒；長期接觸更可能引起皮膚過敏或腎病綜合癥，進入環境對人類食物鏈也有相當大的破壞性，采用84消毒液對生態環境更安全環保；( 3 )對培養基進行了改良，添加了谷胺酰胺植物營養調節劑，大大提高了山胡椒芽分化和增殖率；(4)改進了組培程序，省略誘導生根的環節，具體做法是把高度達4 5厘米的健壯的芽苗從基部切下，將芽苗基部切口在30 50mg/L的NAA溶液中浸泡后，直接扦插入已消毒的細沙中，并施以1/4MS無機鹽含量的培養基作養分；所述改進可以減少綜合生產成本，并提高了其性狀的穩定性，可實現育苗的工廠化大批量生產，可有效解決山胡椒的優質種苗的供應問題。


圖I山胡椒不定芽在未添加谷氨酰胺的芽增殖培養基(MS+6-BA I. 5mg/L+NAAO. lmg/L)上生長(20天)情況；圖2山胡椒不定芽在添加谷氨酰胺(100mg/L)的芽增殖培養基(MS+6-BA1. 5mg/L+NAAO. lmg/L)上生長(20天)情況；圖3山胡椒不定芽在液體芽增殖培養基(瓊脂Og/L)上生長情況；圖4山胡椒不定芽在半固體芽增殖培養基(瓊脂6g/L)上生長情況；圖5山胡椒不定芽在固體芽增殖培養基(瓊脂12g/L)上生長情況。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述，但本發明的保護范圍并不僅限于此本發明所述MS基本培養基包含大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物、蔗糖和瓊脂粉所述大量元素組成是在配置I升(1000毫升)培養基時，加硝酸銨(NH4NO3) I. 65克、硝酸鉀(KNO3) I. 9 克、氯化鈣(CaCl2 2H20) 0. 44 克、硫酸鎂(MgSO4 7H20) 0. 37 克、磷酸二氫鉀(KH2PO4)O. 17克；所述微量元素組成是在配置I升(1000毫升)培養基時，加碘化鉀(KI)
0.83 毫克、硼酸(H3BO3) 5. 2 毫克、硫酸鎂(MgSO4 7H20) 22. 3 毫克、硫酸鋅(ZnSO4 7H20)3. 6毫克、鑰酸鈉(Na2MoO4 2H20) 0. 25毫克、硫酸銅(CuSO4 5H20) 0. 025毫克、氯化鈷(CoCl2 6H20) 0. 025毫克；所述鐵鹽元素組成是在配置I升(1000毫升)培養基時，加乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA) 37. 3毫克，硫酸亞鐵(FeSO4 7H20) 27. 8毫克；所述有機物組成是在配置I升(1000毫升)培養基時，加肌醇100毫克、甘氨酸2毫克、鹽酸硫胺素(VB1)O. I毫克，鹽酸吡哆醇(VB6)O. 5毫克，煙酸(VB5)O. 5毫克；蔗糖濃度是20 40克/升，瓊脂粉濃度是3 12g/L，溶劑為水，pH為5. 6^6. O。所述1/4MS無機鹽含量的培養基終濃度組成為=NH4NO3O. 4125克/升、KNO3O. 475克 / 升、CaCl2 2H20 0. 11 克 / 升、MgSO4 7H20 0. 0924 克 / 升、KH2PO4O. 0425 克 / 升、KI
0.2075 毫克 / 升、H3BO3L 3 毫克 / 升、MgSO4 7H20 5. 575 毫克 / 升、ZnSO 4 7H20 0. 9 毫克/ 升、Na2MoO4 2H200. 0625 毫克 / 升、CuSO4 5H20 0. 00625 毫克 / 升、CoCl2 6H20 0. 00625毫克/升、Na2EDTA 9. 325毫克/升、FeSO4.7H20 6. 95毫克/升，溶劑為水，pH為5. 6 6. O。實施例I(I)野外選種選擇浙江臨安山胡椒基地中長勢良好、無病蟲害的山胡椒。( 2)無菌材料的獲得切取上述山胡椒幼嫩的腋芽，用自來水沖洗0. 5h，在體積濃度為1%洗潔精(傳化洗潔精)(體積比W/W)的水溶液中振搖2mins，無菌水沖凈。在超凈工作臺上用體積濃度70%乙醇水溶液浸泡30s進行表面滅菌,然后用混合消毒液IOOml消毒20mins (所述混合消毒液是99. 5ml的84消毒液與0. 