專利名稱：一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法
技術領域：
本發明屬于食用菌栽培領域，具體涉及一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法。
背景技術：
蛹蟲草也稱北冬蟲夏草、北蛹蟲草、蟲草等，其有效成分和冬蟲夏草類似。自然界中野生蛹蟲草的資源稀缺，其產量受自然環境和氣候的影響很大，根本滿足不了人們的需求，目前市場上的蛹蟲草產品大多是人工培養的，人工培養的方式為(I)采集野生的蛹蟲草進行菌種的分離、純化，然后將蛹蟲草菌接種在固體培養基上，于20-25°C及一定的濕度和光照條件下培養，經35-45d子實體即可達到采收。姜明蘭等用野生菌進行組織分離，在PDA培養基上分離、純化出優良的原種，經人工馴化的原種在PDA液體培養基中擴大培養后，接種到大米培養基上，成功獲得子實體。張顯科等研究認為，高粱·米、小米、玉米渣和蠶蛹可以代替大米栽培蛹蟲草；(2)用液體深層發酵的方法人工生產蛹蟲草菌絲體。采用液體發酵的方法獲得菌絲體可以高效快速的得到某些有效成分，縮短生產周期。不少科研工作者對液體深層發酵的條件進行了探索。劉苗苗等用響應曲面法優化蛹蟲草液體培養條件，得出了蛹蟲草培養中最佳碳氮比和培養時間；唐芳榮，昌艷等以傳統工業廢料玉米漿、豆餅粉等作培養基，并對培養條件進行了優化。汪宇等以發酵得率為指標優化培養基成分，初步得到蛹蟲草液體培養條件和生長動力學，為蛹蟲草液體培養工業化生產提供了一定的理論依據；(3)采用繅絲廠副產物干的桑蠶或柞蠶蛹，通過復水后高溫滅菌，然后接種，在18-23°C發菌，約30d左右發菌完畢，然后將蛹體照光，一定時間后可獲得蛹蟲草。目前，采用大米發酵也是獲得蟲草子實體的重要方式，但是由于大米中缺少蟲體中特有的蛋白等營養物質，所獲得的子實體蟲草素等有效成分的含量偏低，質量難以保證，更有不法者以無機氮源代替有機氮，使獲得的子實體中主要活性成分蟲草素的含量很低，甚至沒有，干擾了蛹蟲草的市場。

發明內容
本發明的目的是針對上述現狀，旨在提供一種出草整齊、培養時間短、操作方便、成功率高，蟲草商品性好的柞蠶蛹蟲草盒式培養方法。本發明目的的實現方式為，一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法，具體步驟如下(I)接種前準備①挑出蠶繭中混合的死蠶蛹，用水洗掉蠶蛹表面的塵土及夾帶的毛片，晾干蠶蛹體表面水分，用臭氧或紫外線消毒30min ；②制備蟲草培養基250ml三角瓶中裝110_130ml液體培養基，用接種針在試管斜面培養基上刮取需用量的菌塊，放于三角瓶中，每瓶4-6個菌塊；23°C靜止培養24小時后搖床轉速90r/min輕搖，36h后搖床轉速120_130r/m，培養3_5天菌種較粘稠并有菌球出現；(2)接種
將液體菌種用10目無菌濾網過濾至滅過菌的罐頭瓶內，整個過程保持無菌操作，濾液中添加濾液體積O. 5-1. O倍的無菌水；接種時先用5ml注射器吸取菌液，從蠶蛹尾部數第二節處注射，注射深度l_2cm，每個蠶蛹的注射量O. 1-0. 