專利名稱：寒地桑樹栽培種植方法
技術領域：
本發明涉及一種寒地桑樹栽培種植方法。
背景技術：
東北地區屬溫帶大陸性季風氣候，在種桑養蠶方面具有南方各省無法比較的優勢，但另一方面，由于桑樹屬喜溫、喜陽、喜濕的多年生木本植物，適宜生長在較溫暖的地區，而東北地區氣候嚴寒、冬季漫長、無霜期短，春季常常是低溫、大風、干旱，是植桑養蠶的關鍵制約因素。我國桑、蠶品種審定委員會審定(認定)的29個品種主要適合長江流域氣候溫暖地區栽植，僅有“吉湖4號”和“選秋一號”2個品種適合北緯45°以下東北地區栽培。超過北緯45°時，“吉湖4號”和“選秋一號”2個品種的凍害率急劇升高，分別高達85%和79%，·給農民栽桑養蠶造成巨大的經濟損失。經過多年努力，東北地區也成功培育出具有一定抗寒性能的桑樹新品種(適合北緯45。以南地區栽植)。如黑龍江省的龍桑一號、依蘭16桑樹，吉林省的吉湖桑，遼寧省的遼育8號等。這些桑樹品種隨著栽植年限增長和栽植面積的不斷擴大，品種的優良特性逐漸退化。在東北一些高寒地區(主要指45-50。)凍害頻發(上述品種的凍害率均超過50%以上)，而且上述品種以實生桑類型為主，產量低(單株產量均低于2kg)，采葉費工，導致大量低產桑園的出現，很難適應發展現代蠶業發展的要求。東北高寒地區當地群眾栽桑養蠶的主要樹種為當好未加改良的野生桑樹，這些桑樹雖然抗凍性好，但產量極低(單株產量均低于I. 5kg)、桑葉品質差(粗蛋白含量低于20%)，養蠶經濟效益低下(每畝收入不到700元)，嚴重影響了上述地區桑蠶業經濟效益和農民種桑養蠶的積極性，也是制約我國“南桑北移”戰略工程實現的關鍵制約因素。
針對東北地區桑蠶業發展過程中，缺乏抗寒性、產量高和品質好的桑樹(適合北緯45。-50。地區栽植)和配套豐產栽培技術現狀，綜合運用一系育種和栽培技術措施，選育出適合東北地區，特別是東北高寒地區，如黑龍江省北部氣候特點的優良桑樹品種，改變我國上述地區桑樹品種少、發展不平衡，品種難以適應桑蠶發展的要求。在培育出抗寒性強、產量高的優質桑樹新品種的基礎上，從桑樹剪梢、栽植密度等嚴重影響桑樹產量等性狀的主要因素進行研究，總結提出東北地區桑樹豐產高效科學的栽培技術模式。因此從實施國家“南桑北移”工程、增加東北高寒區域蠶農收入、擴大當好農民就業和改善生態環境的方面考慮，我國桑樹育種的發展趨勢就是培育出抗寒性、產量高和品質好的桑樹，并在此基礎上提出相應的栽培技術。我國是世界上種桑養蠶最早的國家，種桑養蠶是中國幾千年來的傳統產業。據統計，在新中國成立的1949年，全國桑園面積只有19. 84萬公頃，蠶繭產量3. 09萬噸。我國蠶桑業在經過了 20多年的曲折發展后，直到1970年，我國桑園面積達到23. 34萬公頃，蠶繭產量12. 15萬噸，首次超過了日本，位居世界第一。從此以后，我國就一直位居世界蠶桑業巨頭的寶座。自改革開放以來，我國蠶桑業發展的頂峰時期，是在上個世紀末期的90年代前后。1994年，我國蠶繭產量達77. 69萬噸，全國有26個省市發展蠶桑業。1995年，全國桑園面積為116. 7萬公頃，蠶繭產量仍達75. 98萬噸。2005年全國桑園面積達71萬hm2，生產蠶繭58. 9萬噸，年繅絲產量近7萬噸，絲織產品53億m，年產值約700億元，居世界第一位。中國是世界上桑樹種類和桑樹栽培面積最多的國家，也是桑樹栽培歷史最悠久的國家。桑樹在中國各地均有分布，按照分類學劃分，可分為15個桑種和4個變種；按照自然地理情況可分為8大區；從栽培范圍來看，東北自哈爾濱以南，西北從內蒙古南部至新疆、青海、甘肅、陜西，南至廣東、廣西，東至臺灣，西至四川、云南，并以長江、珠江、黃河三大流域栽培最多。長江流域全年可養蠶4 5次，產繭量占全國的80%以上，其中尤以四川、浙江、江蘇三省最為發達。珠江流域全年可養蠶7 8次，集中在廣東省的順德、中山等地，產繭量占全國的7 %左右。黃河流域全年可養3 4次，主要集中在山東、山西、陜西、河北、河南等省，產繭量占全國6%。

發明內容
本發明的目的是提供一種能夠在寒冷地區正常生長、長勢好的寒地桑樹栽培種植方法。上述的目的通過以下的技術方案實現