5ml的吐溫20的混合液)，無菌水沖洗3遍后，將嫩芽分切成0. 5cm的節段，然后將節段接種到裝有叢生芽誘導培養基的培養瓶中，蓋上瓶蓋并用封口膜封住瓶口，置于培養箱中，在24°C，光照1500Ix條件下培養15天。所述叢生芽誘導培養基為MS基本培養基添加6-BA I. Omg/L和NAAO. lmg/L, MS基本培養基中蔗糖20g/L、瓊脂粉3g/L、溶劑為水，pH5. 6。(3)芽的分化和增殖觀察步驟(I)所述24°C，光照15001x條件下培養15天后的節段，切口部位開始膨大，出現綠色突起，20天后出現芽分生組織(即不定芽)。再培養10天，當不定芽長到2cm時，將不定芽切下轉接到芽增殖培養基中在24°C，光照15001x條件下進行增殖培養，建立叢芽增殖體系，獲得叢生苗。所述的芽增殖培養基為添加6-BAO. 5mg/L、NAAO. 05mg/L、谷氨酰胺80mg/L的MS基本培養基，MS基本培養基中蔗糖20g/L、瓊脂粉3g/L、溶劑為水，pH5. 6。(4)壯苗培養將步驟(3)獲得的叢生苗切割成單個，轉入壯苗培養基中，分化苗基本不發生分化，而以較快速度加粗伸長生長，在24°C，光照15001x條件下培養15天，發育成3cm的健壯無根苗，獲得分化芽。所述壯苗培養基為添加6-BAO. 5mg/L、NAA0. lmg/L的MS基本培養基，MS基本培養基中蔗糖20g/L、瓊脂粉3g/L、溶劑為水，pH5. 6。(5)分化苗的生根將經壯苗培養的分化苗從基部切下，將芽苗基部切口在30mg/L的NAA水溶液中浸泡20mins，然后直接扦插入已消毒的移栽基質中，在移栽基質中施以1/4MS無機鹽(包含MS大量兀素、微量兀素和鐵鹽)含量的培養基作為養分，扦插苗蓋上薄膜，保持濕度90%以上，置通風陰涼處。在24°C、光照15001x條件下培養10天后分化苗平均長出3條細根，形成完整植株，最終的生根率為90%。移栽基質按細沙腐殖土 谷糠灰的質量比為5 2 2配制。移栽基質的消毒方法采用體積濃度0. 5%福爾馬林水溶液均勻噴灑基質，塑料薄膜覆蓋3天后揭開薄膜再曝曬基質I天進行消毒。實施例2不同的消毒劑對山胡椒外植體生長的影響分別用質量濃度10%的過氧化氫(H2O2)水溶液、質量濃度0. 1%的氯化汞(HgCl2)水溶液及實施例I中的混合消毒液(所述混合消毒液是99. 5ml的84消毒液與0. 5ml的吐溫20的混合液)對山胡椒的外植體材料(即腋芽)進行消毒，其它操作同實施例I。分別將節段接種到裝有叢生芽誘導培養基的培養瓶中，封口膜封住瓶口后，置于培養箱中。在24°C，光照15001x條件下進行培養15天后，觀察統計不同消毒劑對山胡椒芽誘導和生長的影響，結果見表I所示。結果表明，混合消毒液和質量濃度0. l%HgCl2的消毒效果基本相同，質量濃度10%的過氧化氫消毒效果稍差，污染率達到25%，生長緩慢。但是質量濃度0. IffigCl2消毒對芽的誘導有影響，誘導率僅88%，而且外植體有發褐現象，芽的生長也比較慢，可能是HgCl2毒害細胞對芽的誘導有一定的影響。而混合消毒液污染率僅達15%，但是芽誘導率高達98%，并且外植體呈綠色，出現芽點早，生長較快。說明混合消毒液對山胡椒外植體的消毒和芽誘導效果最佳。表I不同的消毒劑對山胡椒外植體生長的影響

權利要求
1.一種山胡椒組織培養方法，其特征在于所述方法按如下步驟進行 (1)無菌材料的獲得及誘導培養切取長勢良好、無病蟲害的山胡椒幼嫩的腋芽，用自來水沖洗O. 5 2h，然后在體積濃度為1%洗潔精的水溶液中振搖2 5mins，用無菌水沖凈；在超凈工作臺上用體積濃度70 75%乙醇水溶液浸泡30 60s，然后用混合消毒液浸泡20 30mins，所述的混合消毒液為體積比I :200的吐溫20和84消毒液的混合液，再用無菌水沖洗3 5遍，將腋芽分切成O. 