專(zhuān)利名稱(chēng)：Dcf1基因的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種dcfl基因的新用途。
背景技術(shù)：
阿爾茲海默癥(Alzheimer’s Disease, AD)也就是我們俗稱(chēng)的老年癡呆,是一種大腦的退行性疾病，主要表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶和認(rèn)知功能障礙。目前公認(rèn)的阿爾茲海默癥主要的病理改變是腦內(nèi)β淀粉樣斑塊的形成和tau蛋白介導(dǎo)的神經(jīng)纖維纏結(jié)。目前阿爾茲海默癥的形成原因與發(fā)病機(jī)制仍然是全球的熱點(diǎn)關(guān)注話題，這不僅是一門(mén)值得被關(guān)注值有待被解決的問(wèn)題，更與人類(lèi)健康息息相關(guān)。樹(shù)突細(xì)胞因子(dentritic cell-derived factor 1,DCF1)基因的功能報(bào)道比較罕見(jiàn)。有報(bào)道指出DCFl能夠抑制淀粉樣前體蛋白APP的剪切，進(jìn)而阻止形成阿爾茲海默癥淀粉樣蛋白斑的β淀粉體蛋白肽。此研究就是旨在探討DCFl缺失后對(duì)蛋白質(zhì)組的功能表達(dá)發(fā)生什么樣的改變。果蜆(Drosophila melanogaster)具有高度發(fā)達(dá)的神經(jīng)系統(tǒng)以及較短的生命周期，易飼養(yǎng)且易于進(jìn)行遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)手段的操作和分析，是一種非常實(shí)用的模式生物。所有，果蠅廣泛地用于神經(jīng)退行性疾病模型的構(gòu)建和研究。本發(fā)明通過(guò)GAL4/UAS雙元系統(tǒng)控制外源基因表達(dá)，利用在果蠅神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)表達(dá)人源APP和BACE來(lái)構(gòu)建AD果蠅模型，該模型被證實(shí)在果蠅生命周期的早期即開(kāi)始呈現(xiàn)運(yùn)動(dòng)能力下降的AD的癥狀。DIGE (雙向熒光差異凝膠電泳)是在傳統(tǒng)電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型蛋白質(zhì)定量技術(shù)。DIGE通常使用三種熒光染料(CY2，CY3，CY5)標(biāo)記不同組別的蛋白(包括混合蛋白樣本作為內(nèi)參)。電泳分離后，根據(jù)不同波長(zhǎng)進(jìn)行激光掃描，運(yùn)用專(zhuān)業(yè)分析軟件得出確定的
定量結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的之一在于提供一種dcfl基因在緩解運(yùn)動(dòng)能力下降癥狀中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的之二在于提供一種dcfl基因在緩解學(xué)習(xí)記憶能力下降癥狀中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)雜交的方式在AD模型果蠅神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)dcfl基因，利用ClimbingAssay (爬壁實(shí)驗(yàn))檢測(cè)其運(yùn)動(dòng)能力下降癥狀的緩解情況；另外通過(guò)分析野生型以及DCFl缺失后的小鼠全腦蛋白的2D-DIGE (雙向熒光差異凝膠電泳)，以及質(zhì)譜分析得出相關(guān)的表達(dá)差異蛋白，并對(duì)所有差異蛋白(P〈0. 05)進(jìn)行功能注視及分類(lèi)，歸類(lèi)3個(gè)蛋白為阿爾茲海默癥(AD)相關(guān)蛋白并進(jìn)行western的表達(dá)量驗(yàn)證。通過(guò)分析open field (認(rèn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn))和Morris water maze (水迷宮即學(xué)習(xí)記憶能力實(shí)驗(yàn))的結(jié)果可以證實(shí),dcfl基因缺失后的小鼠的運(yùn)動(dòng)能力和學(xué)習(xí)記憶能力都有所下降。本發(fā)明通過(guò)分析Climbing Assay (爬壁實(shí)驗(yàn))和 Learning and Memory AbilityAssay (學(xué)習(xí)記憶能力實(shí)驗(yàn))的結(jié)果可以證實(shí)，表達(dá)人源dcfl基因后AD模型果蠅的運(yùn)動(dòng)能力和學(xué)習(xí)記憶能力下降的癥狀有了顯著的緩解。這種利用在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)基因產(chǎn)物來(lái)治療AD的方法，有別于傳統(tǒng)的外部給藥，為AD的治療開(kāi)辟了一條新的思路。