一種寒地桑樹栽培種植方法，本方法為六部分，第一部分寒冷處理，第二部分相對電導率測定，第三部分超氧化物岐化酶SOD活性測定，第四部分丙二醛MDA濃度測定，第五部分葉綠素質量濃度測定，第六部分光合性能測定。
^ SjfM 電導-X 100%所述的寒地桑樹栽培種植方
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法，所述的寒冷處理；鑫森淼桑樹和對照依蘭16桑樹各100株，將試驗材料置于暖棚內，當室外溫度降到O 15°C之間時，將材料置于大棚內進行低溫處理，當溫度3 15°C處理O d或4 d，每個植株選取3個位點，取平均值，定義為每個轉化植株的葉綠素含量；當溫度5 15°C處理O d或6 d測其凈光合速率；于O d取材并測定其丙二醛MDA含量以及相對電導率，記為各生理指標的基值，當溫度2 15°C處理7 d取材測其丙二醛MDA含量以及相對電導率，記為脅迫值；以下各性狀的測定各材料各測定10株，每株重復測量3次；
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ffi^J 0X 100%所述的寒地桑樹栽培種植方法，所述的
相對電導率測定，細胞膜透性的測定，將燒杯和玻璃器械在使用前用洗滌劑刷洗干凈，清水沖洗后用MiLLi-Q超純水淋洗3遍，再用MiLLi-Q超純水平衡24h，烘干待用；鑫森淼桑樹和對照依蘭16桑樹分別取相同部位的葉片，用自來水漂洗干凈，用超純水漂洗3遍，濾紙吸干表面水分后，用打孔器隨機打孔；在燒杯內加入30mL MiLLi-Q超純水，將待測葉圓片完全浸沒其中，用真空抽干機處理約40min，葉圓片沉于燒杯底部時，室溫測定電導率SI ;將其沸水煮沸20min，待冷卻至室溫，測定電導率S2 ;根據公式計算相對電導率
式中=S1 :室溫下測定的電導值；S2 :煮沸后測定的終電導值& :水空白電導值。所述的寒地桑樹栽培種植方法，所述的超氧化物岐化酶SOD活性測定既超氧化物岐化酶測定方法；取約O. 15g待試植物材料，用液氮速凍后研磨成粉末狀，放入5mL塑料離心管內，向離心管中加2. 5 ImL/15 mol/L磷酸緩沖液pH 7. 8,超聲處理lmin,冰浴5min,12000g離心5min，所得產品轉移至另一 5mL塑料離心管內，放入冰箱4°C儲存待測；將所得產品上清液稀釋15倍后取ImL酶液，加3mL反應液O. 013 mol/L Met, 63 mol/L氮藍四唑、1·3Χ1(Γ6 mol/L 核黃素、IX 1(T4 mol/L EDTA 和 O. 05mol/L 磷酸緩沖液、pH 7. 8 稀釋，30°C、6級光照培養箱內反應IOmin后，立即測定560nm吸光值，用不加酶液的反應液ImLl/15mol/L磷酸緩沖液、3mL反應液作對照，用稀釋后的酶液調零；
將測得的吸光值代入下式，求得SOD酶活性；S0D活性的單位為U · mg—1。
權利要求
1.一種寒地桑樹栽培種植方法，其特征是本方法為六部分，第一部分寒冷處理，第二部分相對電導率測定，第三部分超氧化物岐化酶SOD活性測定，第四部分丙二醛MDA濃度測定，第五部分葉綠素質量濃度測定，第六部分光合性能測定。
2.根據權利要求I所述的寒地桑樹栽培種植方法，其特征是所述的寒冷處理；鑫森淼桑樹和對照依蘭16桑樹各100株，將試驗材料置于暖棚內，當室外溫度降到0 15°C之間時，將材料置于大棚內進行低溫處理，當溫度3 15 °C處理I天-4天，每個植株選取3個位點，取平均值，定義為每個轉化植株的葉綠素含量；當溫度5 15°C處理I天-6天測其凈光合速率；于第一天取材并測定其丙二醛MDA含量以及相對電導率，記為各生理指標的基值，當溫度2 15°C處理7天取材測其丙二醛MDA含量以及相對電導率，記為脅迫值；以下各性狀的測定各材料各測定10株，每株重復測量3次；
3.根據權利要求I或2所述的寒地桑樹栽培種植方法，其特征是所述的相對電導率測定，細胞膜透性的測定，將燒杯和玻璃器械在使用前用洗滌劑刷洗干凈，清水沖洗后用MiLLi-Q超純水淋洗3遍，再用MiLLi-Q超純水平衡24小時，烘干待用；鑫森淼桑樹和對照依蘭16桑樹分別取相同部位的葉片，用自來水漂洗干凈，用超純水漂洗3遍，濾紙吸干表面水分后，用打孔器隨機打孔；在燒杯內加入30mL MiLLi-Q超純水，將待測葉圓片完全浸沒其中，用真空抽干機處理約40min，葉圓片沉于燒杯底部時，室溫測定電導率SI ;將其沸水煮沸20min，待冷卻至室溫，測定電導率S2 ;根據公式計算相對電導率