5ml ；(3)蠶蛹僵化接種完畢后單層擺放在已消毒的培養室內的培養架上，溫度控制在16_18°C，1-3天接種處變干結痂；然后將蠶蛹轉移到滅過菌的培養盤內，每個蠶蛹之間留有空隙，單層擺放，升溫至13-18°C,每天通風30±10min, 4天后蠶蛹的尾部即僵化變硬；僵化時間7_10天，待環節處有菌絲出現，表示僵化完成；(4)出草管理將僵化好的蠶蛹擺放在盒內，盒內加10_20ml水，盒上覆蓋透明塑料薄膜，兩端留通氣孔，溫度保持在20-23°C，開始階段濕度70-80%，光線200-400 Lx，草長出來后，濕度85%以上，溫度20-23°C，每天通風8-15min ； (5)接種后的40-50天采收，采收時保持蟲草完整，不要折斷，采收后立即烘干，避光保存。本發明根據蠶蛹生理特點，采用蠶蛹盒式培養法，解決了柞蠶蛹栽培蟲草栽培過程中感染率低、易受雜菌污染、出草率低等問題；可充分滅菌，盒內溫、濕度易控制、調節，能充分光照，易采收。本發明出草整齊、培養時間短、操作方便、成功率高達95%以上，蟲草商品性好。
具體實施例方式本發明先清洗蠶繭、消毒、晾干；三角瓶中液體培養基，用接種針在試管斜面培養基上刮取需用量的菌塊，放于三角瓶中，搖床培養至有菌種較粘稠并有菌球出現；過濾至滅過菌的瓶內，菌球用無菌水沖洗，保持無菌操作；用注射器吸取菌液，從蠶蛹尾部數第二節處注射。單層擺放在消過毒的培養室內，接種處變干結痂，轉移到滅過菌的塑料盒內，至尾部僵化變硬，未僵化、有傷口的蠶蛹撿出，至環節處有菌絲出現；擺放在有通氣孔的塑料盒內，保持溫、濕度,長出蛹蟲草,采收,烘干。250ml三角瓶中所裝110_130ml液體培養基為PDA培養基。蠶蛹的尾部僵化變硬，傷口處流出的體液沾到其它蠶蛹上，用70%酒精擦拭消毒。培養室內的培養架層高45 ± 5cm,寬度60 ±6cm,長度80 ±8cm,培養架上鋪一層塑料窗紗，培養室內放一臺臭氧發生器。5ml注射器吸取菌液，從蠶蛹尾部數第二節處注射，注射深度l_2cm，每個蠶蛹的注射量 O. 1-0. 5ml ；將僵化好的蠶蛹擺放在長30 ± 5cm、寬20 ± 2cm、深10 ± Icm方形，有通氣孔的塑料盒內。下面用具體實施例詳述本發明。例I、(I)接種前準備①挑出蠶繭中混合的死蛹，用水洗掉蛹表面的塵土及夾帶的毛片，晾干蛹體表面水分，用臭氧消毒30min。
②制備蟲草培養基250ml三角瓶中裝IlOmlPDA培養基，用接種針在試管斜面培養基上刮取4個菌塊放于三角瓶中；23°C靜止培養24小時后搖床轉速90r/min輕搖，36h后搖床轉速120r/m，培養3天菌種較粘稠并有菌球出現；(2)接種，將液體菌種用10目無菌濾網過濾至滅過菌的罐頭瓶內，整個過程保持無菌操作，濾液中添加濾液體積O. 5倍的無菌水；接種時先用5ml注射器吸取菌液，從蠶蛹尾部數第二節處注射，注射深度1cm，每個蠶蛹的注射量O. Iml ；(3)蠶蛹僵化接種完畢后單層擺放在已消毒的培養室內，層高40cm，寬度54cm，長度72cm的培養架上，溫度控制在16°C，1_3天接種處變干結痂；然后將蠶蛹轉移到滅過菌的塑料盒內，每個蠶蛹之間留有空隙，單層擺放，控溫至13°C，每天通風20min，4天后蠶蛹的尾部即僵化變硬；僵化時間7-10天，待環節處有菌絲出現表示僵化完成； (4)出草管理將僵化好的蠶蛹擺放在長30cm、寬20cm、深IOcm方形，有通氣孔的塑料盒內，盒內加IOml水，盒上覆蓋透明塑料薄膜，兩端留通氣孔，溫度保持在20°C，開始階段濕度70%，光線200 Lx，草長出來后，濕度85%，溫度20°C，每天通風8min ；(5)接種后的50天采收，采收時保持蟲草完整，不要折斷，采收后立即烘干，避光保存。出草整齊、成功率95%。例2、(I)接種前準備①挑出蠶繭中混合的死蛹，用水洗掉蛹表面的塵土及夾帶的毛片，晾干蛹體表面水分，用臭氧或紫外線消毒30min，酒精表面滅菌。