圖I為構(gòu)建的果蠅轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf I經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶EcoRI和XbaI雙酶切產(chǎn)物的電泳圖，最左邊泳道為DNA Marker，泳道1、2均為pUAST_dcfl雙酶切產(chǎn)物。圖2為顯微注射操作時(shí)果蠅的受精卵的狀態(tài)。圖3為顯微注射得到帶有平衡基因的人源dcfl轉(zhuǎn)基因果蠅和Double Balance果蠅以及野生型果蠅wlll8分別雜交后獲得的純合UAS系轉(zhuǎn)基因果蠅品系w;UAS-dcn/以5-如€1;+/+、以及野生型果蠅《1118分別和elav-GAL4果蠅(泛神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)啟動(dòng))雜交得到的Fl代果蠅，分別提取羽化后10天Fl代果蠅腦部組織的總RNA后反轉(zhuǎn)錄cDNA為模版而進(jìn)行的PCR反應(yīng)后的電泳圖(引物為構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf I時(shí)取得目的片段時(shí)的引物)，內(nèi)參為β-actin。圖4為果蠅爬壁實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)的四組果蠅分別為AD模型果蠅、共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅、表達(dá)dcfl的果蠅、野生型(這些UAS系果蠅和elav-GAL4雜交產(chǎn)生Fl代以表達(dá)各外源基因，野生型果蠅與elav-GAL4雜交作為對(duì)照)。圖片顯示從成蟲(chóng)羽化第I天起到第60天，每隔10天進(jìn)行一次爬壁能力的測(cè)定的結(jié)果。統(tǒng)計(jì)顯著性的方法為Student’ sTest，*ρ〈0· 05，** ρ〈0·01。圖5為果蠅學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)的四組果蠅分別為AD模型果蠅、共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅、表達(dá)dcfl的果蠅、野生型果蠅wl118 (這些UAS系果蠅和elav_GAL4雜交產(chǎn)生Fl代以表達(dá)各外源基因，野生型與elav-GAL4雜交作為對(duì)照)。圖片顯示果蠅進(jìn)入可食管和不可食管的數(shù)量變化，通過(guò)果蠅尋找食物的時(shí)間和數(shù)量變化可以判斷果蠅學(xué)習(xí)記憶能力的變化。A為各組果蠅在進(jìn)入可食管的數(shù)量變化圖；B為各組果蠅進(jìn)入不可食管的數(shù)量 變化圖。統(tǒng)計(jì)顯著性的方法為Student’ s Test, *ρ〈0· 05, ** ρ〈0. 01。圖6為用PCR手段鑒定小鼠基因型的凝膠電泳圖。其中分別用up low以及upF31ow兩對(duì)引物進(jìn)行PCR檢測(cè)。1，2泳道的檢測(cè)結(jié)果為400bp以及I. 9kb為野生型；3，4泳道的檢測(cè)結(jié)果為沒(méi)有條帶與700bp為敲除型。圖7為蛋白質(zhì)的2D電泳圖，將鑒定完畢的小鼠包括野生型和敲除型的小鼠各5只取腦組織的蛋白，混合后上樣，根據(jù)蛋白質(zhì)大小及等電點(diǎn)的分離形成二維的電泳圖。圖8為western驗(yàn)證差異蛋白的表達(dá)量。對(duì)于野生型和全敲鼠的全腦蛋白進(jìn)行抽提，并將其進(jìn)行western定量，驗(yàn)證了質(zhì)譜分析結(jié)果。圖9為小鼠進(jìn)行了阿爾茲海默癥模型鼠的行為學(xué)測(cè)試。首先進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)試，測(cè)試手段為水迷宮。對(duì)其進(jìn)行5天的訓(xùn)練，然后測(cè)試其的學(xué)習(xí)記憶。分別記錄小鼠的游行距離，其穿越平臺(tái)的次數(shù)與時(shí)間，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行Student’ s T test的統(tǒng)計(jì)分析，其中(*ρ〈0· 05, **ρ〈0· 01)