4.根據權利要求I或2或3所述的寒地桑樹栽培種植方法，其特征是所述的超氧化物岐化酶SOD活性測定方法；取約0. 15g待試植物材料，用液氮速凍后研磨成粉末狀，放入5mL塑料離心管內，向離心管中加2. 5 ImL/15 mol/L磷酸緩沖液pH 7. 8，超聲處理lmin，冰浴5min，12000g離心5min，所得產品轉移至另一 5mL塑料離心管內，放入冰箱4°C儲存待測；將所得產品上清液稀釋15倍后取ImL酶液，加3mL反應液0. 013 mol/L Met, 63 mol/L氮藍四唑、1.3X10_6 mol/L 核黃素、IX 10_4 mol/L EDTA 和 0. 05mol/L 磷酸緩沖液、pH 7.8稀釋，30°C、6級光照培養箱內反應IOmin后，立即測定560nm吸光值，用不加酶液的反應液ImL l/15mol/L磷酸緩沖液、3mL反應液作對照，用稀釋后的酶液調零； 將測得的吸光值代入下式，求得SOD酶活性；S0D活性的單位為U mg-1, SOD活性
5.根據權利要求I或2或3或4所述的寒地桑樹栽培種植方法，其特征是所述的丙二醛MDA濃度測定，取I. Og葉片用液氮速凍后，研磨成粉末狀，取適量放入5mL塑料離心管內，加入3mL10% TCAJKm 5min，12000g離心lOmin，吸取所得產品上清液2mL，對照加2mL蒸餾水，加入2mL O. 6%TBA溶液，混勻物于沸水浴反應15min，冷卻后測定該反應液在532nm或600nm或450nm波長下的消光度；式中J45tl 450nm波長下的光吸收值M532 532nm波長下的光吸收值M6OO 600nm波長下的光吸收值。
6.根據權利要求I或2或3或4或5所述的寒地桑樹栽培種植方法，其特征是所述的葉綠素質量濃度測定；取約O. Ig新鮮葉片，在液氮速凍下研磨成粉末，轉入5mL離心管內，加ImL 80%的預冷丙酮反應5min, 12000g離心5min,將所得產品上清液轉移至另一離心管內；沉淀用ImL 80%的預冷丙酮繼續抽提2次，使沉淀完全呈白色；將幾次抽提的丙酮溶液混合，再用80%的丙酮稀釋5倍后在663nm和645nm波長下測定光吸收值，以80%的丙酮作空白對照； 用下列公式計算葉綠素a和b的質量濃度
7.根據權利要求I或2或3或4或5或6所述的寒地桑樹栽培種植方法，其特征是所述的光合性能測定；凈光合速率日進程曲線測定，從08:00至18:00，每2h采用LI-6400便攜式光合測定儀測定一次葉片的凈光合速率，每株苗木選擇上部的成熟葉片(第4片葉子)測定；光合一光響應曲線的測定，從09:30至11:00，采用LI-6400型便攜式光合測定系統分別測定各航天搭載及地面對照苗木的光合一光響應值；葉綠體光誘導熒光強度測定，采用LI-6400光合作用測定系統和6400-40熒光葉室，分別苗木的葉綠體熒光強度；測定其暗適應下的最小突光固定突光/7O和最大突光總突光Z7max,按下述公式計算可變突光和可變熒光率的相對單位，可變熒光'F、=Z7max-Z7Cl,可變熒光率=ZVZ7max ;數據處理方法，數據處理采用光合測定檢驗法，并采用綜合研究進行統計分析。
全文摘要
寒地桑樹栽培種植方法。中國是世界上桑樹種類和桑樹栽培面積最多的國家，也是桑樹栽培歷史最悠久的國家。一種寒地桑樹栽培種植方法，本方法為六步，第一步寒冷處理，第二步相對電導率測定，第三步超氧化物岐化酶SOD活性測定，第四步丙二醛MDA濃度測定，第五步葉綠素質量濃度測定，第六步光合性能測定。本發明用于寒地桑樹栽培種植。
文檔編號A01G7/06GK102783344SQ20121029936
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月22日 優先權日2012年8月22日
發明者吳庭貴 申請人:吳庭貴