②制備蟲草培養基250ml三角瓶中裝120mlPDA培養基，用接種針在試管斜面培養基上刮取需用量的菌塊，放于三角瓶中，每瓶5個菌塊；23°C靜止培養24小時后搖床轉速90r/min輕搖,36h后搖床轉速125r/m,培養4天菌種較粘稠并有菌球出現；(2)接種，將液體菌種用10目無菌濾網過濾至滅過菌的罐頭瓶內，整個過程保持無菌操作，濾液中添加濾液體積O. 8倍的無菌水；接種時先用5ml注射器吸取菌液，從蠶蛹尾部數第二節處注射，注射深度I. 5cm，每個蠶蛹的注射量O. 2ml ；(3)蠶蛹僵化接種完畢后單層擺放在已消毒的培養室內，層高45cm，寬度60cm，長度80的培養架上，溫度控制在16°C，1-3天接種處變干結痂；然后將蠶蛹轉移到滅過菌的塑料盒內，每個蠶蛹之間留有空隙，單層擺放，升溫至16°C，每天通風30min，4天后蛹的尾部即僵化變硬；僵化時間8天，待環節處有菌絲出現表示僵化完成；(4)出草管理將僵化好的蠶蛹擺放在長30cm、寬20cm、深IOcm方，有通氣孔的形塑料盒內，盒內加15ml水，盒上覆蓋透明塑料薄膜，兩端留通氣孔，溫度保持在22°C，開始階段濕度80%，光線300 Lx，草長出來后，濕度90%，溫度22°C，每天通風IOmin ；(5)接種后的45天采收，采收時保持蟲草完整，不要折斷，采收后立即烘干，避光保存。出草整齊、成功率96%。例3、
(I)接種前準備①挑出蠶繭中混合的死蛹，用水洗掉蛹表面的塵土及夾帶的毛片，晾干蛹體表面水分，用臭氧或紫外線消毒30min，酒精表面滅菌。②制備蟲草培養基250ml三角瓶中裝130mlPDA培養基，用接種針在試管斜面培養基上刮取需用量的菌塊，放于三角瓶中，每瓶6個菌塊；23°C靜止培養24小時后搖床轉速90r/min輕搖，48h后搖床轉速130r/m,培養5天菌種較粘稠并有菌球出現；(2)接種，將液體菌種用10目無菌濾網過濾至滅過菌的罐頭瓶內，整個過程保持無菌操作，濾液中添加濾液體積I. O倍的無菌水；接種時先用5ml注射器吸取菌液，從蠶蛹尾部數第二節處注射，注射深度2. 0cm，每個蠶蛹的注射量O. 5ml ；(3)蠶蛹僵化接種完畢后單層擺放在已消毒的培養室內，層高50cm,寬度66cm,長度88cm的培 養架上，溫度控制在18°C，1_3天接種處變干結痂；然后將蠶蛹轉移到滅過菌的塑料盒內，每個蠶蛹之間留有空隙，單層擺放，升溫至18°C，每天通風40min，4天后蛹的尾部即僵化變硬；僵化時間7-10天，待環節處有菌絲出現表示僵化完成；(4)出草管理將僵化好的蠶蛹擺放在長35cm、寬22cm、深Ilcm方形，有通氣孔的塑料盒內，盒內加20ml水，盒上覆蓋透明塑料薄膜，兩端留通氣孔，溫度保持在23°C，開始階段濕度80%，光線400 Lx，草長出來后，濕度95%，溫度23 °C，每天通風15min ；(5)接種后的50天采收，采收時保持蟲草完整，不要折斷，采收后立即烘干，避光保存。出草整齊、成功率98%。
權利要求
1.一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法，其特征在于具體步驟如下 (1)接種前準備 ①挑出蠶繭中混合的死蠶蛹，用水洗掉蠶蛹表面的塵土及夾帶的毛片，晾干蠶蛹體表面水分，用臭氧或紫外線消毒30min ； ②制備蟲草培養基250ml三角瓶中裝110-130ml液體培養基，用接種針在試管斜面培養基上刮取需用量的菌塊，放于三角瓶中，每瓶4-6個菌塊；23°C靜止培養24小時后搖床轉速90r/min輕搖，36h后搖床轉速120_130r/m，培養3_5天菌種較粘稠并有菌球出現； (2)接種 將液體菌種用10目無菌濾網過濾至滅過菌的罐頭瓶內，整個過程保持無菌操作，濾液中添加濾液體積O. 