5 2cm的節段，然后將節段接種到裝叢生芽誘導培養基的培養瓶中，蓋上瓶蓋并用封口膜封住瓶口，置于培養箱中，在24 26°C，光照1500 25001x條件下培養15 25天；所述叢生芽誘導培養基為添加6-BA1. O 4. Omg/L和NAAO.I O. 5mg/L的MS基本培養基； (2)芽的分化和增殖觀察步驟(I)所述24 26°C，光照1500 25001x條件下培養15 25天后的節段，切口部位開始膨大，出現綠色突起，20 40天后出現不定芽，再培養10 20天后，當不定芽長到2 4cm時，將不定芽切下轉接到芽增殖培養基中，在24 26°C，光照1500 25001x條件下進行增殖培養，獲得叢生苗；所述芽增殖培養基為添加6-BA O. 5 2. Omg/L、ΝΑΑ0. 05 O. 2mg/L和谷氨酰胺80 120mg/L的MS基本培養基； (3)壯苗培養將步驟(2)獲得的叢生苗切割成單個，并轉接到壯苗培養基中，在24 26°C，光照1500 25001x條件下培養15 25天，發育成3 5cm的分化苗；所述壯苗培養基為添加6-BA O. 5 2mg/L和ΝΑΑ0. I O. 3mg/L的MS基本培養基； (4)分化苗的生根將經壯苗培養的分化苗從基部切下，將芽苗基部切口在30 50mg/L的NAA水溶液中浸泡20 40mins，然后直接扦插入已消毒的移栽基質中，再在移栽基質中施以1/4MS無機鹽含量的培養基作為養分，扦插苗蓋上薄膜，保持濕度90%以上，置通風陰涼處，在24 26°C、光照1500 25001x條件下培養10 20天后長出3 6條細根，形成完整植株，最終的生根率為90 95% ;所述移栽基質為細沙、腐殖土與谷糠灰按質量比5 2 2的比例配置而成，所述移栽基質的消毒方法為采用體積濃度O. 5%福爾馬林水溶液均勻噴灑基質，塑料薄膜覆蓋3 5天后揭開薄膜再曝曬I 3天，完成對移栽基質的消毒。
2.如權利要求I所述山胡椒組織培養方法，其特征在于步驟(I)所述叢生芽誘導培養基為添加6-BA 2. Omg/L和NAA O. 3mg/L的MS基本培養基。
3.如權利要求I所述山胡椒組織培養方法，其特征在于步驟(2)所述的芽增殖培養基為添加6-BA1. 5mg/L、NAA O. lmg/L和谷氨酰胺100mg/L的MS基本培養基。
4.如權利要求I所述山胡椒組織培養方法，其特征在于步驟(3)所述壯苗培養基為添力口 6-BA I. 0mg/L 和 NAA 0. 2mg/L 的 MS 培養基。
5.如權利要求I 4之一所述山胡椒組織培養方法,其特征在于所述的MS基本培養基終濃度組成為=NH4NO3L 65 克 / 升、KNO3L 9 克 / 升、CaCl2 · 2H20 0. 44 克 / 升、MgSO4 · 7H200.37 克 / 升、KH2PO4O. 17 克 / 升、KI 0. 83 毫克 / 升、Η3Β035· 2 毫克 / 升、MgSO4 · 7Η20 22. 3毫克 / 升、ZnSO4 · 7Η20 3. 6 毫克 / 升、Na2MoO4 · 2Η20 0. 25 毫克 / 升、CuSO4 · 5Η20 0. 025毫克 / 升、CoCl2 · 6Η20 0. 025 毫克 / 升、Na2EDTA 37. 3 毫克 / 升、FeSO4 · 7Η20 27. 8 毫克/升、肌醇100毫克/升、甘氨酸2毫克/升、鹽酸硫胺素0. I毫克/升、鹽酸吡哆醇0. 5毫克/升、煙酸0. 5毫克/升、蔗糖20 40克/升、瓊脂粉3 12克/升，溶劑為水，pH為5.6 6。
全文摘要
本發明公開了一種山胡椒組織培養方法，以山胡椒幼嫩的腋芽作為外植體，建立一種通過組織培養的快速離體繁殖方法,所述的方法包括無菌材料的獲得，不定芽的誘導分化和增殖，芽的生根和移栽等步驟；本發明對培養基進行了改良，添加了谷胺酰胺調節劑，大大提高了分化率，省略了組培中的無菌誘導生根環節，采用開放式操作，利用NAA誘導生根形成完整植株；本發明方法克服了山胡椒常規育種周期長、繁殖系數低等缺點，并提高了其性狀的穩定性，可實現育苗的工廠化大批量生產，并有效解決山胡椒優質種苗的供應問題。
文檔編號A01H4/00GK102668980SQ201210141409
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月9日 優先權日2012年5月9日
發明者劉軍, 徐曉暉, 李素芳, 王為民, 鄒克琴 申請人:中國計量學院