圖10為小鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)能力的測(cè)試，開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)小鼠的運(yùn)動(dòng)能力，同時(shí)也能測(cè)試小鼠對(duì)于新奇事物的探索能力。參數(shù)記錄分別為小鼠運(yùn)動(dòng)的全程距離，穿越中間區(qū)域的次數(shù)以及停留在中央?yún)^(qū)域的時(shí)間。
具體實(shí)施例方式本實(shí)施例所用的表達(dá)dcfl的果蠅模型的建立方法如下
一、果蠅轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcfl的構(gòu)建和驗(yàn)證
I、為得到果蠅轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf I，首先以人子宮頸癌細(xì)胞HeLa細(xì)胞的cDNA為模版進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，引物為 dcfl primers (5，-CGGAATTCATGGCGGCGCCGAAGGGG AG-3’和 5’ -GCTCTAGATTAAATTTCAGAATGAGCAA-3’)，得到大小為972bp (dcfl基因開(kāi)放式閱讀框全長(zhǎng))的目的片段后再用EcoRI和XbaI雙酶切，收集片段備用。2、然后用EcoRI和XbaI雙酶切空載體質(zhì)粒pWIZ，收集大片段備用。3、最后將兩個(gè)片段連接起來(lái)，得到果蠅轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcfl。4、如圖1，EcoRI和XbaI雙酶切鑒定構(gòu)建的果蠅轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf 1，可見(jiàn)轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf I雙酶切后放出了大小為972bp的目的片段，后經(jīng)測(cè)序證明了目的片段的準(zhǔn)確性，說(shuō)明正確的目的片段已經(jīng)插入到載體中，載體構(gòu)建成功。二、顯微注射轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)以及轉(zhuǎn)基因果蠅的驗(yàn)證
I、為得到人源dcfl轉(zhuǎn)基因果蠅，以P因子介導(dǎo)的生殖細(xì)胞系轉(zhuǎn)化的原理，利用顯微注射的基因工程技術(shù)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因果蠅。2、將轉(zhuǎn)基因載體pUAST-dcf I和輔助質(zhì)粒以一定濃度比例，裝入拉長(zhǎng)開(kāi)口的玻璃微電極中，在氣壓機(jī)械注射臂的幫助下將此混合液注入果蠅新產(chǎn)出Ih內(nèi)去除卵殼的受精卵的尾部(如圖2)，將注射完成后的卵放16°C在濕盒中培養(yǎng)。3、注射后的受精卵孵化成幼蟲(chóng)然后羽化為成蟲(chóng)后即和野生型《1118交配，挑取子代眼色為紅色的果蠅即為轉(zhuǎn)基因果蠅。將挑選出的帶有dcfl基因的果蠅和Double Balance果蠅以及野生型wl 118經(jīng)過(guò)多次有針對(duì)性的雜交，可以篩選出基因型為w; UAS-dcf 1/UAS-dcf I; +/ + 的果妮。
4、為了可以在果蠅神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)dcfl，可以將構(gòu)建的UAS系dcfl轉(zhuǎn)基因果蠅與elav-GAL4雜交，得到Fl代并提取羽化后10天Fl代果蠅腦部組織的總RNA后反轉(zhuǎn)錄cDNA為模版而進(jìn)行PCR反應(yīng),引物為dcfl primers ;內(nèi)參基因?yàn)棣?actin,引物為β-actinprimers (5，-GTCCCAGTTGGTCACGAT-3，和 5，-AGTTGCTGCTCTGGTTGT-3，)。5、如圖3，由電泳圖可知，構(gòu)建的人源dcfl轉(zhuǎn)基因果蠅是成功的，因?yàn)橐赞D(zhuǎn)基因果蠅Fl代的cDNA為模版可以擴(kuò)增出972bp的目的條帶而對(duì)照組卻沒(méi)有。實(shí)施例一在AD模型果蠅神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)dcfl能夠緩解其運(yùn)動(dòng)能力下降癥狀