5-1. O倍的無菌水；接種時先用5ml注射器吸取菌液，從蠶蛹尾部數第二節處注射，注射深度l_2cm，每個蠶蛹的注射量O. 1-0. 5ml ； (3)蠶蛹僵化 接種完畢后單層擺放在已消毒的培養室內的培養架上，溫度控制在16-18°C，1-3天接種處變干結痂；然后將蠶蛹轉移到滅過菌的培養盤內，每個蠶蛹之間留有空隙，單層擺放，升溫至13-18°C,每天通風30±10min, 4天后蠶蛹的尾部即僵化變硬；僵化時間7_10天，待環節處有菌絲出現，表示僵化完成； (4)出草管理 將僵化好的蠶蛹擺放在盒內，盒內加10_20ml水，盒上覆蓋透明塑料薄膜，兩端留通氣孔，溫度保持在20-23°C，開始階段濕度70-80%，光線200-400 Lx,草長出來后，濕度85%以上，溫度20-23°C,每天通風8-15min ； (5)接種后的40-50天采收，采收時保持蟲草完整，不要折斷，采收后立即烘干，避光保存。
2.根據權利要求I所述的一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法，其特征在于250ml三角瓶中所裝110-130ml液體培養基為PDA培養基。
3.根據權利I所述一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法，其特征在于蠶蛹的尾部僵化變硬，傷口處流出的體液沾到其它蠶蛹上，用70%酒精擦拭消毒。
4.根據權利要求I所述的一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法，其特征在于尾部未僵化、有傷口的蠶蛹撿出。
5.根據權利I所述一種昨蠶蛹蟲草盒式培養方法，其特征在于培養架層高45±5cm,寬度60±6cm,長度80±8cm,培養架上鋪一層塑料窗紗單層擺放,培養室內放一臺臭氧發生器。
6.根據權利I所述一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法，其特征在將僵化好的蠶蛹擺放在長30±5cm、寬20±2cm、深10± Icm方形，有通氣孔的塑料盒內。
全文摘要
本發明涉及一種柞蠶蛹蟲草盒式培養方法，包括蠶蛹清洗、消毒、接種、蟲草培養。菌種用PDA液體培養基培養，培養基高溫滅菌接種后搖床23℃左右培養至培養液較粘稠并有菌球出現。培養好的液體菌種過濾至無菌瓶內，菌球用菌液體積0.5-1倍的無菌水沖洗2-3次，整個過程無菌操作。接種時用注射器吸取菌液，從蠶蛹尾部數第二節處注射；接種后單層擺放于消過毒的培養室內，接種處變干結痂，轉移到滅過菌的塑料盒內培養，至尾部僵化變硬、環節處有菌絲出現時擺放在有通氣孔盒內，保持溫、濕度，直至長出蛹蟲草，采收，烘干。本發明溫、濕度易控制、調節，能充分光照，易采收，蟲草培養時間短、操作方便、出草整齊，成功率高達95%以上，蟲草商品性好。
文檔編號A01G1/04GK102907256SQ201210402218
公開日2013年2月6日 申請日期2012年10月19日 優先權日2012年10月19日
發明者楊德, 周明, 白志尚, 郭鵬, 李露, 薛淑靜, 程薇, 高虹, 史德芳, 葉麗秀, 張金木, 王俊 申請人:湖北省農業科學院農產品加工與核農技術研究所