I、果蠅有天生的負(fù)趨地性，當(dāng)果蠅被放入豎直放置的管中會(huì)本能地向上端爬行，而爬行的速度反應(yīng)了果蠅的運(yùn)動(dòng)能力。實(shí)驗(yàn)利用不同基因、相同數(shù)量(10只)、相同羽化天數(shù)、相同性別(雄性)的果蠅用二氧化碳麻醉后分別移入相同的試管(長(zhǎng)18cm，直徑I. 5cm)中，25°C環(huán)境復(fù)蘇30min后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。2、裝有果蠅的試管保持豎直狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)溫和地敲擊試管，使果蠅集中到試管底部后開(kāi)始計(jì)時(shí)，IOs后計(jì)時(shí)結(jié)束時(shí)快速計(jì)數(shù)在試管頂端和底端的果蠅數(shù)量并做好記錄，一次測(cè)試后讓果蠅恢復(fù)60s后再繼續(xù)下一次測(cè)試，每次實(shí)驗(yàn)完成5-10次測(cè)試；實(shí)驗(yàn)每5天重復(fù)一次，從剛羽化到羽化第60天為止，各組實(shí)驗(yàn)要進(jìn)行三次生物學(xué)重復(fù)。3、實(shí)驗(yàn)的四組果蠅分別為AD模型果蠅、共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅、表達(dá)dcfl的果蠅、野生型果蠅(這些UAS系果蠅和elav-GAL4雜交產(chǎn)生Fl代以表達(dá)各外源基因，野生型與elav-GAL4雜交作為對(duì)照)。每次實(shí)驗(yàn)中5_10次技術(shù)重復(fù)取平均值作為一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，完成三次生物學(xué)重復(fù)，利用Student’s Test統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，從第10天開(kāi)始，共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅相比于AD模型果蠅，同時(shí)期的爬壁能力均有了顯著的提高(*p〈0.05，# p〈0. 01)，即運(yùn)動(dòng)能力下降的癥狀有了顯著的緩解。AD模型果蠅相比于作為對(duì)照的表達(dá)外源dcfl的果蠅和野生型對(duì)照果蠅，同時(shí)期的爬壁能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)要差，說(shuō)明運(yùn)動(dòng)能力大幅度下降；而同時(shí)共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅相比于作為對(duì)照的表達(dá)外源dcfl果蠅和野生型對(duì)照果蠅，同時(shí)期的爬壁能力仍然要差但強(qiáng)于AD模型果蠅，即運(yùn)動(dòng)能力下降的癥狀雖然得到緩解卻不能完全治愈，以到達(dá)正常的水平。如圖4所示。實(shí)施例二 在AD模型果蠅神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)人源dcfl能夠緩解其學(xué)習(xí)記憶能力下降癥狀
I、果蠅可以通過(guò)其復(fù)雜敏銳的嗅覺(jué)系統(tǒng)區(qū)識(shí)別和確認(rèn)食物的位置，經(jīng)過(guò)多次訓(xùn)練，果蠅最終可以遠(yuǎn)離無(wú)法接近的食物，而趨向可以接近的食物。通過(guò)果蠅尋找食物時(shí)間和數(shù)量的變化可以判斷出果蠅學(xué)習(xí)記憶能力的變化。實(shí)驗(yàn)中利用香蕉這種水果作為吸引果蠅的食物。2、實(shí)驗(yàn)用的50ml離心管，在靠近離心管底部的下半段鉆十個(gè)可以容納果蠅自由出入的孔洞。取帶有孔洞的離心管2只置于IOOOml燒杯中，其中一只離心管底放有約5g香蕉，果蠅可以聞到香蕉的氣味而找到香蕉且可以吃到香蕉，這個(gè)離心管命名為可食管；另一個(gè)離心管底也放有約5g香蕉，同時(shí)香蕉用紗布包住，果蠅可以聞到香蕉的氣味而找到香蕉卻吃不到香蕉，這個(gè)離心管命名為不可食管。3、在25°C環(huán)境下，使100只羽化后10天的果蠅饑餓2h，用二氧化碳麻醉后放入燒杯中蓋上紗布以封住燒杯口，然后讓果蠅恢復(fù)30min，快速將一個(gè)可食管和一個(gè)非可食管放入燒杯后封號(hào)燒杯口，開(kāi)始計(jì)時(shí)；每隔Ih記錄果蠅進(jìn)入可食管和不可食管的數(shù)量，每個(gè)基因型進(jìn)行三次生物學(xué)重復(fù)，利用Student’ s Test統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。參見(jiàn)圖5，實(shí)驗(yàn)的四組果蠅分別為AD模型果蠅、共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅、表達(dá)dcfl的果蠅、野生型果蠅(這些UAS系果蠅和elav-GAL4雜交產(chǎn)生Fl代以表達(dá)各外源基因，野生型與elav_GAL4雜交作為對(duì)照)。4、圖5A顯示在可食管中，四組實(shí)驗(yàn)果蠅進(jìn)入可食管的數(shù)量均隨著時(shí)間的增長(zhǎng)呈逐漸上升的趨勢(shì)，說(shuō)明隨著時(shí)間的推移和學(xué)習(xí)訓(xùn)練次數(shù)的增加大部分果蠅能夠逐漸找到可以食用的食物而最終進(jìn)入可食管，只是速度有所差異。共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅相比于AD模型果蠅，同時(shí)期進(jìn)入可食管的數(shù)量有了顯著的增加(*p〈0. 05，** p〈0. 01)，即學(xué)習(xí)記憶能力下降的癥狀有了顯著的緩解。AD模型果蠅相比于作為對(duì)照的表達(dá)外源dcfl的果蠅和野生型對(duì)照果蠅，同時(shí)期進(jìn)入可食管的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)要少，說(shuō)明學(xué)習(xí)記憶能力大幅度下降；而共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅相比于作為對(duì)照的表達(dá)外源dcfl的果蠅和野生型對(duì)照果蠅，同時(shí)期進(jìn)入可食管的數(shù)量仍然要少但多于AD模型果蠅，即學(xué)習(xí)記憶能力下降的癥狀雖然得到緩解卻不能完全治愈，以到達(dá)正常的水平。5、圖5B顯示，相比于作為對(duì)照的表達(dá)外源dcfl的果蠅和野生型對(duì)照果蠅，共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅和AD模型果蠅進(jìn)入在不可食管中數(shù)量總體要多，并且隨著時(shí)間的增長(zhǎng)有逐漸上升的趨勢(shì)。但是作為對(duì)照的表達(dá)外源dcfl的果蠅和野生型對(duì)照果蠅隨著時(shí)間的增加，離開(kāi)不可食管的速度快于共表達(dá)dcfl的AD模型果蠅和AD模型果蠅。實(shí)施例三DCF1小鼠的鑒定
I、實(shí)驗(yàn)室先期已擴(kuò)種大 量的DCFl基因敲除小鼠，我們利用PCR的技術(shù)用兩對(duì)引物將WT小鼠與基因敲除小鼠區(qū)分。如圖6所示。實(shí)施例四2D — DIGE以及質(zhì)譜分析結(jié)果
I、裂解與普通雙向電泳相同，先對(duì)樣品進(jìn)行裂解，唯一不同的是要用DIGE裂解液對(duì)樣品進(jìn)行裂解。將樣品在裂解液中進(jìn)行勻漿或研磨。2、離心裂解完畢后，4°C下，HOOOrpm離心lh，取上清。3、定量使用Bio-Rad protein assay reagent對(duì)樣品進(jìn)行定量。取部分樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尩?-10mg/ml，稀釋完畢還需定量一次。4>Internal Standard :每個(gè)樣品各取50ug,體積5-lOul,加到同一個(gè)EP管里，振蕩混勻，離心。5、取 50ug 樣品，加入突光染料(working solution) lul, Cy2 標(biāo)記 internalstandard, Cy3與Cy5標(biāo)記樣品。混勻，于冰上暗處標(biāo)記30min。加入lul IOmM lysine終止反應(yīng)。標(biāo)記完成。6、將分別用Cy2，Cy3, Cy5標(biāo)記的樣品加到同一 EP管中，振蕩混勻，點(diǎn)動(dòng)離心。樣品制備完畢，上樣進(jìn)行IEF與SDS-PAGE。結(jié)果如圖7所示
7、Typhoon掃描儀進(jìn)行掃描并通過(guò)質(zhì)譜分析儀進(jìn)行質(zhì)譜分析。實(shí)施例五western檢驗(yàn)MBP, GFAP的蛋白量
對(duì)于質(zhì)譜分析的結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)(uniprot，N C B I )的搜索，發(fā)現(xiàn)其中3個(gè)蛋白與阿爾茲海默癥相關(guān)，分別是MBP，GFAP和DRP2 (見(jiàn)下表)。我們對(duì)其中的MBP和GFAP進(jìn)行了western定量分析,其結(jié)果與質(zhì)譜結(jié)果一致。見(jiàn)圖8。
Table I- Identification of 3 proteins differentially caressed between
WT and Knockout mice_
ProteinMaster Swiss-prot MW PI P-value
identified_^_accession no._
my elm basic 1391 P043701.39 11.33 0.00035
protem
Gfap655 P039954,83 5.09 0.0030
Drp2353 Q05AA6 O 95 0:0054~
If_；；II_I實(shí)施例六對(duì)于野生型和基因敲出小鼠進(jìn)行動(dòng)物行為學(xué)研究
I、如圖9所示，對(duì)小鼠進(jìn)行了學(xué)習(xí)記憶的測(cè)試。該實(shí)驗(yàn)是研究鼠類(lèi)空間學(xué)習(xí)記憶功能的重要實(shí)驗(yàn)通過(guò)連續(xù)多日訓(xùn)練鼠類(lèi)以水池壁的標(biāo)記物進(jìn)行定位導(dǎo)航游泳尋找水中隱藏平臺(tái)的方法檢測(cè)小鼠的空間學(xué)習(xí)能力；接著撤除平臺(tái)，分析小鼠在水迷宮里搜索原隱藏平臺(tái)的行為來(lái)檢測(cè)小鼠的空間記憶功能。圖9中的結(jié)果向我們展示野生型小鼠的學(xué)習(xí)能力強(qiáng)于敲除小鼠，可以推測(cè)DCFl的敲除確實(shí)給小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力帶來(lái)一定的損傷。2、如圖10所示，對(duì)小鼠進(jìn)行了認(rèn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的測(cè)試。該實(shí)驗(yàn)研究鼠類(lèi)運(yùn)動(dòng)能力及探究新事物能力的重要實(shí)驗(yàn)。讓其在一個(gè)四周封閉的箱內(nèi)進(jìn)行探索，老鼠天性喜歡在角落活動(dòng)。觀察其進(jìn)入中央?yún)^(qū)域的時(shí)間和次數(shù)，以及運(yùn)動(dòng)的距離可以測(cè)出小鼠對(duì)于新事物的好奇程度以及其運(yùn)動(dòng)能力的強(qiáng)弱。圖10中的結(jié)果向我們展示，無(wú)論從運(yùn)動(dòng)距離或者是探尋新事物的能力來(lái)說(shuō)野生型的小鼠都優(yōu)于敲除小鼠，推測(cè)DCFl的敲除導(dǎo)致了小鼠運(yùn)動(dòng)能力和探尋新鮮事物能力降低。·
權(quán)利要求
1.一種dcfI基因在緩解運(yùn)動(dòng)能力下降癥狀中的應(yīng)用。
2.—種dcfl基因在緩解學(xué)習(xí)記憶能力下降癥狀中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種dcf1基因的新用途。該基因能有效緩解運(yùn)動(dòng)能力和學(xué)習(xí)記憶能力下降的狀況。本發(fā)明通過(guò)分析ClimbingAssay(爬壁實(shí)驗(yàn))和LearningandMemoryAbilityAssay(學(xué)習(xí)記憶能力實(shí)驗(yàn))的結(jié)果可以證實(shí)，表達(dá)人源dcf1基因后AD模型果蠅的運(yùn)動(dòng)能力和學(xué)習(xí)記憶能力下降的癥狀有了顯著的緩解。這種利用在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)基因產(chǎn)物來(lái)治療AD的方法，有別于傳統(tǒng)的外部給藥，為AD的治療開(kāi)辟了一條新的思路。
文檔編號(hào)A01K67/027GK102925483SQ201210164579
公開(kāi)日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月25日
發(fā)明者文鐵橋, 李璟 申請(qǐng)人:上海大學(xué)